木犀草素、黄芩素和槲皮素单体配伍复方的优化及抗慢性咽炎作用

刘涛　韩淑英

【摘 要】目的：正交试验法优化木犀草素、黄芩素、槲皮素单体复方的配伍，并观察优选方对慢性咽炎的疗效。方法：以木犀草素、黄芩素、槲皮素为三因素，每个因素拟定三个剂量水平，通过三因素三水平的正交试验表L9（34）安排实验，以二甲苯致小鼠耳肿胀为指标，优选配伍剂量。用优选的复方观察其抗炎作用及对家兔慢性咽炎的疗效。结果：三因素组合的9个治疗组对小鼠耳肿胀度均低于空白组，优选的三素最佳配伍是木犀草素高剂量，黄芩素中剂量和槲皮素中剂量组合（4：3：1）。抗炎验证实验：优选的复方对小鼠耳肿胀和大鼠棉球肉芽肿均有明显抑制作用，能明显改善家兔慢性咽炎的症状，减轻咽部黏膜病理损伤，中、高剂量组效果更佳，其疗效在某些方面优于黄氏响声丸。结论：木犀草素、黄芩素、槲皮素按4：3：1比例组成单体复方对慢性咽炎疗效好。

【关键词】木犀草素；黄芩素；槲皮素；单体复方；慢性咽炎

1 材料

SD大鼠，SPF级，体重185～205g，♀♂各半；SPF级昆明小鼠，18～22g，♀♂各半；大耳白兔，体重2.0～2.5kg，♀♂各半，（北京金牧阳实验动物养殖有限责任公司）木犀草素、黄芩素和槲皮素（中国药品生物制品鉴定所）；黄氏响声丸（无锡济民可信三禾药业股份有限公司）；精密电子天平（梅特勒—托利多仪器有限公司）；台式离心机（上海安亭科学仪器厂）。

2 方法

2.1 正交实验法优选三素单体复方配伍剂量

2.1.1 因素水平确定

通过三因素（木犀草素、黄芩素和槲皮素）三水平（三个剂量）的正交试验表L9（34）安排试验，三个水平剂量的确定是按临床人常用量换算[1]的较小剂量为第二水平（中剂量）。以二甲苯致小鼠耳肿胀度为炎症考核指标，优选配伍剂量。

2.1.2 二甲苯致小鼠耳肿胀实验

小鼠随机分组：1-9组为正交设计组，10组为空白组，根据人与小鼠的标准公斤体重剂量折算方法[2]。小鼠左右耳打下圆耳片，称重，差值为肿胀度。

2.2 优选的三素单体复方抗炎作用验证实验

2.2.1 小鼠耳肿胀实验

小鼠随机分成空白组、阿司匹林组、三素复方高、中、低剂量给药组，方法同上。

2.2.2 大鼠棉球肉芽肿试验

大鼠皮下窦道向左右皮下放灭菌棉球，随机分成空白组、地塞米松组和三素复方低、中、高剂量组。肉芽肿净重=棉球肉芽肿重-原棉球重，两个重量取均值，计算药物对棉球肉芽肿的抑制率。

2.3 优选的三素单体复方对慢性咽炎的治疗作用

2.3.1 慢性咽炎模型制备与分组

48只大耳白兔随机取8只为正常组，其余用氨水+松节油复合因素方法制备慢性咽炎模型，随机分为模型组、黄氏响声丸组、三素单体复方高、中、低剂量组。

2.3.2 观察指标

记录家兔行为、摄食、体重变化及大小便等一般情况，观察动物咽部情况；停药后测定血常规；咽部粘膜及其下组织HE染色镜检。

2.4 统计学分析

数据以SPSS15.0统计行单因素方差分析，P<0.05认为有统计学差异。

3 结果

3.1 正交实验结果

最佳配伍是木犀草素高剂量，黄芩素中剂量和槲皮素中剂量组合，既L3B2Q2，三者剂量比例为4：3：1。木犀草素40 mg、黄芩素30 mg、槲皮素10 mg 组合为给药中剂量，中剂量×0.5为低剂量，中剂量×2为高剂量。以二甲苯致小鼠耳肿胀和大鼠棉球肉芽肿干预实验。

