疣状胃炎组织p16、VEGF表达及其与Hp的相关性研究

陆才金，苏东星，吴县斌，石海英

(南宁市第二人民医院消化内科，广西 南宁 530031)

疣状胃炎组织p16、VEGF表达及其与Hp的相关性研究

陆才金，苏东星，吴县斌，石海英

(南宁市第二人民医院消化内科，广西 南宁 530031)

目的 探讨p16蛋白、血管内皮生长因子(VEGF)在疣状胃炎(VG)组织中的表达及其与幽门螺杆菌(Hp)的关系。方法选取2013年1～9月我院胃镜室收集并经胃镜确诊为VG的胃黏膜活检标本60例和正常胃黏膜活检标本30例，采用免疫组化SP法检测VG组织中p16、VEGF的表达，并判断有无Hp感染。采用Spearman相关性分析方法分析p16、VEGF在VG组织中的表达与Hp的相关性。结果VG的Hp感染率明显高于正常胃黏膜组织(P＜0.05)；VG组织中p16的表达阳性率明显低于正常胃黏膜组织(P＜0.05)，而VG组织中VEGF的表达阳性率明显高于正常胃黏膜组织(P＜0.05)；Hp感染与VG组织中p16、VEGF的表达均呈正相关(rp16=0.261，rVEGF=0.268，P均＜0.05)。结论p16、VEGF的表达及Hp感染均参与了VG的形成发展过程，p16、VEGF表达与Hp感染起协同作用。

疣状胃炎；p16；VEGF；Hp感染

疣状胃炎(Verrucous gastritis，VG)是指胃黏膜表面发生病变而呈疣状或痘诊状突起的一种慢性胃炎，又称痘疹状胃炎和慢性糜烂性胃炎[1]。有研究[2-3]指出，VG与胃癌的发生及进展具有密切关系，而幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori，Hp)是诱发VG形成的重要因素之一，同时也被认为是诱发VG癌变的主要诱因之一，大部分胃炎和胃癌患者均伴有Hp感染发生。本研究通过检测VG和正常胃黏膜组织中p16蛋白、VEGF的表达及Hp感染发生情况，研究VG组织中p16蛋白、VEGF的表达与Hp感染的关系，以探讨p16蛋白、VEGF的表达与Hp感染在VG的形成发展过程中的作用，现报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2013年1月至2013年9月我院胃镜室收集的VG胃黏膜活检标本60例，均符合中华医学会内镜分会慢性胃炎的内镜分型分级标准及治疗试行意见[4]里VG的内镜诊断标准，其中男性38例，女性22例，年龄21～64岁，平均(44.30±13.48)岁，成熟型VG 32例，未成熟型VG 28例；正常胃黏膜活检标本30例，男性16例，女性14例，年龄22～63岁，平均(43.79±14.28)岁。两组病例在性别、年龄等一般资料上比较，差异均无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。所有病例均未给予H2拮抗剂、质子泵抑制剂等药物治疗和抗Hp感染治疗。

1.2 检测方法 所有组织均经过10%中性甲醛溶液固定，石蜡包埋，常规4 μm厚连续切片，苏木精-伊红染色。采用免疫组织化学SP法检测抑癌基因p16蛋白、VEGF在VG组织及正常胃黏膜组织中的表达，主要试剂为p16及VEGF兔抗人多克隆抗体、免疫组化试剂盒和DAB试剂盒，均由福建迈新生物技术开发有限公司提供。实验操作均严格按照试剂盒说明书进行DAB显色、苏木精复染，以PBS缓冲液代替一抗作阴性对照，已知p16、VEGF表达阳性的胃癌切片代替一抗作为阳性对照。采用尿素呼气试验及快速尿素酶试验检测Hp，主要试剂为尿素14C呼气试验药盒(上海欣科有限公司)、胃Hp pH指示剂诊断试剂盒(福建三强生物化工有限公司)，试验操作步骤均严格按照试剂盒说明书进行。

1.3 结果判定 (1)p16表达判定：p16阳性表达为细胞核和(或)细胞质出现棕黄色颗粒，以显色细胞数＞20%判定为阳性，以显色细胞数＜20%判定为阴性。(2)VEGF表达判定：VEGF阳性表达为细胞浆和(或)细胞膜出现棕黄色颗粒，以显色细胞数＞25%判定为阳性，以显色细胞数＜25%判定为阴性。采用双盲法进行细胞计数，两位病理医师计数差异＞10%时，需再次计数。(3)Hp感染判定：尿素呼气试验及快速尿素酶试验检测均为阳性判断为Hp阳性，两项检测均为阴性判断为Hp阴性，若两项检测结果不一致，则需再次鉴定。

1.4 统计学方法 本研究数据采用SPSS18.0统计软件进行分析，计量资料以均数±标准差(±s)表示，组间比较采用t检验，两组间的计数资料采用χ2检验，p16、VEGF在VG组织中的表达与Hp的相关性采用Spearman相关性分析方法分析。以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 VG组及正常胃黏膜组Hp感染情况比较 VG组60例中Hp阳性38例，Hp阴性22例，Hp阳性率为63.33%；正常胃黏膜组30例中Hp阳性8例，Hp阴性22例，Hp阳性率为26.67%。VG组Hp阳性率明显高于正常胃黏膜组，差异具有统计学意义(χ2=12.482，P＜0.05)。

