不同血塞通胶囊的人参皂及三七皂苷溶出度对比研究

张晴 杜守颖 陆洋 白洁 李鹏跃 滕会会 杜秋

不同血塞通胶囊的人参皂及三七皂苷溶出度对比研究

张晴 杜守颖 陆洋 白洁 李鹏跃 滕会会 杜秋

目的 建立测定血塞通胶囊中人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd及三七皂苷R1溶出度的检测方法,并比较3种不同血塞通胶囊溶出度情况,为剂型改进提供依据。方法 采用HPLC法检测5种皂苷的体外溶出度,计算并绘制累积溶出曲线,通过相似因子(f2)分别比较不同血塞通胶囊间5种皂苷溶出度的差异及每种胶囊中各皂苷间的溶出度差异,并采用质量权重系数法将血塞通胶囊中三七总皂苷组分的溶出曲线进行整合。结果 维和硬胶囊和络泰软胶囊中5种皂苷在30分钟内累积溶出率均达到60%以上,12小时内均达到85%以上,而理洫王软胶囊各成分成分30分钟累积溶出率仅为3%,12小时内达到40%,3种血塞通胶囊间溶出曲线f2均小于50,各胶囊中5种皂苷间f2均大于50。3种血塞通胶囊的溶出过程存在显著性差异,以油相为内容物基质的理洫王软胶囊相对于维和硬胶囊及络泰软胶囊显示出缓释作用,5种皂苷间溶出行为无显著性差异,呈现出同步性,与整合结果趋势相同。结论 胶囊壳及内容物基质的不同对胶囊的溶出过程存在一定的影响,油相基质具有缓释作用,血塞通胶囊中5种皂苷的溶出具有同步性。

血塞通胶囊; 缓释; 多成分; 质量权重系数法

血塞通胶囊是以三七总皂苷(panax notoginseng saponins,PNS)为有效成分的中成药制剂,用于脑路瘀阻、中风偏瘫、胸痹心痛等。三七总皂苷可抑制心肌细胞凋零[1],保护神经细胞缺血损伤[2],促进缺血再灌注后血管新生[3],提高免疫力[4]等。药物的剂型不同会直接影响有效成分溶出、吸收及临床疗效。本实验通过比较3种不同血塞通胶囊的溶出曲线,分析了血塞通胶囊剂型因素(胶囊壳、内容物基质)对药物溶出情况的影响,为工艺改进、指导临床用药提供依据。

1 材料与方法

1.1 药品与试剂

血塞通胶囊(维和,云南维和药业股份有限公司,批号120917);血塞通软胶囊(理洫王,昆明圣火药业,批号20121017);血塞通软胶囊(络泰,昆明制药集团股份有限公司,批号131009-10);三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd对照品(中国食品药品检定研究院,批号分别为110745-200617、110703-201128、110754-201123、110704-201223、111818-201001);乙腈(色谱纯,美国Fisher公司),甲醇(分析纯,北京化工厂,批号20110114),水为娃哈哈纯净水。

1.2 仪器

Agilent1260高效液相色谱仪;RCZ-8M溶出试验仪(天津市天大天发科技有限公司);KQ 5200 DA型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);赛多利斯BSA 224S型电子分析天平(北京赛多利斯公司)。

1.3 色谱条件

色谱柱:Agilent Extend-C18色谱柱(4.6 mm× 250 mm,5μm),WATCH预柱(柱芯型号WATCH Y164);流动相乙腈(A)-水(B),梯度洗脱,0～25分钟,19%A;25～50分钟,19～45%A;50～55分钟,45～55%A;55～65分钟,55～60%A。柱温30℃;检测波长203 nm;流速1.5 mL/min。对照品溶液及溶出供试品溶液的色谱图见图1。

1.4 对照品溶液的制备

取对照品三七皂苷 R14 mg、人参皂苷 Rg122 mg、人参皂苷Re 3 mg、人参皂苷Rb117 mg、人参皂苷Rd 6 mg,精密称定,置10 mL量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,即得。

1.5 供试品溶液的制备

取血塞通胶囊1粒,采用溶出度测定法小杯法(《中华人民共和国药典》2010年版二部附录XC溶出度测定第三法)装置,以200 mL水为溶出介质进行溶出实验,温度37℃,转速为50 rmp。每个时间点取样1 mL,补液1 mL。取样时间为2、5、10、15、30、60、90分钟、2、4、6、12小时。精密移取溶出液和甲醇各0.5 mL,混匀,即为供试液,测定各成分含量。

1.6 方法学考察

线性关系考察:精密吸取对照品储备液,依次稀释得到6个不同浓度的对照品溶液,按上述色谱条件测定峰面积,以峰面积为纵坐标(Y),浓度为横坐标(X),进行线性回归,三七皂苷R1回归方程为Y=4.435X-9.652,r=0.9999;人参皂苷Rg1回归方程为Y=4.597X+32.934,r=0.9999;人参皂苷Re回归方程为Y=5.511X-17.918,r=0.9999;人参皂苷Rb1回归方程为Y=4.531X+12.221,r=0.9999;人参皂苷 Rd回归方程为 Y=5.429X+8.167, r=0.9999。三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷 Rb1、人参皂苷 Rd分别在22.28～544.00μg/mL、73.06～1783.60μg/mL、32.33～789.43μg/mL、51.38～1254.40μg/mL、15.62～381.38μg/mL与峰面积线性关系良好。

