雌激素受体及芳香化酶在牙龈癌组织中的表达和意义

王秋锐，杨 健，赵华平，张英怀

（1．北京市通州区新华医院口腔科，北京101100；2．河北医科大学第二医院口腔颌面外科，河北石家庄050000）

雌激素受体及芳香化酶在牙龈癌组织中的表达和意义

王秋锐1，杨 健1，赵华平2，张英怀2

（1．北京市通州区新华医院口腔科，北京101100；2．河北医科大学第二医院口腔颌面外科，河北石家庄050000）

目的：观察牙龈癌中雌激素受体（ER）与芳香化酶的表达情况，探讨局部雌激素及芳香化酶在牙龈癌中的作用与关系。方法：免疫组化过氧化物酶标记的链酶卵白素法测定雌激素受体及芳香化酶在牙龈癌中的表达。结果：牙龈癌组雌激素受体及芳香化酶的表达阳性率分别为50%和42．86%，正常对照组分别为13．33%和6．67%（P＜0．05）；牙龈癌中雌激素受体与芳香化酶之间未见明显相关性。结论：牙龈癌有一定的雌激素依赖性；芳香化酶在牙龈癌组织中表达升高，但芳香化酶并不是影响局部雌激素受体升高的唯一因素。

牙龈；鳞状细胞癌；雌激素受体；芳香酶；免疫组织化学

［Chinese Journal of Conservative Dentistry，2015，25（5）：304］

自从Vittek等［1］第一次提供了牙龈可能是雌激素靶组织的直接依据后，许多研究证明牙龈是性激素受体的靶器官，性激素代谢紊乱与牙龈的许多疾病有关［2－4］。芳香化酶能催化雄激素转化为雌激素，是雌激素局部生物合成中的限速酶，它在许多组织（如卵巢、脂肪、肾上腺等）中均有表达。芳香化酶的过度表达，与异常的循环雌激素水平和（或）组织中局部升高的雌激素浓度有关。牙龈癌是常见的口腔癌之一，曾有研究认为其具有一定程度的雌激素依赖性［5］，而牙龈癌与芳香化酶的相关研究尚未见报道。本文对牙龈癌组织中ER及芳香化酶的表达进行研究，并对它们的相互关系进行探讨，以期为牙龈癌的临床治疗提供新思路。

1 材料和方法

1．1 主要材料、试剂和仪器

小鼠抗人雌激素受体（ER，Zymed公司，美国）；多克隆兔抗人胎盘芳香化酶抗体（R－11－4，使用浓度为1∶800；由美国Houptman－woodward医学研究所提供）；兔抗人芳香化酶抗血清aromatase、多抗原液、Hauptman－Woodward（美国医学研究所）；石蜡切片机（Leica RM2135，德国）；QP－B2切片漂烘温控仪（安徽省电子科学研究所）；HZS－H水浴震荡器（哈尔滨东联电子技术开发有限公司）；ZD－Ⅲb医学实验用微波炉（上海中达医学应用研究所）；PW／10－002台式保温培养箱（重庆实验设备厂）；PM－10ADS双目显微镜（Olympus，日本）。

1．2 样本采集

牙龈癌组28例（男15人，女13人），年龄28～74岁（平均59．7岁）。牙龈癌标本均来自河北医科大学第二医院1998～2011年手术切除的存档石蜡标本，切片后进行HE染色，由病理学专家根据WHO标准重新阅片确诊。对照组正常牙龈15例（男7人，女8人），年龄17～64岁（平均45．9岁）。来自颌骨囊肿开窗术切取的牙龈组织，经HE染色后阅片确诊。以上所有患者均无激素治疗史。

1．3 方法

每个蜡块均切片3张，每片5μm，1张阴性对照，另2张分别作ER及芳香化酶染色。石蜡切片常规脱蜡至水，蒸馏水漂洗5 min；50 mL／L H2O2甲醇振洗25 min，PBS振洗5 min×3次；用0．01 mol／L枸橼酸盐修复液进行微波抗原修复，92～98℃修复10 min，PBS振洗5 min×3次；正常山羊血清封闭，37℃孵育30 min；弃去血清，滴加一抗，4℃过夜；PBS振洗5 min×3次，滴加生物素化二抗，37℃孵育25 min，PBS振洗5 min×3次；滴加辣根酶标记的链酶卵白素，37℃孵育20 min，PBS振洗5 min×3次；DAB显色，漂洗，苏木素复染，脱水、透明、封片。

