金标斑点法定量快速检测C反应蛋白的方法学评价

金 娣

C 反应蛋白(C-reactve protein，CRP)是最早认识的一种非特异性急时相反应蛋白，当炎症发生、组织损伤、各种急性和慢性感染、心肌梗塞、创伤、恶性肿瘤等疾病时，CRP 血中浓度升高，并且随病程进展而变化［1］。近年来国内采用快速定量方法分析对CRP 进行分析。本文选用金标斑点定量法对56例患者血清CRP 含量进行测定，现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 来源于本院门诊和住院随机抽取的56 例患者血清标本。

1.2 方法 仪器:Qpad 型金标斑点定量分析仪由上海奥普公司提供、7600 全自动生化分析仪由日本日立公司提供。试剂:奥普公司提供的全量程快速金标斑点C 反应蛋白检测试剂合:日本和光株式会社提供的CRP 试剂盒及校准品。测定和分析方法:奥普公司的金斑点定量试剂盒严格按照说明书进行测定;日立7600 的C 反应蛋白测定按照仪器常规程序进行测定。采用线性试验、精密度试验、准确性试验、对比试验和干扰试验对Qpad 金标班点定量C 反应蛋白分析仪进行方法学评价。统计学处理使用SPSS 软件进行统计分析。

2 结果

2.1 线性试验 取CRP 高浓度混合血清(125.0 mg/L)1 份，依次作80%、60%、40%、20%、10%稀释，以免疫斑点定量法测定CRP 值。每个浓度标本测定2 次取均值。将测定结果与理论值进行回归分析。结果:相关系数R2=0.999，回归方程为Y=0.9533x+1.38。见图1。

2.2 精密度试验 分别选取CRP 的高、中、低值新鲜标本各l 份，每份标本重复测定20 次，计算其批内变异系数(CV):把上述血清标本分装20 份后于－20℃保存，每天各取一份稳定至室温充分混匀后测定，连续测定20 天，计算其批间变异系数(CV)。见表1。

图1 Qpad 金标班点定量C 反应蛋白分析仪的CRP 线性试验

表1 CRP 金标斑点法的批内、批间精密度试验(CV%)

2.3 回收试验 取数份无溶血、脂血及黄疸的新鲜血清混合后分为三份，每份0.9 ml。一份加入0.1 ml 生理盐水作为基础管;另外两份分别加入浓度为93.1 mg/L 和150.3 mg/L 的标准液各0.1 ml。每份样本重复检测4 次，结果取平均值。测得回收率分别为98.2%和97.8%，平均回收率为98.1%。回收试验结果，见表2。

表2 血清CRP 干化学法的回收试验结果

2.4 对比试验 用金标斑点法和湿化学法分别对56 例临床随机标本进行定量测定。对其结果进行相关分析。相关性良好R2=0.9893，回归方程为Y =0.9701x +0.3856。并进行t检验，两者结果比较无显著性差异(P＞0.05)。见图2。

图2 金标斑点、湿化学对比试验。

2.5 干扰试验 在1 份已知浓度(181.0 mg/L)新鲜混合血清中分别加入一定量的血红蛋白、胆红素、甘油三酯后测定其含量。当血红蛋白浓度在2.8 g/L 以下，胆红素浓度156 μmo1/L 以下，甘油三酯浓度5.3 mmol/L 以下对本法测定基本无干扰(偏差＜5%)。见表3。

表3 血清CRP 干扰试验结果

3 讨论

CRP 长期以来一直被临床看作细菌感染等炎症反应的标志物，可以用于诊断多种炎性疾病［2］。一些资料报道可根据患者血中CRP 浓度的变化预测冠心病病程进展，并指导临床治疗及疗效判断［3-4］。

目前实验室检测CRP 主要有免疫比浊法及金标斑点快速定量法。免疫比浊法测定CRP 灵敏、准确，在临床得到广泛应用。但是需要大型仪器，操作复杂，价格昂贵，检测周期较长，难以实现快速检测，从而限制了其在急诊检测中的应用。用金标斑点快速定量检测的优点是标本用量少，检测快速，价格低廉，尤其适合急诊常规感染患者的筛查及床边检测(POCT)，临床检测中显示出良好的应用前景。为了全面了解其检测CRP 的性能是否达到到临床需求以及与传统方法之间的差别，我们进行了全面性能评估与比对。结果显示金标快速斑点法与免疫比浊法相关性良好，具有较好的精密度，不易受到干扰。由于实验条件的限制，本次实验验证CRP 浓度在125 mg/L 以下表现出良好的线性关系，实际检测中线性范围可能更高。

值得注意的是，在Qpad 的检测过程中，完成最后一点洗涤过程后，如测试板放置的时间控制不当，很可能会导致检测结果偏高;在我们的实验中推荐放置30 s 以上，最好不要超过5min，这样测出的结果重复性更好。同时在采用全血模式下必须根据红细胞压积测定结果来手工乘以相应的校正系数，这可能会导致较大的误差，限制了全血检测CRP 的应用。

［1］张玲玲，王园园，张润香，等.CRP 监测在ICU 早期感染诊断中的价值［J］.实用临床医学，2007，8(12):12-13.

［2］伊学军，翟建新.血清降钙素原与C 反应蛋白在细菌感染性疾病中的临床应用［J］.国际检验医学杂志，2014，4(35):490-491.

［3］周建光，杨 梅.超敏C 反应蛋白对冠心病的诊断预测及预后判断的意义［J］.实用医技杂志，2008，15(4):500-502.

［4］易朝阳，游其勇.高敏性CRP 在心血管疾病中的应用［J］.医学检验与临床，2009，20(2):81-82.