精密度实验:取“1.5”项下溶出度供试品溶液(60分钟溶出液),重复进样检测6次,结果人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd及三七皂苷R1的6次进样峰面积积分值RSD分别为0.96%、2.01%、0.72%、0.60%和1.53%,表明仪器精密度良好。

稳定性实验:取“1.5”项下溶出度供试品溶液(60分钟溶出液)于0、2、4、8、12、24小时进行测定,计算各成分在各时间点峰面积RSD值。结果人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd及三七皂苷R1这5种皂苷峰面积RSD均低于3.0%,表明样品溶液24小时内稳定性良好。

重复性实验:按“1.5”项下溶出度供试品溶液(60分钟溶出液)制备方法及样品处理方法重复制备6份样品,检测并计算各成分峰面积RSD值。结果人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1、人参皂苷Rd及三七皂苷R1这5种皂苷峰面积RSD均低于3.0%,表明该方法的重复性良好。

1.7 3种血塞通胶囊溶出曲线相似因子拟合

1.8 采用质量权重系数法整合血塞通胶囊中5种皂苷的溶出曲线

通过质量权重系数法分别将血塞通胶囊中PNS组分的溶出曲线进行整合,可以将多组分制剂的溶出过程简化为一个整体行为[5]。以组分的质量分数为整体单位计算各成分质量权重系数,根据权重系数公式:

φR1=(933.13/4737.72)×100%=19.70%;

φRg1=(801.01/4737.72)×100%=16.91%;

φRe=(947.14/4737.72)×100%=19.99%;

φRb1=(1109.29/4737.72)×100%=23.41%;

φRd=(947.15/4737.72)×100%=19.99%

罗恬被带到了护城河边，一辆汽车被吊车从河里拖了出来，四个门都被铁链锁住了。罗恬远远就看见了那是赵炎的车子，可是直到警察推着她去认尸，她才胆怯地走上前。赵炎半仰在座位上，全身都已经腐烂了。

进一步整合血塞通胶囊溶出曲线。

2 结果

2.1 溶出实验结果

取3种血塞通胶囊的溶出度供试品溶液,分别按照“1.2.1”项下色谱条件进行检测,计算5种皂苷在各时间点的累积溶出率,绘制溶出曲线,结果见图2。

2.2 3种血塞通胶囊溶出曲线相似因子拟合结果

采用相似因子(f2)法比较三七皂苷R1及人参皂苷Rg1、Re、Rb1、Rd在3种血塞通胶囊间溶出的差异,并分别比较每种胶囊中5种皂苷之间的溶出差异,分析结果见表1～4。对于5种皂苷的溶出,维和硬胶囊与络泰软胶囊f2均在40～45,理洫王软胶囊与其他2种胶囊f2均小于20。各血塞通胶囊中5种皂苷间的f2均大于50,因此可以判断3种血塞通胶囊的溶出行为存在显著性差异。而各血塞通胶囊中5种皂苷之间溶出过程呈现同步性,无显著性差异。

2.3 采用质量权重系数法整合血塞通胶囊中5种皂苷的溶出曲线结果

进一步整合血塞通胶囊溶出曲线,结果见图3,维和硬胶囊及络泰软胶囊中PNS组分在60分钟内累计溶出率达到60%,12小时内达到90%。理洫王软胶囊中PNS组分在60分钟内累计溶出率仅为13%,12小时内达到45%。

3 结论与讨论

从图2溶出曲线可知,维和硬胶囊和络泰软胶囊中5种皂苷在30分钟内累积溶出率均达到60%以上,12小时内均达到85%以上,而理洫王软胶囊各成分30分钟累积溶出率仅为3%,12小时内达到40%。拟合结果显示3种血塞通胶囊的溶出曲线f2均小于50,可知三者的溶出过程存在显著性差异,理洫王软胶囊存在缓释现象。各胶囊中5种皂苷成分间f2均大于50,5种皂苷的溶出行为无显著性差异,呈现出同步性。

采用质量权重系数法,分别对不同血塞通胶囊中PNS组分释药系统的溶出曲线进行整合,结果同样表明理洫王软胶囊具有缓释作用。此方法便于评价复杂的中药组分的整体溶出行为,充分体现中药整体观的理念,为中药多组分制剂的溶出评价提供新的思路。

3种胶囊溶出过程的差异,可能跟胶囊壳和胶囊内容物的不同有关。经观察硬胶囊在水中2～3分钟即崩解,三七总皂苷在水中迅速溶出。软胶囊在7～8分钟开始崩解,故前30分钟软、硬胶囊的累积溶出率差异较大。络泰软胶囊内容物基质为PEG,具有良好的水溶性,胶囊崩解后5种皂苷能够在介质中充分溶解,其崩解后溶出曲线和维和硬胶囊相似。理洫王软胶囊因其油性基质的存在,内容物漂浮于水面,三七总皂苷从中缓慢释放,故溶出缓慢,溶出曲线较平缓。可见由于选用的剂型、辅料及生产工艺等的不同,可能导致血塞通有效成分体外溶出过程存在较大差异。5种皂苷成分的溶出过程无显著性差异,从表2～4中可以看出,人参皂苷Rb1与Rd、Rg1与Re间溶出行为更接近,推测是由于其结构相似,前两者属于人参二醇型皂苷,后者属于人参三醇型皂苷。