1．4 结果判断

ER以细胞核内出现棕黄色颗粒，着色高于背景底色为阳性。染色分级标准：①无阳性细胞为阴性（－）；②阳性细胞数＜25%为弱阳性（＋）；③阳性细胞数25%～50%为中度阳性（＋＋）；④阳性细胞数＞50%为强阳性（＋＋＋）。

芳香化酶阳性反应物质为棕黄色细颗粒状，位于细胞浆中。分级标准：①无阳性细胞为阴性（－）；②阳性细胞数＜5%为弱阳性（＋）；③阳性细胞数5%～25%为阳性（＋＋）；④阳性细胞数＞25%为强阳性（＋＋＋）。

ER与芳香化酶用已知阳性的乳腺癌标本作阳性对照，以PBS替代一抗作为阴性对照。

1．5 统计学分析

采用SPSS 17．0软件进行统计分析，各组间阳性率的比较用χ2检验，两指标间的相关关系用列联表的χ2检验，出现小值频数时用Fisher精确概率法。检验水准α＝0．05。

2 结果

2．1 ER在牙龈癌组和对照组中的表达

牙龈癌组、对照组ER的阳性率分别为50%、13．33%，两组相比有显著性差异（P＜0．05）。对照组中，15例正常牙龈组织中2例有ER表达，均为中度阳性，余皆为阴性（表1）。ER阳性部位位于牙龈上皮细胞的胞核（图1），主要在棘层细胞表达，基底层细胞几乎不表达。在28例牙龈癌中ER有14例为阳性，其中强阳性2例，中度阳性3例，弱阳性9例，余皆为阴性（表1）。其阳性部位主要在肿瘤上皮细胞的胞核内（图2）。

表1 ER在牙龈癌组和对照组中的表达情况

2．2 芳香化酶在牙龈癌组和对照组中的表达

牙龈癌组和对照组芳香化酶的染色阳性率分别为42．86%、6．67%，两组相比有显著性差异（P＜0．05）。对照组中，15例正常牙龈组织中芳香化酶仅有1例表达，为弱阳性，余皆为阴性（表2）。芳香化酶阳性部位位于牙龈组织固有层中的少数炎症细胞的胞浆（图3）。在28例牙龈癌中芳香化酶有12例为阳性，其中强阳性3例，中度阳性5例，弱阳性4例，余皆为阴性（表2）。阳性部位主要在炎症细胞（主要是浆细胞及中性粒细胞，淋巴细胞几乎不表达）的胞浆（图4），在癌细胞与固有层的成纤维细胞也有表达（图5～6）。

