石榴皮炮制前后总鞣质及鞣花酸、安石榴苷含量变化研究

崔园园,陈志敏,张 美,熊 瑞,李文兵,胡昌江*

(1.成都中医药大学,四川 成都 611137；2.四川新绿色药业科技发展股份有限公司，四川 成都 610081)



石榴皮炮制前后总鞣质及鞣花酸、安石榴苷含量变化研究

崔园园1,陈志敏1,张 美1,熊 瑞1,李文兵2,胡昌江1*

(1.成都中医药大学,四川 成都 611137；2.四川新绿色药业科技发展股份有限公司，四川 成都 610081)

目的：比较石榴皮炮制前后总鞣质、鞣花酸、安石榴苷的含量变化，拟阐明炮制对石榴皮中鞣质类成分的影响。方法：采用紫外可见分光光度计法测定鞣质的含量，高效液相色谱法测定鞣花酸、安石榴苷的含量，对石榴皮生品、炒黄品和炒炭品进行比较。结果：不同批次石榴皮炮制前后鞣质的平均含量分别为：生品15.03%、炒黄品17.54%、炒炭品11.07%；鞣花酸的平均含量分别为：生品4.33%、炒黄品4.20%、炒炭品4.48%；安石榴苷的平均含量分别为：生品38.76%、炒黄品50.23%、炒炭品16.45%。结论：炮制对石榴皮中鞣质类成分的含量有显著影响。

石榴皮；炮制；鞣质；鞣花酸；安石榴苷

石榴皮为石榴科植物石榴PunicagranammL.的干燥果皮，其性温，味酸、涩，具有涩肠止泻、止血、驱虫等作用，在民族医药中得到广泛使用：石榴皮生品长于驱虫、涩精、止带，多用于治疗虫积腹痛、滑精、白带、脱肛、疥癣[1]；炒后收涩作用增强[2]，多用于指肠风下血。

石榴皮中鞣质类成分占总重量的10%～20%[3]，是石榴皮的重要组成成分，是影响石榴皮质量的主要因素。国内外研究[4-6]结果表明，安石榴苷、鞣花酸是石榴皮鞣质类成分的主体，其含量远远高于没食子酸等其他鞣质成分，可用来评价石榴皮的质量。而炮制后以上两种成分有何变化、对石榴皮功效、质量有无影响目前尚无报道。为此，本实验以总鞣质、安石榴苷和鞣花酸为指标，建立含量测定方法，拟作为石榴皮饮片炮制后评价的质量标准。

1 仪器与试药

1.1 仪器

LC-20AT型高效液相色谱仪(日本岛津)，TU-1950型紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)，KQ5200DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)，BP211D型电子天平，高速粉碎机(永康市溪岸五金药具厂)。

1.2 药材与试剂

3个批次的石榴皮生品、炒黄品和炒炭品购自四川国强中药饮片有限公司，批号分别为141101、141102、141103，编号1、2、3。没食子酸(批号 TOOP-Z871)，鞣花酸(批号14668)，安石榴苷(批号 P0023)对照品，甲醇(色谱纯)，水(纯净水)，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 鞣质含量测定

按照2010年版中国药典一部石榴皮项下鞣质含量测定法测定，结果见表1。

2.2 鞣花酸、安石榴苷含量测定

2.2.1 对照品溶液制备 分别精密量取鞣花酸、安石榴苷对照品1.07mg、5.40mg，置5mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

表1 石榴皮不同炮制品鞣质类成分的含量测定 (%)

2.2.2 供试品溶液制备 分别精密称定各样品粉末(过3号筛)约0.2g，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇50mL盖塞称重，超声30min(250W,25kHz)，放冷，再次称重，补足重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

2.2.3 色谱条件 Phenomenex C18色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)，流动相甲醇-0.4%磷酸梯度洗脱，如表2所示，流速1.0mL·min-1，检测器检测波长270nm，柱温25℃。

表2 流动相梯度洗脱程序 (%)

2.2.4 系统适应性试验 取对照品溶液和供试品溶液，在上述色谱条件下进行分析，结果对照品色谱峰与其他峰均能达到基线分离，供试品色谱峰的保留时间和峰形与对照品一致，表明此分析条件可行。结果见图1。

A．安石榴苷和鞣花酸混合对照品；B．供试品；1.α-安石榴苷；2.β-安石榴苷；3.鞣花酸

图1 混合对照品和供试品溶液的液相色谱

2.2.5 线性关系考察 取上述混合对照品溶液适量，过0.45μm微孔滤膜，分别进样4、6、8、10、12、14、16μL，按上述条件进行检测，测定各色谱峰的峰面积。以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。鞣花酸：Y=393 731x+431 721(r=0.999 4)；安石榴苷：Y=14 544x+7 415.5(r=0.999 5)和Y=18 836x+38 867(r=0.999 5)。结果表明鞣花酸、安石榴苷分别在0.856～3.424μg、4.32～17.28μg线性关系良好。

