铁包金按摩膏中铁包金超微粉与饮片质量对比研究

蔡 萍 李跃辉 肖 娟 万 丹 戎 宽 匡建军

(1 湖南省中医药研究院中药研究所，长沙，410013；2 杨永华全国名老中医药专家传承工作室，长沙，410013；3 湖南省中医药研究院附属医院，长沙，410006)

中药研究

铁包金按摩膏中铁包金超微粉与饮片质量对比研究

蔡 萍1，2李跃辉1，2肖 娟1，2万 丹1，2戎 宽1匡建军3

(1 湖南省中医药研究院中药研究所，长沙，410013；2 杨永华全国名老中医药专家传承工作室，长沙，410013；3 湖南省中医药研究院附属医院，长沙，410006)

目的：采用HPLC建立铁包金按摩膏中铁包金中大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的含量测定方法，比较铁包金超微粉与饮片中上述3种成分的含量。方法：Hypersil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇-0.2%甲酸水溶液，梯度洗脱；流速：1.0 mL/min；检测波长：290 nm；柱温：25 ℃。结果：大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的线性范围分别为1.13～51 μg/mL(r2=0.999 9)、1.27～57 μg/mL(r2=0.999 5)和2.22～40 μg/mL(r2=0.999 8)，加样回收率分别为99.58%、99.47%和99.27%，RSD值分别为1.18%、1.49%和1.52%。结论：该方法灵敏度高，精密度好，对比超微粉末与饮片中3种成分含量发现，在相同提取方法中，超微粉中3种成分含量明显高于饮片，超微粉技术可提高铁包金中3种化学成分的提取率。

铁包金；超微粉；HPLC法；大黄素；大黄酚；大黄素甲醚

超微粉[1-3]是指平均粒径在1～75 μm之间的颗粒，它兴起于80年代，是一门跨学科、跨行业的高新技术。该技术被引入中草药加工领域，使药材细胞破壁率达90%以上，形成微米、纳米级中草药。由于粒径的比表面积增加，能大大提高中草药中有效成分的溶出率[4-5]，提高中草药利用率，减少中草药资源的浪费[6-7]。铁包金按摩膏主要由铁包金、大黄、生川乌、生草乌、木瓜、白芷、木鳖子、三棱、莪术等23味中药精制而成。具有活血化瘀、通络止痛的功效，铁包金[8]作为君药主要含有黄酮类[9]、苯酚类[10]、蒽醌类[11]、萜类[12]、木脂素类等成分。其中蒽醌类成分主要包含大黄素、大黄酚和大黄素甲醚[13]，徐煜纯[14]等首次采用HPLC测定了壮药铁包金中大黄酚和大黄素质量分数，发现细叶勾儿茶根、茎中蒽醌类成分的质量分数差异具有统计学意义(P<0.05)。研究表明[11]大黄素和大黄酚对D2半乳糖胺诱导的WB—F344大鼠肝表皮细胞毒性有一定保护作用，且二者具有清除氧自由基的作用，是铁包金能够起到抗肿瘤、肺结核咯血和黄疸型肝炎等治疗作用的有效成分之一。大黄素甲醚具有很强的抗炎作用。Lee[15]等研究发现大黄素甲醚能够抑制核因子激活内毒素细胞和促分裂原激活蛋白激酶，从而发挥其抗炎的作用。

本文采用高效液相色谱法测定铁包金按摩膏中铁包金药材中大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的含量，对比铁包金超微粉与饮片中上述3种成分的提取率，探索提高其有效成分的入药比率，为更好地开发铁包金按摩膏的药用价值提供参考。

1 材料与方法

1.1 仪器 Agilent 1200高效液相色谱仪(美国Agilent公司)；AL-204电子分析天平(Mettler Toledo)；KQ5200DE型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 材料 大黄酚(批号：110796-201118)、大黄素(批号：110758-200110)大黄素甲醚(110758-201013)对照品均购自中国食品药品检定研究院。HPLC级甲醇、超纯水；其余试剂均为分析纯。铁包金药材由湖南省中医药研究院中药研究所鉴定为多花勾儿茶茎。

图1 1.大黄素：2.大黄酚：3.大黄素甲醚

注：对照品溶液(A)、铁包金饮片供试品(B)和铁包金超微粉供试品(C)的HPLC色谱图

2 方法

2.1 色谱条件 色谱柱：Hypersil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：A为甲醇，B为0.2%甲酸水溶液，梯度洗脱(0～30 min，65%～85% A；32～40 min，85%～100% A)；流速为1.0 mL/min；柱温为25 ℃；检测波长290 nm；进样量：10 μL；分析时间为40 min。色谱图见图1。

2.2 对照品制备及标准曲线绘制 精密称取大黄素、大黄酚和大黄素甲醚适量，置于容量瓶中，加甲醇溶解并稀释到刻度，摇匀。大黄素、大黄酚和大黄素甲醚浓度分别为102 μg/mL、114 μg/mL、40 μg/mL。标准曲线的制备及线性关系考察：精密吸取上述3种对照品溶液适量，配置成混合对照品溶液，过0.45 μm微孔滤膜。注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。结果见表1。

表1 3种对照品线性方程及相关系数

2.3 样品的制备

2.3.1 超微粉体的制备 铁包金药材经粉碎成粗粉，在60 ℃干燥至水分约为6%，振幅为100 HZ，振动粉碎时间为10 min，粉碎温度为0～10 ℃，经测定：粒度<75 μm的占96.59%。

