不同产地口蘑多糖对亚急性衰老模型小鼠的抗衰老作用

杨 辉，王治宝，田嘉铭，谭晓虹

（河北北方学院 药学系，河北 张家口 075000）

0 引言

蒙古口蘑属伞菌目（Agaricales），口蘑科（Tricholomataceae），口蘑属（Tricholoma）真菌，在我国北方广为分布[1].口蘑广泛生长于内蒙古、张家口等地，富含蛋白质、多糖及多种微量元素[2]，具有增强机体免疫力和抗肿瘤的活性[3].前期研究表明，口蘑水提取物对小鼠具有一定的抗应激作用[4]，据此推断口蘑可能具有抗氧化、抗衰老、增强记忆功能的作用.

1956 年Harman 提出的衰老的自由基学说指出，机体内存在有效的自由基清除系统，使体内不断产生的自由基维持在正常水平，这种平衡随着年龄的增长逐渐被破坏，造成自由基过剩，过多的自由基与细胞膜中的类脂质发生过氧化作用，导致细胞死亡，同时脂质过氧化的终产物丙二醛，与细胞损伤的程度呈正相关，可间接反应组织中自由基含量的变化[5].

本试验建立了亚急性衰老模型[6]，通过对血清、肝脏组织及脑组织SOD、CAT、MDA 指标的研究，探讨内蒙古产口蘑多糖和张家口产口蘑多糖对D-半乳糖致衰小鼠学习能力和抗氧化作用的影响.为坝上口蘑的综合利用提供一定的依据.

1 材料和方法

1.1 材料与仪器

口蘑：内蒙古集宁市和河北省康保县；D-半乳糖：天津光复精细化工研究所；SOD、CAT、MDA 检测试剂盒：南京建成生物工程研究所；人参总皂苷：南京泽朗医药科技有限公司；其余试剂均为国产分析纯；实验室用水为三蒸水.

UV-2100 紫外可见分光光度计：尤尼柯（上海）仪器有限公司；BS124 型精密电子天平：德国Sartorius；MR231 型高速冷冻离心机：德国SIGMA；Morris 水迷宫视频分析系统：上海吉量科技有限公司.

1.2 试验动物

昆明种小鼠，雌雄兼用，体质量18～22 g，由河北北方学院实验动物中心提供.

1.3 试验方法

1.3.1 口蘑多糖供试液的制备[7]

准确称取内蒙古口蘑粗粉和张家口口蘑粗粉各50 g，分别加入蒸馏水500 mL，温提3 次，每次1 h，合并提取液，抽滤，将滤液减压浓缩，用Sevage 法除去蛋白，滤液中加入乙醇使醇含量达80%，静置过夜，抽滤，得粗多糖.将粗多糖加水溶解，加1%的活性炭脱色，抽滤，再加乙醇使醇含量达80%，静置过夜，抽滤，沉淀依次用无水乙醇、丙酮、乙醚多次洗涤，真空干燥，得精制多糖.分别称取内蒙古口蘑精制多糖和张家口口蘑精制多糖适量，溶于水，得质量浓度为400 mg/mL 的多糖溶液.

1.3.2 小鼠分组与给药

选取90 只健康小鼠随机分为正常对照组、衰老模型组、人参皂苷组、内蒙古口蘑多糖组（低、中、高剂量）和张家口口蘑多糖组（低、中、高剂量），每组10 只.内蒙古口蘑多糖组和张家口口蘑多糖组（低、中、高剂量）的给药剂量分别为小鼠每10 g 体质量给予10、20、40 mg 多糖溶液.人参皂苷组给药剂量为小鼠每10 g 体质量给予5.6 mg人参皂苷混悬液[8].正常对照组和衰老模型组的小鼠被灌服等体积的生理盐水，每日一次.除正常对照组，其余组的小鼠均每天皮下注射10 g/L D-半乳糖生理盐水溶液，注射量为0.2 mL，正常对照组注射生理盐水0.2 mL，连续给药30 d.