2.2 VG组织及正常胃黏膜组织中p16、VEGF的表达比较 VG组织中p16的表达阳性率明显低于正常胃黏膜组织，而VG组织中VEGF的表达阳性率明显高于正常胃黏膜组织，差异均具有统计学意义(P＜0.05)，见表1。

表1 VG组织及正常胃黏膜中p16、VEGF的表达阳性率比较[例（%）]

2.3 VG Hp感染与p16、VEGF表达的相关性 Spearman相关性分析结果显示，VG中Hp感染与VG组织中p16、VEGF的表达均呈正相关(rp16= 0.261，rVEGF=0.268，P均＜0.05)，见表2。

表2 VG Hp感染与P16、VEGF表达的相关性[例（%）]

3 讨论

VG特点是再发性或持续性胃黏膜多发性疣状隆起或痘疹状病灶，病变部位一般呈糜烂、凹陷，多发于胃窦部[5]。目前临床认为VG的发生发展与Hp感染、过敏、胃酸分泌异常、胆汁反流等相关，其中Hp感染是导致VG发生发展的最重要因素[6]。有研究[7]提出，Hp感染参与VG形成与发展过程的作用机制可能是通过释放某些致病因子作用于胃黏膜，进而使胃黏膜发生损伤、充血水肿、点状坏死、局部隆起增生、凹陷、片状糜烂等病变，从而导致胃部炎症反应的发生。据文献[8]报道，VG合并Hp感染的发生率可高达75.0%。本研究对VG组织与正常胃黏膜组织的Hp阳性率进行检测，发现VG组织中的Hp阳性率为63.33%，明显高于正常胃黏膜的Hp阳性率，与肖晨等[9]研究结果相一致，提示Hp感染在VG的发生与发展过程中起着较重要的作用。

p16基因是一种新型抑癌基因，在多种肿瘤细胞株中存在高频率纯合子缺失、突变等现象，其表达产物p16蛋白可直接参与细胞周期的调控，进而抑制肿瘤细胞恶性增殖和分裂[10]。有研究提出，p16基因参与了疣状胃炎发生发展过程及向胃癌转变的过程[11]。VEGF是一种可直接作用于血管内皮细胞促进血管内皮细胞增殖和新生血管生成的因子，主要通过与其受体KDR结合，作用于血管内皮细胞，促进血管内皮细胞大量增殖，诱导血管新生[12]，还可通过增加血管通透性，使肿瘤细胞生长、渗出及扩散转移[13]。因此，VEGF异常表达在促使正常胃黏膜或胃炎向胃癌的转变及胃癌进展的过程中起着较重要的作用[14]。本研究对VG组织及正常胃黏膜组织的p16、VEGF的表达情况进行探讨，结果显示VG组织的p16表达阳性率明显低于正常胃黏膜，而VEGF表达阳性率明显高于正常胃黏膜，表明p16、 VEGF的表达均参与的疣状胃炎的发生及发展过程，p16、VEGF异常表达提示疣状胃炎具有向胃癌转变的可能性。此外，本研究对VG组织中p16、VEGF的表达与Hp感染的相关性进行分析，结果显示VG中Hp感染与VG组织中p16、VEGF的表达均呈正相关，表明抑癌基因p16、VEGF的表达与Hp感染具有协同作用。

综上所述，p16、VEGF的表达及Hp感染均参与了VG的形成发展过程，p16、VEGF表达与Hp感染具有协同作用，共同促进VG的形成发展及其向胃癌转变。

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Expression of p16,VEGF in verrucous gastritis tissue and the correlation with Helicobacter pylori infection.

LU Cai-jin,SU Dong-xing,WU Xian-bin,SHI Hai-ying.Department of Gastroenterology,Nanning Second People's Hospital,Nanning 530031,Guangxi,CHINA

ObjectiveTo observe the expression of p16 protein,vascular endothelial growth factor(VEGF) in verrucous gastritis(VG)tissues and its relationship withHelicobacter pylori(Hp)infection.MethodsSixty gastric mucosal biopsy specimens from patients diagnosed as VG by gastroscopy and 30 normal gastric mucosal biopsy specimens were collected,which were tested for the expression of p16,VEGF by immunohisto-chemical SP method and detected for Hp infection.The relationship between the expression of p16,VEGF in VG tissues and Hp infection was analyzed by Spearman correlation analysis.ResultsThe rate of Hp infection in VG tissues was significantly higher than that of normal gastric mucosa(P＜0.05).The rate of positive expression of p16 in VG tissues was significantly lower thanthat of normal gastric mucosa tissues(P＜0.05),and the rate of positive expression of VEGF in VG tissues was significantly higher than that of normal gastric mucosa tissues(P＜0.05).The expression of p16,VEGF was positively correlated with Hp infection in VG tissues(rp16=0.261,rVEGF=0.268,P＜0.05).ConclusionThe expression of p16,VEGF and Hp infection is involved in the process of formation and development of VG,with synergistic action.

Verrucous gastritis;p16 protein;VEGF;Hp infection

R573.3

A

1003—6350（2015）08—1117—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.08.0400

2014-10-09)

南宁市科学研究与技术开发计划项目（编号：200501083C）

陆才金。E-mail:2471728309@qq.com