大柴胡颗粒对实验性豚鼠慢性胆囊炎的保护作用研究

卢金福 许惠琴 张志芬 王兆龙 蒋舒瑶 杜 萍

（1.南京中医药大学，江苏南京210023；2.江苏省中药药效与安全性评价重点实验室，江苏南京210023；3.南通精华制药股份有限公司，江苏南通226005；4.江苏省中医院，江苏南京210029）

大柴胡汤出自张仲景的《伤寒论》，具有外解少阳、内泻热结的功效，用于治疗少阳阳明合病，现代医学常用于治疗胆囊炎、胆石症、胃及十二指肠溃疡等疾病。大柴胡颗粒是在大柴胡汤基础上研制而成的现代中药复方制剂。文献报道显示，大柴胡汤在治疗肝胆疾病方面疗效显著，如胆囊炎、胆石症、非酒精性脂肪肝等[1-4]，但有关大柴胡颗粒对胆囊炎的影响仅见临床报道[5-6]。本研究通过制作实验性胆囊炎模型豚鼠，观察大柴胡颗粒对胆囊炎的治疗作用，为其临床使用提供理论依据。

1 实验材料

1.1 动物 豚鼠，普通级，350～450g，雌雄兼用，由南京青龙山实验动物养殖场提供。

1.2 药品与试剂 大柴胡颗粒由南通精华制药有限公司根据大柴胡汤用现代工艺制备而成，药物组成：柴胡 15g，黄芩 9g，芍药 9g，半夏 9g，生姜 15g，枳实12g，大枣12枚，大黄6g[7]。胆囊炎高脂饲料：在普通饲料中加入酪蛋白1%、蔗糖1.5%、猪油1%、纤维素1%、胆酸0.02%、胆固醇0.05%[8]，由南京青龙山实验动物养殖场提供。胆汁生化指标测定试剂盒：TBIL测定试剂盒（重氮盐法）、DBIL测定试剂盒（重氮盐法），北京利得曼生化股份有限公司。TBA测定试剂盒（酶循环法），四川迈克生物科技有限公司。

1.3 仪器 日立7020全自动生化分析仪，日本；TP 1020自动脱水机、RM2235型石蜡切片机，德国LEICA公司产品；CS-VI型摊片烤片机，湖北孝感宏业医用仪器有限公司；Tissue-Tek TEL组织包埋中心，日本SAKURA公司产品；LEICA DM 1000光学显微镜，德国Leica公司产品；隔水式电热恒温培养箱，上海市跃进医疗器械一厂；MiniSee图像采集系统。

2 实验方法

2.1 分组与造模、给药 取健康豚鼠，在实验室适应1周后随机分为正常对照组与造模组。正常对照组喂以普通饲料，造模组连续喂以胆囊炎高脂饲料8周[8]。喂养第5周时，将造模组随机分为模型组和大柴胡颗粒大、小剂量组，大柴胡颗粒组分别给予4g/kg、8g/kg大柴胡颗粒溶液灌胃，正常对照组和模型组灌胃等体积生理盐水，连续给药4周，饲料的喂养与给药前相同。

2.2 指标检测 末次给药后禁食12h，豚鼠称重，脱颈处死，提取胆汁，测定胆汁中总胆红素（TBIL）、直接胆红素（DBIL）及胆汁酸（TBA）含量。取胆囊用福尔马林固定，石蜡包埋，HE染色，观察胆囊形态学变化，对病变程度进行赋值统计，即“+”、“++”、“+++”分别给予 1 分、2 分、3 分，每组累计统计。

2.3 统计学方法 采用SPASS15.0软件，所有计量资料均用（±s）表示并进行 stuident-test。

3 实验结果

3.1 各组豚鼠相关生化指标比较 与正常对照组比较，模型组豚鼠胆汁 DBIL明显升高（P＜0.01）。与模型组比较，大柴胡颗粒大、小剂量组豚鼠胆汁中 DBIL 含量均明显降低（P＜0.01，P＜0.05），其中大剂量作用更为明显（P＜0.01）；大柴胡颗粒小剂量组豚鼠胆汁中TBIL含量明显降低（P＜0.01）。结果见表1。

3.2 各组豚鼠胆囊形态学检查 病理检查显示，模型组豚鼠胆囊局部上皮增生，间质水肿，可见较多淋巴浆细胞浸润，局部区域可见肠上皮细胞化生；大柴胡颗粒的两个剂量组可见少量或散在炎细胞浸润，胆囊局部上皮轻度增生，显示对胆囊炎有较好的治疗效果。结果见表2、图1。

