高效液相色谱法在血药浓度监测中的应用进展

范玲，于栋伟(苏州市中西医结合医院，江苏苏州215101)

高效液相色谱法在血药浓度监测中的应用进展

范玲，于栋伟
(苏州市中西医结合医院，江苏苏州215101)

摘要:高效液相色谱( HPLC)法是近年来兴起的一种监测血药浓度的方法，具有定量准确、选择性好、灵敏度高、精密度高等优点。HPLC法监测抗癫痫药物(咪达唑仑、硝西泮、地西泮等)、抗肿瘤药物(异环磷酰、甲氨蝶呤、依托泊苷等)、抗感染药物(齐多夫定、奈韦拉平、利福平等)、免疫抑制剂(环孢素A、吗替麦考酚酯)血药浓度的结果显示，其具有较高的回收率、日内及日间回收率，对临床个体化给药治疗方案的实施具有重要意义。

关键词:高效液相色谱法;治疗药物监测;血药浓度

治疗药物监测( TDM)是指对治疗指数窄、毒性作用强、个体差异大的药物进行血液或其他体液中药物浓度的监测，可指导临床制定个体化给药方案，提高药物治疗水平，达到临床安全、有效、合理用药的目的。目前临床上最常用的TDM方法有光谱法、色谱法、免疫法。光谱法灵敏度较低，并且代谢物或结构相近的化合物对监测结果干扰较大;免疫法常用的试剂盒多为国外进口，效期短，成本相对较高;而色谱法是其中发展最快、适用性最强的方法，具有定量准确、选择性好、灵敏度高、精密度高等优点。高效液相色谱( HPLC)法是色谱法中的一种，是近年来兴起的一种监测血药浓度的方法，现将对其在血药浓度监测方面的应用作一综述。

1　抗癫痫药物

1.1咪达唑仑( MID)、硝西泮( NZP)、地西泮( DZP) MID、NZP、DZP为治疗癫痫的常用药物，但此类药物的治疗窗较窄，血药浓度低于治疗窗则疗效较差，高于治疗窗则会出现不良反应，甚至会导致死亡［1］。陈德志等［2］建立同时测定MID、NZP、DZP血药浓度的反相HPLC法，结果显示MID、NZP、DZP质量浓度均在20～4 000 ng/mL与峰面积呈良好线性关系，回收率为98.2%～103.9%，日内及日间精密度( RSD)均＜5%。证实该法能够同时测定三种药物的血药浓度，适用于临床血药浓度监测。

1.2奥卡西平( OXC) OXC是卡马西平( CBZ)的一种10-酮类衍化物，经胃肠道吸收后，在芳香酮降解酶的作用下能迅速且完全降解成活性代谢产物10，11-二氢-10-羟基CBZ而发挥抗癫痫作用。OXC优于CBZ之处在于其生物利用度高、蛋白结合率低、无肝酶诱导作用、疗效好、不良反应少［3～5］。癫痫患儿应用OXC及其代谢物的个体疗效差异较大应及时进行OXC活性代谢产物( MHD)的血药浓度监测，从而达到安全、合理用药的目的。林志燕等［6］采用HPLC法测定血清MHD并进行分析，结果

显示MHD在0.56～56.00 μg/mL时线性关系良好，回收率为99.7%～103.4%，日内RSD为0.99%～2.12%;日间RSD为1.23%～4.79%;表明该法适用于癫痫患者MHD的血药浓度监测。

1.3拉莫三嗪( LTG) LTG为一种新型苯三嗪类的广谱抗癫痫药，临床上常与CBZ联合治疗部分性癫痫发作;而CBZ能诱导LTG的代谢，导致LTG血药浓度下降，从而降低药效。因此，对其开展血药浓度监测具有重要的临床意义。何大可等［7］应用反相HPLC法同时测定LTG与CBZ的血药浓度，结果显示LTG与CBZ的血药浓度分别在0.31～40.00 μg/mL和0.16～20.00 μg/mL时线性关系良好，平均回收率分别为98.69%和98.14%，日内RSD分别为1.6%～5.8%和1.5%～2.8%，日间RSD分别为3.4%～6.5%和5.0%～5.7%，表明该方法回收率高、精密度好。

2　抗肿瘤药物

2.1异环磷酰胺异环磷酰胺为磷酰胺衍生物，属氮芥类烷化剂，治疗各种实体瘤和白血病均有效［8］。若该药应用剂量过大，可导致患者发生严重呕吐、昏睡、意识不清等。陈新谦等［9］采用HPLC法测定人血清中的异环磷酰胺，结果显示异环磷酰胺的血药浓度在10～200 mg/L时线性关系良好，平均回收率为99.2%，表明该方法准确度好、精密度高，适用于异环磷酰胺的血药浓度监测。

2.2甲氨蝶呤( MTX) MTX为二氢叶酸还原酶抑制剂，广泛应用于白血病、淋巴瘤、绒毛膜上皮癌等恶性肿瘤的治疗，尤其是临床上常用大剂量MTX结合亚叶酸钙化疗方案来治疗骨肉瘤［9］。吴雪梅等［10］采用Supdelean萃取小柱提取血浆中的MTX，以HPLC法测定血药浓度，显示MTX与血中内源性杂质分离良好，绝对回收率为92.64%，线性范围为0.104～104 mg/L，表明该法回收率高，可满足血药浓度监测的需求。

