王行龙 白学兵 孙钦波
(①山东省临沂市临港区朱芦镇兽医站 276613 ②山东省莒南县畜牧局)
瘦肉精是盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和沙丁胺醇等物质的俗称。曾被广泛作为饲料添加剂使用,在畜牧养殖业中带来很大的效益。但是人食用了含盐酸克伦特罗、莱克多巴胺或沙丁胺醇残留的动物性食品,残留通过食物进入人体,就使人体积蓄中毒。如果一次摄入量过大,就会产生异常生理反应的中毒现象,均会对健康带来危害。常规仪器检测方法不能满足实际生产中大批量检测的需求。用快速检测卡(尿样)检测这三种药物,具有操作方便、快捷、灵敏高等特点,不需要其他仪器,适用于现场检测。笔者作为一名基层兽医工作者,根据近几年在实际工作中遇到的问题整理如下,仅供同行参考。
(1)尿样必须新鲜无污染。(2)尿样必须收集在洁净、干燥、不含有任何防腐剂的塑料尿杯或玻璃容器里,如尿样混浊,可在室温4000r/min条件下离心5min处理后待检。笔者在实际操作(产地检疫时现场检测)曾遇到过因尿液太混浊,液面不走的现象。(3)不洁净样本,如含有漂白剂、明矾,可能在正确的分析操作方法下也会产生错误的结果。(4)若不能及时送检,尿液样本在2~8℃冷藏可保存24h,要注意避免造成失效或污染。长期保存需冷冻于-20℃,忌反复冻融。(5)冷藏或冷冻尿样需恢复至室温即20±5℃后方可进行检测。
(1)从原包装未开封的铝箔袋中取出检测卡,打开后请在在1h内尽快地使用。(2)检测卡应平放。笔者在现场检疫时曾遇到过这样的情况:检测卡不平放(地面不平,有一定的坡度) 时,滴加尿样后液面流动过快,有时出现质控线和检测线都不显色,但平放后显色正常。所以在实际操作时一定注意检测卡不能倾斜,否则影响结果判定。(3)使用过程中尽量不要触摸检测卡中央的白色面膜;避免阳光直射和风扇直吹。(4)点样前,应待检测卡和样本温度恢复至室温即20±5℃后,方可进行检测。笔者在某年的冬季,检测一批发往杭州的生猪时,在室外点样后几个检测卡竟质控线和与检测线都不显色。后来在室内检测时各个检测卡都显色,这才知道是温度的问题。(5)过期、破损、污染或无效的检测卡切勿使用。(6)检测卡为一次性产品,请勿重复使用。(7)一定注意未使用产品的防潮保护,确保封口的紧密度,否则会产生错误或者不确定的结果。(8)产品应储存于阴凉避光干燥处,4~30℃密封。忌冷冻。使用过程中请注意检测卡有效期。该产品有效期为12个月。
(1)将检测卡平置于干净平坦的台面上,用一次性塑料滴管垂直滴加2滴无空气泡的尿液样本至加样孔中。(2)滴加、吸取尿样时请使用本产品所带滴管。(3)一次性塑料滴管不可重复使用,以免出现交叉污染。(4)样本不能溅到或者直接滴到检测卡中央的白色面膜,这样会影响显色效果。笔者实践中不小心把样本溅到检测卡中央的白色面膜,结果无显示。(5)尿样加入过多或过少均会影响显色效果,要严格按照说明书操作。
(1)加样后开始计时,静置反应3~5min后,观察显色区,判断结果,其它时间判断无效。(2)自来水、蒸馏水、去离子水或其它液体不能作为阴性对照。(3)由于不同尿液样本之间的差异,有的检测线可能出现颜色偏浅或偏灰现象,但只要出现红色条带,即可判定为阴性。(4)出现阳性结果,需用本卡复检一次。(5)若遇见判定结果有争议的样品,请用仪器确证。(6)操作失误,以及样本中存在干扰物质,有可能导致错误的结果,需查阅在特异性中列出的能引起阳性结果的物质。(7)当实验操作环境温度低时,会影响线条变浅,有可能出现假阳性结果,建议操作环境温度最好不低于10℃。
5.1 阴性 质控线(C线)出现红色条带,检测线(T线)也出现红色条带。无论颜色深浅均判为阴性。
5.2 阳性 质控线(C线)出现红色条带,而检测线(T线)不出现红色条带。判为阳性。
5.3 无效 质控线(C线)与检测线(T线)均无红色条带出现或者质控线(C线)无红色条带出现但检测线(T线)出现红色条带,说明此检测卡已失效、过期,或操作不当,需另做一次测试。
该检测卡仅是一种定性筛查方法,不能定量克伦特罗、莱克多巴胺或者沙丁胺醇在样本中的精确浓度。样本若需复核确证,请参考中华人民共和国农业行业标准(农业部1063号公告-3-2008动物尿液中11种β-受体激动剂的检测液相色谱—串联质谱法)。