HPLC法测定阿日申—18中栀子苷的含量

包长龙　萨茹拉　赵东鲲

[摘 要] 目的：测定阿日申-18中栀子苷的含量。方法：采用HPLC法，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为乙腈-水（15∶85），检测波长为238nm，流速为1.0ml/min。结果：栀子苷在0.0650～0.8125μg/ml范围内呈良好的线性关系。栀子苷平均加样回收率为101.7%，RSD为1.5%（n=9）。结论：该方法简便、灵敏，可用于制剂的质量控制。

[关键词] 阿日申-18；栀子苷；HPLC

[中图分类号]R284.1 [文献标志码] A [文章编号]1007-8517（2015）06-0013-02

阿日申-18是由枫香脂、冬葵果、决明子、党参、草乌（制）、麻黄、苦参、黄精、栀子、文冠木、木香、五灵脂（制）、石菖蒲、诃子、川楝子、瞿麦、黑云香、人工麝香十八味药组成的水丸，该方具有清热、泻火、凉血的功效[1-2]，可治疗银屑病、皮肤瘙痒、湿疹、疖肿、梅毒等各种皮肤病及风湿病症。该方主要成分之一栀子对本方临床疗效有重要作用，本文采用高效液相色谱法测定栀子中主要有效成分栀子苷的含量[3]。实验表明，该方法简单、准确、重现性好，可有效的控制产品的质量，可作为质量控制的方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Alltech高效液相色谱仪Series1500，UV201紫外检测器，自动进样器；TP-300超声仪。

1.2 试药 栀子苷对照品（批号：110749-200613，中国药品生物制品检定所提供）；阿日申-18（批号：080705、090616、090617）由内蒙古通辽市蒙医研究所制剂室提供。

2 方法和结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Phenomenex C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-水（15∶85）；流速：1.0ml/min；进样量：10μl；柱温：30℃；检测波长：238nm。理论塔板数按栀子苷峰计算应不低于3000。

2.2 对照品溶液的制备 称取栀子苷对照品16mg，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5ml，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得（制成每1ml含栀子苷30μg的溶液）。

2.3 样品溶液的制备 取装量差异项下的本品适量，研细，取约1.6g，精密称定，置100ml碘量瓶中，加入甲醇25.0ml，称定重量，超声处理（功率160W，50kHz）30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。量取续滤液3.0ml，置10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。

2.4 阴性对照试验 按上述方法制备样品溶液和对照品溶液。另取阴性样品（按处方比例并以相同工艺制备的无栀子的样品），按阿日申-18溶液制备法制得阴性对照溶液。分别精密吸取阴性溶液、阿日申-18溶液、对照品溶液各10μl，注入Alltech高效液相色谱仪Series1500，在同一色谱条件下进行测定，结果：阴性色谱图中，在与栀子苷对照品及样品阿日申-18色谱图相同保留时间处无色谱峰出现，表明配方中的其他组分对阿日申-18中栀子苷的测定无干扰。

2.5 线性关系考察 精密吸取对照品溶液1、2、5、8、10、15、20、25μl分别进样，按上述色谱条件进行测定，以峰面积为纵坐标（Y），以对照品进样量为横坐标（X），绘制标准曲线。结果栀子苷在0.3762～3.7620μg/ml范围内线性关系良好，回归方程为：Y=1.5E+6X+3692.7，r=0.99985。

2.6 精密度试验 精密量取栀子苷对照品溶液10μl，在上述色谱条件下连续进样6次，测定栀子苷峰面积，结果栀子苷峰面积的RSD（n=6）为1.2%。

2.7 重复性试验 精密称取同一批样品（批号：090616）6份，研细，按上述样品制备方法制备样品溶液，在上述色谱条件下进行分析测定，测得每份样品含量。结果栀子苷的平均含量（n=6）为2.11mg/g，RSD为0.1%。见表1。

2.8 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、10、15、20h取样10μl，按上述色谱条件进样测定。RSD（n=6）为0.2%，表明供试品溶液20h内稳定。

2.9 加样回收试验 取供试品（含量1.864mg/g）9份，各约0.8g，精密称定，分别置9个具塞锥形瓶中，再分别在其中3个具塞锥形瓶中各精密加入浓度为0.1738mg/ml的栀子苷对照品甲醇溶液5ml（约相当于供试品含有量的75%）及甲醇溶液20ml，另3个具塞锥形瓶中各精密加入上述对照品溶液12ml（约相当于供试品含有量的100%）及甲醇溶液13ml，其余3个具塞锥形瓶中各精密加入上述对照品溶液16ml（约相当于供试品含有量的125%）及甲醇溶液9ml，分别称定重量，超声处理30min，取出，再称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。各取续滤液10μl进样，测定每份含量，计算回收率，栀子苷平均回收率（n=6）为101.7%。RSD为1.5%。结果见表2。

2.10 样品测定 按含量项下方法制备样品溶液，在上述色谱条件下进行测定，三批样品的测定结果见表3。

3 讨论

3.1 提取条件的优化 根据文献[4-5]，中药栀子的栀子苷含量测定方法中，选用甲醇作为提取溶剂，故本研究也采用甲醇作为提取溶剂。分别对不同溶剂体积及不同超声时间进行了对比试验，最后得到最优化的提取方法为：溶剂甲醇，加入量25ml，超声处理30min。

3.2 检测方法的优点 本文中定量方法准确、灵敏、专属性强，可作为控制阿日申-18制剂质量的检测方法。

参考文献

[1]那莎，郭国田，王宗殿，等.栀子及其有效成分药理研究进展[J].中国中医药信息杂志，2005，12（1）：90-92.

[2]方尚玲，刘源才，张庆华，等.栀子苷镇痛和抗炎作用的研究[J].时珍国医国药，2008，19（8）：1374-1376.

[3]刘瑛，张浩.栀子药材中栀子苷的含量测定[J].华西药学杂志，2003，18（5）：374-375.

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：中国医药科技出版社，2010.

[5]赵超，康文艺.栀子中栀子甙的提取工艺研究[J].河南大学学报（医学版），2007，45（1）：43-44.