3.2 优选三素单体复方抗炎作用的验证实验

三素复方对小鼠耳肿胀有明显抑制作用，随着剂量的增加，其抑制率也有所升高。中、高剂量组与阿司匹林组相近（P<0.01）。三素复方对大鼠棉球肉芽肿有明显的抑制作用，高剂量及地塞米松能明显抑制肉芽肿生成（P<0.01），但各治疗组间肉芽肿重量无差异。

3.3 优选的三素单体复方的疗效

3.3.1 大耳白兔一般状态

造模3天家兔出现搔抓口部，饮水频而少，口腔分泌物增多，精神疲乏，纳食和自发活动减少；咽部充血、暗红色肿胀；注射松节油后加重，15天状态最差。治疗3天症状改善，l0天基本正常。各组家兔体重均呈增长态势，治疗组体重增长速度快于模型组，三素复方高剂量组最明显。治疗后家兔进食增加，三素中、高剂量和黄氏响声丸作用更明显。

3.3.2 三素复方对慢性咽炎兔血常规的影响

表1可见，模型组兔血液中白细胞、淋巴细胞和粒细胞数均明显高于正常组，各药物治疗组血液中白细胞、淋巴细胞和粒细胞数均有不同程度的降低，其中三素复方中、高剂量和黄氏响声丸组较明显。红细胞各组之间统计无差异。

3.3.3 给药后各组兔咽部组织病理形态学观察

模型组家兔咽部黏膜及粘膜下见大量弥漫性炎细胞浸润，上皮增厚，钉突延长；粘膜下可见纤维组织增生及固有膜增宽，充血，伴有粘液腺增生。治疗组家兔咽部组织病变不同程度减轻，以三素中、高剂量和黄氏响声丸组病理逆转效果好。

4 讨论

慢性咽炎为咽部粘膜、粘膜下及淋巴组织的弥漫性炎症，伴有黏膜下结缔组织及淋巴组织增生、粘液腺肥大、分泌亢进。中药复方是中医临床用药的基本形式，也是制约中医药现代化、国际化的瓶颈。将来源于不同天然植物的有效成分组成复方即“单体有效成分复方”用于治疗疾病，不仅提高技术含量，而且符合中医药特色，使中药质量标准具可控性，达到中药现代化和国际化的需要。本实验选择了中药单体成分木犀草素、黄芩素、槲皮素（三素）为实验药物，从抗炎角度探讨三素配伍组合对慢性咽炎的治疗作用，结果表明：与对照组比较，三者组合均能抑制小鼠耳肿胀，以木犀草素高剂量，黄芩素中剂量和槲皮素中剂量组合抑制作用最明显，小鼠耳肿胀度最轻。三者最佳配伍比例是木犀草素：黄芩素：槲皮素为4：3：1。将优选的三素复方进行抗炎药效实验，结果：三素复方对二甲苯致小鼠耳肿胀和大鼠棉球肉芽肿有明显抑制作用，中、高剂量与阿司匹林（地塞米松）一致。进一步用三素单体复方观察对家兔慢性咽炎模型的治疗效果显示：模型组兔体重减轻、进食量减少、咽部黏膜红肿及病理损伤明显。三素复方能显著改善上述症状，减轻病理损伤，中、高剂量和黄氏响声丸无差别。证明三素单体复方对实验动物急、慢性炎症具有良好的抑制作用，能明显改善氨水和松节油所致慢性咽炎模型动物的症状，减轻咽喉部黏膜损伤，疗效在某些方面优于黄氏响声丸，为进一步的研究奠定了基础。

【参考文献】

[1]王继双，等.木犀草素的药理作用研究进展[J].生命科学，2013，25（6）：560-565.

[2]金丕焕.医用数理统计方法[M].上海医科大学出版社，1993：450.

[责任编辑：薛俊歌]