1.3.3 行为学试验

从开始给药的第31 天开始进行Morris 水迷宫测试[9].圆形水池中注入温水，室温及水温均保持在（22±2）℃，平台任意放置于某一象限的中心位置，并淹没于水面下约2 cm 处.训练时将每只小鼠按东西南北4 个入水点分别放入水池.测定小鼠自入水到找到站台后四肢爬上站台所需的时间（逃避潜伏期）.连续记录6 d 小鼠的逃避潜伏期，取其平均值作为小鼠学习能力的检测指标.

1.3.4 指标检测

行为学指标检测完毕后1 h，将小鼠断头取血，于3 000 r/min 离心制备血清，迅速取出小鼠的肝组织和脑组织制备10%（m/V）组织匀浆.血清指标、肝脏组织及脑组织指标均为SOD、CAT、MDA.

1.4 数据分析

应用SPSS12.0 统计软件进行分析，数据均以X±S 表示，组间比较采用单因素方差分析.

2 结果与讨论

2.1 内蒙古口蘑多糖及张家口口蘑多糖对D-半乳糖致亚急性衰老小鼠学习能力的影响（表1）

在第1～4 天，各组小鼠的逃避潜伏期并无显著差异.由表1 可知，在第5 天，模型组小鼠的逃避潜伏期比正常对照组小鼠的逃避潜伏期显著延长（P＜0.01）；与模型组比较，内蒙古口蘑多糖各剂量组及张家口口蘑多糖各剂量组的小鼠的逃避潜伏期均有缩短的趋势，并有一定的剂量依赖性，但无显著性差异；人参皂苷组与模型组相比，小鼠的逃避潜伏期缩短，但无显著性差异.在第6 天，模型组小鼠的逃避潜伏期比正常对照组小鼠的逃避潜伏期显著延长（P＜0.01）；与模型组比较，内蒙古口蘑多糖各剂量组及张家口口蘑多糖各剂量组小鼠逃避潜伏期随剂量的增加而缩短，且内蒙古口蘑多糖中、高剂量组及张家口口蘑多糖中、高剂量组与模型组比较有显著性差异（P＜0.05，P＜0.01）；内蒙古口蘑多糖高剂量组及张家口口蘑多糖高剂量组相比无显著性差异；人参皂苷组与模型组相比，小鼠的逃避潜伏期有显著性差异（P＜0.01）.

表1 各组小鼠逃避潜伏期(n=10，±S)Table 1 Escape latency of mice in each test group(n=10，±S)

表1 各组小鼠逃避潜伏期(n=10，±S)Table 1 Escape latency of mice in each test group(n=10，±S)

注：*为与正常对照组相比差异显著（P＜0.05)；**为与正常对照组相比差异极显著（P<0.01）；▲为与模型组相比差异显著（P＜0.05)；▲▲为与模型组相比差异极显著（P＜0.01)，下同.

2.2 小鼠血清指标的测定（表2）

由表2 可知，连续注射D-半乳糖30 d 后，与正常对照组相比，衰老模型组小鼠的血清SOD 和CAT 活性均显著降低（P＜0.05），而MDA 浓度极显著升高（P＜0.01）.与衰老模型组相比，人参皂苷组，内蒙古口蘑多糖中、高剂量组及张家口口蘑多糖中、高剂量组小鼠的血清SOD、CAT 活性均显著升高（P＜0.05）；人参皂苷组，内蒙古口蘑多糖低、中、高剂量组及张家口口蘑多糖低、中、高剂量组小鼠的血清MDA 浓度均显著降低（P＜0.05）；内蒙古口蘑多糖高剂量组、张家口口蘑多糖高剂量组及人参皂苷组3 者相比，SOD、CAT 活性和MDA 浓度均无显著性差异.试验表明，内蒙古口蘑多糖及张家口口蘑多糖可显著提高衰老模型小鼠的血清SOD、CAT 活性，抑制MDA 浓度的上升，并表现出一定剂量依赖性.

