利用酶联免疫法检测水产品中氯霉素残留的结果分析

刘万学

（黑龙江省水产技术推广总站 黑龙江 哈尔滨 150018）

利用酶联免疫法检测水产品中氯霉素残留的结果分析

刘万学

（黑龙江省水产技术推广总站 黑龙江 哈尔滨 150018）

随着水产养殖业的快速发展，人们对水产品质量安全日益关注。滥用抗生素、激素等药物防治水产动物疾病，导致水产品的质量下降，使用禁用渔药而导致水产品药物残留超标。国家投入大量的人力物力对食品安全进行监督抽查，确保餐桌上的安全。氯霉素就是水产品质量安全监督抽查中的重要一项抗生素。

氯霉素最初是由委内瑞拉链丝菌（StreptomycesVenezuela）的培养液中提取制得，是一种常用的广谱抗生素，曾在畜牧业中广为应用，治疗畜禽肠道感染有特效，至今已有50年的使用历史。但氯霉素有较强的副作用和毒性作用，如果氯霉素在食用动物中残留，可通过食物链传给人类。长期微量摄入氯霉素会引起多种疾病，氯霉素抑制骨髓造血功能造成过敏反应，对人体的造血系统危害很大，容易引起再生障碍性贫血。此外该药还可引起肠道菌群失调及抑制抗体的形成，还会引起视神经炎、皮疹等不良反应，对人类的健康造成危害。氯霉素已在国外较多国家禁用，是禁用抗生素。世界上许多国家禁止此药用于生产食品动物，并规定了在畜产品中氯霉素不得检出。中国农业部已将氯霉素从2000年版《中国兽药典》中删除并将其列为禁药。而欧盟的进口食品卫生标准规定氯霉素含量标准为不得检出。

目前的氯霉素的检测方法是依据《水产品中氯霉素残留量的测定气相色谱法》使用气相色谱仪进行检测，其检测结果可靠，但是分析速度较慢。因此，大都先使用酶联免疫法进行筛选，筛选结果为阳性的样品再使用气相色谱法进行确定。酶联免疫法具有灵敏度高、特异性强、高通量、成本低等优点，因而适合于水产品中氯霉素日常检测。但是在使用过程中，由于使用不同厂家的试剂盒和其精密度和灵敏度不同，而检测出的阳性结果比率不同，阳性结果过多，这样需要经过气相色谱法进行确定，最终确定为假阳性。针对假阳性比率偏高采用两个不同厂家的试剂盒（一个是进口的，一个是国产的）做了个比对试验∶

1、检测材料∶采自省内四市二县的农贸市场和超市的50个水产品样品。

2、检测方法∶酶联免疫法（ELISA），阳性结果的样品由气相色谱法确定。

3、使用仪器∶酶标仪、组织捣碎机、旋涡混合器、离心机、氮吹仪、均质机、电子天平、单道可调微量移液器、8道可调微量移液器。

4、试剂∶氯霉素试剂盒、乙酸乙酯、正己烷。

5、检测样品前处理过程∶（1）将待测样品的不可食部分去除，剩余可食部分从不同部位挑选约400g用组织捣碎机捣碎，然后用均质机进一步捣碎均质,取大约3g左右放入50mL离心管中，加入6mL乙酸乙酯,混合均匀后放入离心机中离心。（2）取离心好的样品上清液4mL放入10mL的离心管中氮气吹干，同时取4mL乙酸乙酯放入10mL的离心管中氮气吹干做空白对照。（3）在吹干好的样品中加入1mL正己烷、1mL缓冲溶液、充分振荡混匀离心后取上层分析。

6、指标测定∶两种试剂盒的假阳性率测定 采用两种试剂盒分别检测50个水产品样品，阳性样品（残留量≥0.3μg/kg）用气相色谱法进行确定，以计算其假阳性比率。

7、结果分析∶两种试剂盒检测水产品样品的假阳性率比较

（1）两种试剂盒检测的50个样品，分别有7个和10个样品的CAP检测值呈阳性，经过气相色谱法进行确定有两个样品确定为阳性结果，其余样品均为假阳性，两个试剂盒检测氯霉素的假阳性率分别为14%和20%。

（2）不同厂家氯霉素试剂盒在检测效果上存在一定的差异性。其主要原因是各个厂家氯霉素试剂盒中的酶标记物种类和采用的检测原理不同所造成的。因此，若应用ELISA作为筛选方法，应选择一种适合鱼、虾等水产品中氯霉素残留检测的试剂盒尤为重要。

（3）在多次试验中发现不同批号的试剂盒所产生的假阳性比率不同。

（4）在试验中发现检测样品放置时间过长影响数据的稳定性和回收率，试剂盒温度应该在23℃～27℃进行，否则结果偏高。

（5）在一年的检测周期里还发现在不同的季节里购买的试剂盒在检测过程中产生的假阳性不同，在气温低的季节里购买的试剂盒所产生的假阳性比率明显低于在气温高的季节里购买的试剂盒所产生的假阳性比率，这可能跟试剂盒的保存条件有关。