2.3依托泊苷( VP16) VP16属于有丝分裂抑制剂，为细胞特异性药物，是儿童急性白血病化疗方案中的常用药物。VP16除可引起骨髓抑制、嗜中性粒细胞减少等不良反应外，还可使已治愈的急性白血病患儿继发治疗相关性白血病，且预后极差［11］。药物研究显示，VP16的疗效和不良反应与血药浓度有关。陆晓彤等［12］采用HPLC法测定白血病患儿血浆中的VP16，结果显示日内回收率为93.56%～96.24% ( RSD为1.07%～2.63%)，日间回收率为92.85%～94.26%( RSD为3.55%～5.89%)，表明该法简单方便、灵敏度高、专一性好，适用于临床样本的监测。

3　抗感染药物

3.1齐多夫定( AZT)、奈韦拉平( NVP)临床上AZT、NVP常联合应用于艾滋病的治疗，为使得药物在有效浓度发挥最佳效能，李燕青等［14］建立了一种快速、灵敏并同时测定这两种药物浓度的HPLC法结果显示AZT高、中、低( 4、1、0.1 μg/mL)以及NVP高、中、低( 40、10、1 μg/mL)血药浓度的平均回收率均＜10%，线性范围分别为0.05～5、0.5～5 μg/mL;表明该方法灵敏、准确、简单、快速，可用于同时服用AZT和NVP的患者临床血药浓度监测和药代动力学研究。

3.2利福平( RFP) RFP是肺结核患者的首选药物，属肝药酶诱导剂，其血药浓度个体差异很大，长期服用者血药浓度降低［15］。闫锋等［16］采用HPLC法测定了RFP血药浓度，结果显示RFP在0.5～16.0 μg/mL范围内线性关系良好，平均回收率为99.43%，表明该法准确、灵敏，适用于血药浓度监测。

3.3伊曲康唑伊曲康唑是一种合成的广谱抗真菌药，对皮肤癣菌等各种酵母菌和真菌感染均有效其在体内部分代谢为羟基伊曲康唑，同样具有抗真菌活性。由于两者的个体差异较大，因此对其开展TDM具有重要的临床意义。陈钧等［17］采用HPLC法测定了伊曲康唑及其代谢产物羟基伊曲康唑的血药浓度，结果显示伊曲康唑和羟基伊曲康唑的线性范围均为5～500 ng/mL，提取回收率均＞80%，日内、日间RSD均＜10%，表明该方法适用于两种药物的血药浓度监测和药动学研究。

4　免疫抑制剂

4.1环孢素A( CsA) CsA是一种强力免疫抑制剂，在临床上主要用于预防同种异体器官或组织移植所发生的排斥反应［18］。在临床应用中，CsA的血药浓度过低则达不到治疗作用，过高则会引起恶心呕吐等不良反应。为使CsA发挥最佳的治疗作用侯铁柱等［19］采用HPLC法测定CsA的血药浓度，结果显示其在50～2 000 ng/mL时峰面积/内标峰面积与浓度线性关系良好，方法回收率为97.3%～98.9%，萃取回收率为73.9%～79.4%，日内、日间RSD均＜5.2%;表明HPLC法操作简便、快速、准确可靠，可用于CsA的血药浓度监测。

4.2吗替麦考酚酯( MMF) MMF是预防和治疗异体移植器官排斥反应的免疫抑制药物，口服后可迅速经肠道吸收，脱酯化后转化为有活性的霉酚酸( MPA)，从而发挥免疫抑制作用。由于MPA的治

疗窗窄，药动学过程个体差异大，因此对其开展TDM有重要的临床意义。彭明丽等［20］结果显示，HPLC法测定血浆MPA在0.20～49.96 μg/mL时线性良好，平均回收率均＞90%，日内RSD均＜10%，日间RSD均＜15%，表明该法适用于MPA血药浓度监测。

5　其他药物

华卡等［21］建立高效液相色谱质谱联用( HPLCMS)的方法同时测定人血浆中的胺碘酮及去乙基胺碘酮，张相彩等［22］采用反相HPLC法测定雷米普利血药浓度，邱畅等［23］建立高效液相色谱-电喷雾串联质谱法测定人血浆中瑞舒伐他汀血药浓度，结果均显示其具有较高的准确性、精密性和灵敏度，且操作简便、快速，适用于血药浓度监测。

HPLC法是目前临床上最常用的血药浓度监测方法，而色谱柱作为分离、分析样品的重要载体，对进行分析的样品纯净度要求高，使得此方法对样品的前期处理要求高［24，25］。目前针对色谱分析中样品处理繁琐的难题，已有研究者成功开发了在线净化富集生物体液的填料柱，使得样品监测时无需预处理，蛋白质等大分子物质经洗脱而不被保留，而小分子物质可自由出入固定相的疏水部分而得到分析。随后液质联用技术使得HPLC法灵敏度更高、准确性更好，在很大程度上拓宽了其应用范围。因此，HPLC法会越来越普及，并广泛应用于治疗药物的血药浓度监测。

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收稿日期:( 2015-03-05)

文章编号:1002-266X( 2015) 32-0100-03

文献标志码:A

中图分类号:R96

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.32.043