妊娠期妇女高危型人乳头瘤病毒感染与宫颈病变的相关性研究

谢建渝，虞柯静，董国强，蔡春玲，刘 莉，黎 义，邹光美

(重庆华西妇产医院 400039)



·论 著·

妊娠期妇女高危型人乳头瘤病毒感染与宫颈病变的相关性研究

谢建渝，虞柯静，董国强△，蔡春玲，刘 莉，黎 义，邹光美

(重庆华西妇产医院 400039)

目的 探讨妊娠期妇女高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染与宫颈病变的相关性。方法 选取重庆华西妇产医院就诊的18～43岁妊娠期妇女486例，行第二代分子杂交捕获技术(HC2-HPV-DNA)和超微病原体可视检测技术(TH)2种方法联合检测及电子阴道镜下病理活检，以病理活检结果为诊断宫颈病变的金标准。结果 486例妊娠期妇女HR-HPV检测阳性患者161例,阳性率33.12%(161/486)；病理组织学诊断出宫颈癌(ICC)及癌前病变(CIN)24例;HPV阳性患者的宫颈癌及癌前病变22例，敏感性91.67%(22/24)。HR-HPV感染情况在不同年龄段分布，差异有统计学意义(P<0.05)，HR-HPV病毒载量及阳性表达率越高，宫颈病变的程度越高。结论 妊娠期妇女不同年龄段的HR-HPV感染率不同；HR-HPV阳病毒载量与CIN及ICC发生有关，与宫颈病变的发生过程有关，但与宫颈病变的严重程度无关；妊娠期妇女HPV感染的宫颈病变阳性率和病毒载量与非妊娠期妇女相似；HC2-HPV-DNA法是目前筛查癌前病变及宫颈癌的最佳方法。

第二代分子杂交捕获技术； 超微病原体可视检测技术； 病理活检； 宫颈病变； 高危型人乳头瘤病毒

宫颈癌(ICC)是严重威胁妇女健康的疾病之一，它位于女性恶性肿瘤的第2位，2008年世界卫生组织(WHO)公布的全球ICC病例已从2002年的49.3万增长到2008年的52.9万例，病死人数达到27万例。目前，我国的ICC发病率正以每年2.3%～3.5%的速度递增，发病率与死亡人数约占世界的1/3[1]。ICC的发生与人乳头瘤病毒(HPV)感染密切相关,本研究通过对2012年11月至2014年10月重庆华西妇产医院就诊的483例妊娠期妇女采用第二代分子杂交捕获技术(HC2-HPV-DNA)和超微病原体可视检测技术(TH)2种方法联合检查，并以在电子阴道镜下所取可疑标本病理诊断为金标准，分析妊娠期妇女高危型HPV感染的状况及病毒载量，并探讨其与宫颈病变发生的关系[2]。现将研究结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2012年11月至2014年10月重庆华西妇产医院产科门诊收治的妊娠期妇女486例，年龄18～43岁,平均(27.86±9.25)岁，所有研究对象均知情同意并全部签署知情同意书，研究课题经过本院伦理委员会批准通过。

1.2 方法

1.2.1 HR-HPV DNA检测 采用专用采样器采集标本，先将采样器刷伸进宫颈管外口，再逆时针方向旋转3圈，刷取宫颈脱落细胞，放入缓冲保存液，置于4 ℃冰箱保存待查。标本采样前3 d内，不得用药冲洗阴道或在阴道内用药，不得进行醋酸/碘液涂抹阴道，应避免经期采样。HC2-HPV-DNA检测采用美国Digene公司第二代杂交捕获技术，可检测HPV高危亚型中16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59及68这13种DNA。该方法已通过中国食品药品监督管理局(SFDA)注册及欧洲安全认证，是美国食品药物监督管理局(FDA)唯一批准的HPV DNA检查技术，并被世界卫生组织推荐为检测HPV的“金标准”。采用美国Digene公司的HC2试剂盒进行检测，严格按照说明书进行操作，以样本光量读数与阴性测定值之比值(RLU/CO)>1.0时表示为HPV 阳性。