表1 各组豚鼠胆汁TBIL、DBIL、TBA含量比较（±s）

表1 各组豚鼠胆汁TBIL、DBIL、TBA含量比较（±s）

注：与正常对照组比较，##P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与大柴胡颗粒小剂量组比较，△△P＜0.01。

组 别 动物数（只）正常对照组剂 量（g/kg）13 TBIL（mol/L）DBIL（mol/L）-TBA（mol/L）56.21±60.70 20.47±9.701391.61±2387.96 13大柴胡颗粒小剂量组 13 4 32.31±24.59** 30.83±8.03* 818.05±1609.69大柴胡颗粒大剂量组 13 8 55.19±40.22 20.18±6.04**△△ 1577.64±2302.40模型组 - 68.58±38.40 38.24±6.16## 2483.76±2649.44

表2 各组豚鼠胆囊组织形态学观察指标比较（±s）

表2 各组豚鼠胆囊组织形态学观察指标比较（±s）

注：与正常对照组比较，##P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.05。

组别 动物数（只）剂量（g/kg）水肿正常对照组13炎细胞浸润 肠化生 上皮细胞增生 病理改变总值- 0.00±0.000.15±0.38 0.00±0.00 0.00±0.00 0.15±0.38模型组 13大柴胡颗粒小剂量组 13大柴胡颗粒大剂量组 13- 1.15±0.38##1.00±0.00##0.38±0.65 1.15±0.55## 3.69±0.85##4 0.38±0.51**0.69±0.48*0.23±0.44 0.69±0.85 2.00±1.41**8 0.31±0.48**0.46±0.52**0.31±0.48 1.08±0.49 2.15±1.14**

图1 各组豚鼠胆囊组织学图片（HE染色，20×10）

4 讨论

现代医学认为，慢性胆囊炎多因结石刺激、细菌感染、病毒性肝炎、化学性损害、寄生虫及急性胆囊炎迁延等引起，一般采用解痉止痛、控制感染、利胆、手术等方法治疗[9]。西药的长期应用导致的不良反应较为多见；手术虽然有根治作用，但难免存在后遗症，如胆道术后综合征，不易被患者接受。中医药治疗本病在利胆、改善症状方面疗效显著。

目前，慢性胆囊炎的动物模型主要有饮饲法、石胆酸诱发等[8，10]。中医认为，胆囊炎的发病与饮食不节、精神抑郁等多种因素相互作用有关，其发病机制为湿热内盛、肝胆气滞或气郁化热，因此本研究从饮食不节的角度采用饮饲法造模。

肝细胞分泌胆汁进入胆囊临时存储，胆汁具有双重功能：一是促进脂类的消化和吸收；二是作为排泄液，将体内某些代谢产物（胆红素、胆固醇等）排入肠腔，随粪便排出体外。胆红素由衰老的红细胞释放的血色素经肝脏转化而成，随胆汁的分泌进入胆囊。胆汁酸则由胆固醇转变而来，这也是胆固醇排泄的重要途径之一。中医认为，肝胆互为表里，肝胆疏泄失常，肝胆气滞，胆汁郁结，不通则痛，气血郁滞，热结不散，最终形成胆囊炎。现代医学认为，当肝胆有疾病，胆红素、胆固醇、胆汁酸等指标可出现异常。国内外的文献均显示，当胆囊有病变时通常会累及肝脏，引起肝功能的异常或胆汁排泄不畅等，胆汁的长期滞留和过于浓缩对胆囊黏膜直接刺激是导致胆囊慢性炎症变化的一个重要因素[11-13]。这些认识与上述中医的观点基本吻合。因此胆红素、胆汁酸等升高的程度也间接反映了胆囊病变的程度。大柴胡颗粒对高脂饲料致豚鼠胆囊炎胆汁DBIL、TBIL的升高有显著的降低作用，对TBA的升高也有一定的降低趋势，提示大柴胡颗粒对豚鼠胆囊炎有一定治疗作用。水肿及炎细胞的浸润是组织炎症的重要的特征，组织学检查结果显示，大柴胡颗粒可显著减轻豚鼠胆囊炎病变中的水肿及炎细胞的浸润，对肠化生、上皮细胞增生也有一定的抑制趋势。结合上述生化指标的改变，我们认为大柴胡颗粒对胆囊组织的炎症有较好的抑制作用，该作用的发挥可能通过改善肝胆代谢或促进胆汁排泄等途径实现，至于其详细的机理及作用环节将在后续的工作中进一步研究。

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