表2 芳香化酶在牙龈癌组和对照组中的表达情况

2．3 牙龈癌中ER表达与病理学分级及患者性别的关系（表3～4）

在分级不同（高、中、低分化）的牙龈鳞状细胞癌中ER的表达情况未见明显差异。在不同性别的牙龈癌病人中ER的表达情况未见明显差异。

表3 ER在不同分化的牙龈鳞状细胞癌中的表达情况

表4 ER在不同性别的牙龈癌病人中的表达情况

2．4 牙龈癌中ER与芳香化酶之间的关系

牙龈癌中ER与芳香化酶的表达未见明显的相关性（P＞0．05）（表5）。

表5 牙龈癌中ER与芳香化酶之间的关系

图1 正常牙龈组织中，ER阳性部位在牙龈上皮细胞的胞核（SP，×400）

图2 牙龈癌组织中，ER阳性部位主要在肿瘤上皮细胞的胞核内（SP，×400）

图3 正常牙龈中，芳香化酶阳性部位在牙龈组织固有层中的少数炎症细胞的胞浆（SP，×400）

图4 牙龈癌组织中，芳香化酶阳性部位主要在炎症细胞的胞浆（a．SP，×200；b，SP×400）

图5 牙龈癌组织中，芳香化酶在癌细胞中的表达（SP，×400）

图6 牙龈癌组织中，芳香化酶在成纤维细胞中的表达（SP，×400）

3 讨论

若病变组织对雌激素有反应，则病变细胞应表达ER。28例牙龈癌中，14例中有ER表达，其阳性部位主要位于肿瘤上皮细胞胞核中，牙龈癌组与正常牙龈组 ER的阳性率有显著性差异（P＜0．05）。可以推测ER与牙龈癌的发生、发展有关，牙龈癌具有一定的雌激素依赖性。芳香化酶抑制剂能够特异性地抑制芳香化酶的活性从而降低雌激素的水平，已成为治疗多种雌激素依赖性疾病的新型药物。国外有学者对16例未绝经的子宫肌瘤患者进行前瞻性的临床研究表明，应用芳香化酶抑制剂（来曲唑）后子宫肌瘤的体积明显减小［6］。在乳腺癌的治疗中，Balakrishnan等发现，对雌激素受体阳性的老年乳腺癌患者，与其他治疗方法相比，芳香化酶抑制剂的先期治疗可能最有效［7］。Niikaw等在对非小细胞肺癌患者研究后发现肿瘤组织中的雌激素浓度显著高于来自同一患者的非肿瘤组织，且雌激素浓度与组织中芳香化酶的表达、ERα（雌激素受体α）和ERβ（雌激素受体β）的状态、肿瘤的大小成正比，体外实验还显示在ERα和ERβ表达阳性的组织中应用雌激素促进癌细胞增殖［8］。推测，采用芳香化酶抑制剂对ER阳性牙龈恶性肿瘤进行内分泌治疗可望有效，但目前还缺乏大量的循证医学证据和临床实验研究。

本研究表明芳香化酶在牙龈癌中的表达较正常牙龈组织明显增加，芳香化酶主要在炎症细胞（主要是浆细胞及中性粒细胞，淋巴细胞几乎不表达）表达，在癌细胞与固有层的成纤维细胞也偶有表达。提示芳香化酶与牙龈癌的发生发展有关，它可能通过在炎细胞与成纤维细胞中的旁分泌及癌细胞中的自分泌作用、刺激牙龈癌中局部微环境雌激素浓度升高，从而作用于牙龈癌的生长。但ER与芳香化酶之间未见明显相关性（P＞0．05），表明在牙龈癌中芳香化酶可能并不是局部ER升高的唯一因素。这与对乳腺癌的研究结果一致［9－10］，在乳腺癌中其他的酶，如硫酸酯酶、磺基转移酶、17β－羟类固醇脱氢酶（17β－hydroxysteroid dehydrohenase，17β－HSD）也影响雌激素的合成。Utsunomiya H等［11］在对子宫内膜增生及子宫内膜癌的研究发现，17β－HSD2能通过调节其组织中的雌二醇水平来调节雌激素的作用。他们认为在子宫内膜增生及子宫内膜瘤中芳香化酶可能催化形成的雌激素多为雌酮，17β－HSD2可催化雌酮（一种较弱的雌激素）转化为雌二醇，在子宫内膜疾病的进程中扮演重要角色。而牙龈癌是否与乳腺癌或子宫内膜疾病类似，就需要研究芳香化酶和其他酶（硫酸酯酶、磺基转移酶、17β－HSD）的作用及其与雌激素的关系，从而探明牙龈癌中局部合成的雌激素的生物学意义。

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Estrogen receptor and aromatase expression in gingival carcinoma tissue

WANG Qiu－rui*，YANG Jian，ZHAO Hua－ping，ZHANG Ying－huai
（*Beijing Tongzhou District Xinhua Hospital，Tongzhou 101100，China）

AIM：To investigate the expression of estrogen receptor（ER）and aromatase in gingival carcinoma．METHODS：ER and aromatase were detected by immunohistochemical staining SPmethod in gingival carcinoma（n＝28）and normal gingival tissues（n＝15）．RESULTS：Positive expression rates of ER and aromatase expression in gingival carcinoma were 50．00%and 42．86%，in normal gingival tissueswere 13．33%and 6．67%，respectively（P＜0．05）．No significant correlation was found between ER and aromatase in gingival carcinoma．CONCLUSION：Estrogen metablism might be related to gingival carcinoma．Aromatase is not the exclusive reason of the high positive rate of ER．

gingiva；squamous cell carcinoma；estrogen receptor（ER）；aromatase；immunohistochemistry

R780．2

A

1005－2593（2015）05－0304－04

10．15956／j．cnki．chin．j．conserv．dent．2015．05．009

2015－01－08；

：2015－03－19

王秋锐（1977－），男，汉族，河北人。主治医师