2.3.2 供试品溶液的制备 精密称取铁包金超微粉末与饮片各约4 g，置锥形瓶中，加入甲醇25 mL，称重，置水浴中加热回流1 h，取出，放冷，再称重。用甲醇补足减失量，摇匀、过滤置于具塞锥形瓶中，水浴蒸干至少量，精密加入8%(体积分数，下同)HCl溶液25 mL，超声5 min，再加入二氯甲烷25 mL，置水浴中加热回流30 min，取出，冷却。置于分液漏斗中，用少量二氯甲烷洗涤锥形瓶，洗液合并。取二氯甲烷层，蒸干，残渣加甲醇溶解。移至5 mL容量瓶中，加甲醇定容，摇匀即得。铁包金超微粉及饮片样品图见图1。

2.4 精密度试验 分别精密吸取大黄素102 μg/mL、大黄酚114 μg/mL和大黄素甲醚40 μg/m对照品溶液2.5 mL、2.5 mL和5 mL至20 mL容量瓶中，加甲醇定容，配置制成混合对照品溶液(大黄素12.75 μg/mL、大黄酚14.25 μg/mL和大黄素甲醚10 μg/mL)，按上述色谱条件连续进样6次，大黄素、大黄酚和大黄素甲醚峰面积RSD分别为3.73%、3.64%和3.43%(n=6)，结果表明仪器精密度良好。

2.5 稳定性试验 取1号铁包金超微粉，按“2.4.2”项下方法制备得到供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、12、24、48 h进样。计算大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的含量，其RSD值分别为0.83%、0.81%和1.11%，表明在48 h内供试液稳定性良好。

2.6 加样回收率试验 称取2号铁包金超微粉末样品4.5206 g，按照2.4.2供试品处理方法对样品进行处理。从供试液中吸取供试品600 μL，依次加入大黄素对照品100 μL(102 μg/mL)、大黄酚对照品100 μL(114 μg/mL)和大黄素甲醚对照品200 μL(40 μg/mL)混匀，微孔滤膜滤过，得加样回收液，重复做6份，进样10 μL，测定峰面积。大黄素、大黄酚及大黄素甲醚的平均回收率分别为99.58%、99.47%和99.27%，其RSD值分别为1.18%、1.49%和1.52%，

2.7 样品测定 本实验测定了湖南产地3个批次的样品。样品处理方法见“2.4.2”供试品溶液的制备，得供试品，按上述色谱条件测定，记录峰面积，按外标法计算含量。含量测定结果见表2。

表2 铁包金超微粉与饮片中3种化学成分含量测定结果

3 结果

从表中可以看出超微粉中大黄酚、大黄素和大黄素甲醚的含量均高于饮片。铁包金属于根茎类药材，常以饮片入药，其有效成分很难充分溶解出来，铁包金超微粉3种成分含量高于饮片，可能由于细胞破壁率提高，促进了细胞内的有效成分在短时间内大量溶出，提高了提取效率。

4 讨论

本文旨在建立高效液相色谱法测定铁包金按摩膏中铁包金超微粉与饮片中大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的含量测定。主要研究铁包金超微粉与饮片中上述3种成分对比研究实验。文章考察了流动相组成甲醇和水，以及甲醇和0.2%甲酸水。实验表明，在水相中加入0.2%的甲酸有利于改善各个化合物的峰性。同时采用梯度洗脱，3种化合物得到快速分离。本文测定了湖南产地3批次铁包金超微粉与饮片中大黄素、大黄酚和大黄素甲醚的含量，从实验结果来看，超微粉中3种成分的含量均高于同批次饮片。在同一提取方法下超微粉体技术很好地提高铁包金药材中这3种成分的提取率，增加入药比率，采用超微粉碎技术可节省中药材资源，促进中药产业长足发展。

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(2015-02-06收稿 责任编辑：张文婷)

Quality Comparison between Submicron Powder and Slices in Berchemia Lineata Massage Cream

Cai Ping1, 2, Li Yaohui1, 2, Xiao Juan1, 2, Wan Dan1, 2, Rong Kuang1, Kuang Jianjun3

(1InstituteofChineseMateriaMedia,HunanAcademyofTraditionalChineseMedicine(TCM),HunanChangsha410013,China；2InheritanceStudioofYangYong-hua,HunanChangsha，410013,China；3TheAffiliatedHospitalofHunanAcademyofChineseMedicine,Changsha410006,China)

Objective:Using HPLC to determine the contents of emodin, chrysophanol, and physcion in Berchemia Lineata, which was used to produce berchemia lineata massage cream, and to compare the he extraction rates of these three components in the berchemia lineata submicron powder and slices. Methods: Using C18column (250 mm×4.6 mm, 5μm), reverse HPLC, mobile phase: water with 0.2% formic acid, ethanol. Gradient elution system were made in this methond. Flow velocity:1.0 mL/min. Column temperature: 25 ℃. Determine wavelength: 290 nm. Results: The linear range of Emodin, chrysophanol, and physcion in berchemia lineata are 1.13～51 μg/ml (r2=0.999 9), 1.27～57 μg/ml(r2=0.999 5) and 2.22～40 μg/ml (r2=0.999 8) respectively. The standard recovery of emodin, chrysophanol, and physcion are 100.67% withRSD1.59%, 99.72% withRSD1.20% and 100.29% withRSD1.09% respectively. Conclusion: This method has high accuracy and sensitivity. Also, under the same extraction method, the contents of three components in submicron powder are obviously higher than those in the slices, meaning that ultra structure-powder technique could improve the extraction efficiency of these three components.

Berchemia Lineata; Submicron powder; HPLC; Emodin; Chrysophanol; Physcion

湖南省中药管理局项目(编号：2013133)

蔡萍(1975.7—)，女，硕士研究生，副研究员，研究方向：中药制剂及质量标准研究，E-mail:330343348@qq.com

匡建军(1973.4—)，男，博士研究生，研究员，副院长，研究方向：中西结合对脊柱骨关节病的防治与研究，E-mail:973541411@qq.com

R284.2

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2015.11.036