2.2.6 精密度试验 取对照品溶液，按色谱条件重复进样5次，进样量为10μL，计算得RSD分别为0.99%、1.19%，表明仪器精密度良好。

2.2.7 稳定性试验 取石榴皮生品样品，按照供试品溶液的制备方法制得供试品溶液，分别在0、2、4、8、12、24h进样，每次进样量10μL，计算得RSD分别为1.34%、1.91%，表明样品溶液在24h内稳定。

2.2.8 重复性试验 取石榴皮生品0.2g，精密称取5份，按照供试品溶液的制备方法制备，分别按色谱条件进样，进样量为10μL，计算得RSD分别为1.00%、1.05%。表明本方法的重复性良好。

2.2.9 加样回收率试验 取石榴皮生品样品5份，各20mg，精密称定，分别精密加入混合对照品鞣花酸0.963mg,安石榴苷7.960mg，按“2.2.2”项下供试品溶液的制备方法制备，按含量测定方法测定含量，计算回收率，结果见表3、表4。

2.2.10 样品含量测定 取3批石榴皮不同炮制品样品，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，照上述色谱条件进样10μL测定，计算含量，结果见表1。由表1可见，石榴皮不同炮制品中鞣质和安石榴苷的含量显著不同，炒黄品中鞣质、鞣花酸和安石榴苷的总百分含量较炒炭品高，说明加热炮制对石榴皮中鞣质类成分含量有显著影响。

3 结论

中国药典规定石榴皮中所含鞣质不得低于10.0%[7]。本试验所得：石榴皮3种炮制规格饮片中鞣质的含量都达到药典要求，且炒炭品中鞣质含量降低，鞣花酸含量升高。这与文献[8-9]报道的在加热炮制过程中，石榴皮可水解鞣质的苷键或酯键断裂，分解产生游离的鞣花酸等成分的试验结果相吻合。中药炒炭主要发挥止血的作用，传统认为：鞣质是“炭药止血”的物质基础，鞣质增加则止血作用增强；有研究[10]表明鞣花酸具有凝血作用，是一种有效的凝血剂，且小分子的鞣花酸更有利于人体吸收。石榴皮炒炭后止血作用增强是鞣质和鞣花酸等成分共同作用的结果，但石榴皮炭炮制加工到何种程度时止血作用最强还有待研究。

表3 鞣花酸加样回收率 (mg)

表4 安石榴苷加样回收率 (mg)

大量现代药理研究表明石榴皮鞣质类成分可有效预防和治疗心脑血管疾病，在抗菌、抗病毒，治疗肿瘤、胃肠道疾病，调节免疫等方面具有显著效果[11]。本次实验结果显示，以总鞣质、安石榴苷和鞣花酸为指标，石榴皮炒黄品中鞣质类成分含量较炒炭品高。而两种炮制品在主治、功效上有何差异，还需进一步实验研究。本实验建立同时测定石榴皮中安石榴苷和鞣花酸含量的高效液相色谱方法，灵敏度高，分离度好，测定迅速，结果准确，为石榴皮饮片的炮制和质量控制提供了实验依据。

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[5] 刘振平,陈祥贵,杨潇,等. RP-HPLC同时测定石榴皮提取物中的3种鞣质成分[J].中国中药杂志,2011,36(19):2647.

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(责任编辑：余 婷)

Study on the Variation in Content of Tannins 、Ellagic acid and Punicalagin in Granatum Before and After Processing

Cui Yuanyuan,Hu Changjiang,Chen Zhimin1,Zhang Mei1,Xiong Rui2,Wen Jianxia1*

(Chengdu University of Chinese Medicine,Chengdu 611137,China)

Objective:to compare the content changes of Granatum before and after processing of the tannins,ellagic acids,punicalagins,intends to clarify the influence of processing on Granatum in tannins chemical composition. Methods:UV method for determining the content of tannins,HPLC method for determining the content of ellagic acid,punicalagins,to compare the raw materials for Granatum,the fried yellow goods and the fried carbon products. Results:The average content of tannins in different batches of Granatum before and after processing are as foiiows:Raw product 15.03%,Fried yellow product 17.54%,Fried carbon products 11.07%;The average content of ellagic acids:Raw product 4.33%,Fried yellow product 4.20%,Fried carbon products 4.48%;The average content of punicalagins:Raw product 38.76%,Fried yellow product 50.23%,Fried carbon products 16.45%。Conclusion:there is a significant effect of processing on the content of tannins compounds in Granatum.

Granatum;Processing;Tannin;Ellagic Acid;Punicalagin

2015-05-30

崔园园(1991-)，成都中医药大学硕士研究生，研究方向为中药炮制与制剂。

胡昌江(1952-)，成都中医药大学教授、博士生导师，研究方向为中药炮制学。E-mail：hhccjj@hotmail.com

R284

A

1673-2197(2015)21-0038-03

10.11954/ytctyy.201521016