安替胰抗降糖作用实验研究

杨钧，张艺芳，何爱武，李青

陕西中药研究所药理研究部，陕西咸阳 712000

随着我国人们生活水平的日益提高和人口老龄化，糖尿病患病率迅速升高，对糖尿病的防治已经成为了医药学工作者的重要课题。安替胰抗为陕西新药技术开发中心开发的拟用于降低血糖的保健品，主要用于高血糖人群的降糖保健或者辅助用药。为了观察其不同样品的降血糖作用，进行安替胰抗对四氧嘧啶致小鼠高血糖动物模型的影响作用研究，现报道如下。

1 材料

1.1 实验动物

SPF昆明小鼠，雌雄兼用，体重18～22 g，由西安交通大学医学院实验动物中心提供，许可证号：医动字第08-005号。

1.2 药物

四氧嘧啶（sigma公司）、安替胰抗 1、2、3 号样品均由陕西新药技术开发中心提供；盐酸苯乙双胍片（降糖灵片）：25mg/片，山东省莒南制药厂，批号070203。

1.3 仪器

PB203-N电子精密天平，梅特勒—托利多；罗康全活力型血糖检测仪，德国罗氏诊断有限公司；罗康全活力型血糖试纸 批号：22961131，德国罗氏诊断有限公司。

2 方法

安替胰抗对四氧嘧啶型高血糖小鼠降糖作用的研究预实验：实验动物适应性饲养3 d，60只小鼠，随机分为6组，每组10只，雌雄各半。分别IP四氧嘧啶（少量多次配制，临用时用冷藏的生理盐水配制，黑色塑料纸包裹容器，置冰浴上）160mg/kg，180mg/kg，200mg/kg，220mg/kg，IP容量均为0.1ml/kg。IP前12 h禁食不禁水，注射后3 d，用血糖仪检测血糖（测前12 h禁食不禁水），所有动物均尾静脉采血，观测血糖升高水平及成模率，最后确定糖尿病小鼠造模IP四氧嘧啶的最佳剂量应为200mg/kg。

实验动物适应性饲养3 d，随机挑选10只小鼠，雌雄各半，作为为正常对照组。正常对照组小鼠，IP同容量生理盐水。其余小鼠均IP四氧嘧啶200mg/kg，3 d后测定小鼠的血糖水平，测前12 h禁食不禁水。从IP四氧嘧啶小鼠中挑选血糖值大于11.1 mmol/L小鼠[1]按血糖水平平均分为模型对照组、安替胰抗1、2、3号样品组、阳性药物组，每组10只，雌雄各半。

正常对照组、模型对照组ig同容量生理盐水，阳性对照组 ig 盐酸苯乙双胍（75mg/kg）,安替胰抗 1、2、3 号样组分别 ig 安替胰抗 1、2、3 号 0.9、4.0、1.5 g/kg， 给药容量均为20ml/kg。1次/d，连续28 d。分别于给药14、28天测定小鼠血糖值，观测血糖水平的变化。实验过程中观察小鼠情况，同时每周称量一次体重，观测体重增长情况。所有数据均采用T检验进行统计分析[2-4]。

3 结果

3.1 对模型小鼠一般情况及体重的影响

给药过程中，模型对照组小鼠与正常对照组小鼠比较，各鼠均逐渐出现毛发枯槁，发黄、身体消瘦、多尿等症状，安替胰抗1、2号样品组则部分小鼠出现以上变化，安替胰抗3号样则基本无此情况出现。造模后动物体重会发生增长缓慢的情况，1、2、3号样均对体重增长均有一定的改善作用，以3号样为最佳。

3.2 对模型小鼠血糖值的影响

结果见表1。结果表明，模型动物制作均成功，各组与正常对照组比较均有极显著性差异（P＜0.01），安替胰抗1、2号样对模型动物血糖值影响不大，而3号样在给药14、28 d均能显著降低模型动物血糖值（P＜0.05），随着给药时间的增加，其对抗四氧嘧啶所致小鼠高血糖效果越佳。

表1 安替胰抗对四氧嘧啶高血糖模型小鼠血糖值的影响[（±s)，n=10]

表1 安替胰抗对四氧嘧啶高血糖模型小鼠血糖值的影响[（±s)，n=10]

注：组间进行 t检验， 与正常对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型对照组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。

组别 剂量（g/kg）正常对照组模型对造组安替胰抗1号安替胰抗2号安替胰抗3号盐酸苯乙双胍血糖值（mmol/L）给药前 给药第14天 给药第28天--0.9 4.0 1.5 0.075(5.09±1.02)△△(19.41±2.06)**(19.94±2.44）**(18.39±2.82)**(18.49±1.53)**(19.21±2.15)**(5.28±0.82)△△(21.37±1.89)**(20.19±2.35)**(19.65±2.17)**(18.06±1.84)**△△(13.64±1.67)**△△(5.23±0.63)△△(23.21±2.64)**(21.16±2.62)**(21.02±3.57)**(13.02±1.32)**△△(10.97±1.69)**△△

4 讨论

四氧嘧啶是一种特异性β细胞毒剂，可选择性破坏实验动物的胰岛β细胞，引发实验性糖尿病[5]，此法制作模型血糖值维持高值时间较长，比较稳定。造模过程中，因四氧嘧啶容易分解，故配制过程较为关键，应多次少量配制，使用中避光保温，保证模型成功率，另外腹腔注射四氧嘧啶用量会影响模型成功率。我们进行了预试，综合造模成功率及四氧嘧啶用量，发现采用200mg/kg剂量造模最为经济稳定。

从该实验情况分析，安替胰抗1、2号样对于四氧嘧啶导致的高血糖小鼠均无显著疗效。但是在实验过程中观察到2组小鼠基本活动自如，毛发光滑，与正常对照组比较体重增加程度前期基本相同，血糖值与模型对照组比较相对稳，不再上升。安替胰抗3号样，动物体重稳定，毛发正常。另外观测到小鼠饮水量比前期有明显下降，血糖值与模型对照组比较在给药第14、28 d有极显著下降（P＜0.01），并且随给药时间的增加，其对抗四氧嘧啶所致的血糖升高效果越佳，有一定的时效关系。其确切作用还需进一步研究，明确其量效关系及作用机理，进行进一步开发。

[1]李仪奎,金若敏,王钦茂,等.中药药理实验方法学[M].2版.上海:上海科学技术出版社,2006：604.

[2]嵇扬，张癸荣，王文俊.建立四氧嘧啶糖尿病模型的研究[J].中医药学刊,2003,21(7):1125-1126.

[3]周晶,孟林,黄建安,等.地骨皮对四氧嘧啶糖尿病小鼠的降糖作用[J].中成药,2001,6(23):424-425.

[4]嵇扬,陈善,张癸荣,等.枳蓂水提取液对四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖和肝糖原含量的影响[J].中药材,2002,3(25):190-191.

[5]Brodof BN.Diabetes Mellitus and Obesity[M].Baltlmone Condon：Williams Wilkigs,1982：273.