表2 口蘑多糖溶液对小鼠血清指标的影响(n=10，±S)Table 2 Influences of mushroom polysaccharides solution on serum indexes of mice (n=10，±S)

表2 口蘑多糖溶液对小鼠血清指标的影响(n=10，±S)Table 2 Influences of mushroom polysaccharides solution on serum indexes of mice (n=10，±S)

2.3 小鼠肝脏组织指标的测定（表3）

由表3 可知，与正常对照组相比，衰老模型组小鼠的肝脏组织中，SOD、CAT 活性均显著降低（P＜0.05），MDA 浓度极显著升高（P＜0.01）.与衰老模型组相比，人参皂苷组，内蒙古口蘑多糖中、高剂量组及张家口口蘑多糖中、高剂量组小鼠的肝脏组织中SOD、CAT 活性均显著升高，MDA 浓度均显著降低（P＜0.05）；内蒙古口蘑多糖高剂量组、张家口口蘑多糖高剂量组及人参皂苷组3 者相比，SOD、CAT 活性和MDA 浓度均无显著性差异.试验表明，内蒙古及张家口口蘑多糖可显著提高衰老模型小鼠肝脏组织中SOD、CAT 活性，抑制MDA浓度的上升，并表现出一定剂量依赖性.

表3 口蘑多糖溶液对小鼠肝脏指标的影响(n=10，±S)Table 3 Influences of mushroom polysaccharides solution on liver indexes of mice (n=10，±S)

表3 口蘑多糖溶液对小鼠肝脏指标的影响(n=10，±S)Table 3 Influences of mushroom polysaccharides solution on liver indexes of mice (n=10，±S)

2.4 小鼠脑组织指标的测定（表4）

由表4 可知，与正常对照组相比，衰老模型组小鼠的脑组织中SOD、CAT 活性均显著降低（P＜0.05），MDA 浓度显著升高（P＜0.05）.与衰老模型组相比，人参皂苷组，内蒙古口蘑多糖低、中、高剂量组及张家口口蘑多糖低、中、高剂量组小鼠的脑组织中SOD、CAT 活性均显著升高（P＞0.05），MDA浓度均显著降低（P＜0.05）；内蒙古口蘑多糖高剂量组、张家口口蘑多糖高剂量组及人参皂苷组3者相比，SOD、CAT 活性和MDA 浓度均无显著性差异.试验表明，内蒙古口蘑多糖及张家口口蘑多糖可显著提高衰老模型小鼠脑组织中的SOD、CAT活性，抑制MDA 浓度的上升，并表现出一定剂量依赖性.

表4 口蘑多糖溶液对小鼠脑组织指标的影响(n=10，±S)Table 4 Influences of mushroom polysaccharides solution on brain tissue indexes of mice (n=10，±S)

表4 口蘑多糖溶液对小鼠脑组织指标的影响(n=10，±S)Table 4 Influences of mushroom polysaccharides solution on brain tissue indexes of mice (n=10，±S)

本试验通过对小鼠体内衰老和抗衰老相关物质的检测发现，饲喂口蘑多糖后小鼠血清和肝脑组织中的SOD、CAT 活性升高，MDA 浓度降低.说明口蘑多糖在组织水平具有较好的抗衰老作用.从试验结果看，口蘑多糖可能是通过提高生物体内SOD、CAT 等抗氧化酶的活性，降低过氧化脂质分解的最终产物DMA 的含量，从而起到抗衰老的作用.

3 结论

通过对口蘑多糖的抗衰老作用的研究，证实口蘑多糖能增强小鼠记忆功能，并从衰老的自由基学说推断，口蘑多糖具有抗氧化作用.同时，研究结果表明，内蒙古口蘑多糖及张家口口蘑多糖在抗氧化方面作用相当.

［1］卯晓岚.中国经济真菌［M］.北京:科学出版社，1998:69.

［2］王志宝，梁惠花.口蘑中多糖及主要营养成分含量的测定［J］.食用菌，2004（3）：42-43.

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［4］王治宝，杨辉.坝上口蘑对小鼠抗应激能力的影响［J］.河南农业科学，2014，43（2）：139-141.

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