三七总皂苷口服给药后吸收不完全,生物利用度较低[6],一天需服用多次,因此有必要设计一种三七总皂苷的缓释制剂以提高生物利用度及患者顺应性。冯亮等[7]通过制备三七总皂苷的骨架型凝胶缓释片后显著改善制剂的生物利用度。冯亮等[8]发现三七总皂苷缓释片与普通片相比,在Beagle犬体内的达峰时间延长,峰浓度降低,平均滞留时间延长。本研究结果可知,理洫王软胶囊以油相为内容物基质同样可以起到缓释的作用,这会进一步影响药物体内吸收,提高药物在胃肠道的滞留时间,改善药物的生物利用度从而影响疗效,值得进一步深入研究,为药物剂型改进及指导临床合理用药提供科学依据。

[1] 华新宇,王晓兰,康美清,等.三七总皂苷对慢性心力衰竭患者心功能及血浆细胞凋亡相关因子的影响[J].中国中医急症, 2014,23(12):2368-2370.

[2] 蒋会慧,王园园,胡东华,等.三七总皂苷对大鼠大脑缺血再灌注VEGF表达的影响[J].长江大学学报(自科版),2015,12 (12):1-5.

[3] 刘英吉.三七总皂苷对缺血损伤神经细胞的保护作用研究[D].长春:吉林大学,2013.

[4] 彭芝萍.三七总皂苷缓释片制备工艺及体内外释药研究[D].武汉:湖北中医药大学,2012.

[5] 商宇.三七总皂苷调节小鼠上呼吸道菌群及局部免疫的实验研究[D].昆明:云南中医学院,2012.

[6] 郁丹红,贾晓斌.基于生物药剂学性质的中药组分相似性分析方法的建立[J].中国中药杂志,2013,38(12):1847-1850.

[7] 冯亮,蒋学华.三七总皂苷在大鼠体内的药物动力学研究[J].华西药学杂志,2010,25(1):46-49.

[8] 冯亮,蒋学华,王凌.三七总皂苷缓释片的释放性能及体内外相关性研究[J].中国药业,2009,18(21):18-20.

Comparison of dissolution of ginsenoside and notoginsenoside form different Xuesaitong capsules

ZHANGQing,DU Shou-ying,LU Yang,et al.School of Chinese Medicin,Beijing University of Chinese Medicine,Beijing 100102,China.

DU Shou-Ying,E-mail:dushouying@263.net;Lu Yang,E-mail:Landocean28@ 163.com

Objective To establish the methods for determining the dissolution of ginsenoside Rg1,Re,Rb1,Rd and notoginsenoside R1in Xuesaitong capsuls,and study the dissolution condition of the three capsules,which can provide a basis for the improvement of dosage form.Methods HPLC and UV were used to detect the in vitro dissolution in the three capsules,respectively,cumulative dissolution curves were drawn and similar factors of the curves were compared.Furthermore,the multicomponernt drug release curves were integrated by using Weight coeffieientmethod.Results The dissolution of the fivesaponins in Weihe hard capsule and Luotai soft capsule were all over 60%within 30 minutes,and over 85%within 12 hours.While the dissolution of the five saponins in Lixuwang soft capsule in were all over 3%within 30 minutes,and over40%within 12 hours.The similarity factor(f2)values of the dissolution of different capsules were all less than 50 and that of the five saponinswere allmore than 50.The dissolution of different Xuesaitong capsules has significant differences.The Lixuwang soft capsule which had oily contents showed sustained release effect compared with the other two capsules.Conclusion Different shells and contents have a certain influence on the dissolution of Xuesaitong capsules.The oily contents shows sustained release effect.The five saponins could release from the capsule synchronously.

Xuesaitong capsule; Sustained-release; Multi-component; Quality weight coefficientmethod

R286

A

10.3969/j.issn.1674-1749.2015.11.022

2015-06-16)

(本文编辑:蒲晓田)

国家科技重大专项(2014ZX09301306-009);北京市科技新星计划(xx2015A048)

100102 北京中医药大学中药学院[张晴(硕士研究生)、杜守颖、陆洋、白洁、李鹏跃、滕会会(硕士研究生)、杜秋(硕士研究生)]

张晴(1991-),女,2013级在读硕士研究生。研究方向:中药新剂型与新技术研究。E-mail: zhangqing811@163.com

杜守颖(1960-),博士,教授,博士生导师。研究方向:中药新剂型与制剂关键技术研究。E-mail: dushouying@263.net;陆洋(1981-),博士,副教授,硕士生导师。研究方向:中药新剂型与制剂关键技术研究。E-mail:landocean28@163.com。杜守颖与陆洋并列为本文通讯作者