1.2.2 TH宫颈脱落细胞学检查 该方法采用超微病原体可视检测技术。先用无菌宫颈采样刷收集子宫颈外口、宫颈管的脱落细胞,再将采集的细胞立即洗入盛有NaCl保存液的保存瓶中,以4 000 r/min离心10 min,再用超微病原体可视系统进行细胞学检查。

1.2.3 病理学诊断 在阴道镜下取病变最严重处，采用多点取材；如无异常病变，则取阴道内口与宫颈外口移行带第3、6、9、12点处标本。常规苏木精-伊红(HE)染色显微镜下观察，以宫颈组织出现炎性、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、ICC为发生病变。

2 结 果

2.1 HR-HPV DNA检测结果 阳性患者161例,阳性率33.12%(161/486)；阴性患者325例，阴性率66.87%(325/486)。不同年龄组HPV感染结果分析见表1。

表1 妊娠期妇女不同年龄组HPV感染结果分析

结果显示，HPV感染率在21～35岁年龄段高于其他年龄段，差异有统计学意义(P<0.05)。因41岁以上年龄组人数较少，未作评价。

2.2 HC2-HPV-DNA和TH 2种检查结果的比较 以病理组织学诊断为金标准，HC2-HPV-DNA检查方法阳性率73.41%(165/237)；TH检查方法阳性率69.62%(26/237)，2种检查方法灵敏度相近，差异无统计学意义(P>0.05)。各种宫颈病变的2种检查结果分析见表2。

HC2-HPV-DNA和TH 2种检查方法结果比较，在486例标本中，病理检查诊断为宫颈病变者237例，其中CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、ICC者24例；HC2-HPV-DNA诊断为CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、ICC者22例，敏感度为91.67(22/24)。TH宫颈脱落细胞学检查诊断为CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、ICC者20例，敏感度为83.33%(20/24)。ICC病例仅有1例，HC2-HPV-DNA和TH 2种方法均诊断为阳性，故敏感度为100%(1/1)。2种检测方法灵敏度相近，差异无统计学意义(P>0.05)。

表2 各种宫颈病变HC2-HPV-DNA和TH检查结果分析[n(%)]

2.3 HR-HPV载量与宫颈病变的关系 在检查结果中，CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和ICC病变的HR-HPV载量明显高于炎性组，差异有统计学意义(P<0.01)。CINⅡ、CINⅢ病变的HR-HPV载量明显高于CINⅠ，差异有统计学意义(P<0.05)。ICC病变的HR-HPV载量与CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表3。

表3 HR-HPV病毒载量与宫颈病变的关系

注：与炎性组比较，*P<0.01;与CINⅠ比较，#P<0.05;与CINⅠ比较，△P>0.05。

3 讨 论

HPV是一类无包膜的小DNA病毒，属于乳多空病毒科。病毒体呈球形，基因组为一双链环状DNA，衣壳二十面体立体对称，无包膜。HPV的16、18、45及58等亚型与ICC等恶性肿瘤的发生有关，也称高危型HPV。与癌有关的E6、E7、L1、L2四个基因，其中E6、E7是致癌基因，LI、L2跟预防性疫苗关系密切。高危型HPV的早期基因编码产物E6和E7蛋白有致癌作用。HPV的E6和E7转化蛋白，可分别与P53和Rb抑癌蛋白结合并使之失活，因而干扰了正常细胞周期、使细胞发生恶性转化。

HPV感染引起ICC通常要经过潜伏期、亚临床期、临床症状期和HPV相关肿瘤期，通过癌前病变,最终导致ICC。其病理过程大约需要10年，若在此期间能及早发现高危HPV感染，清除女性生殖道HPV的持续感染，阻断CIN的形成，尽早治疗上皮内瘤变，防止其向子ICC的演进显得尤为重要。因此，HPV检测是早期预警ICC非常有意义的指标，检测高危HPV感染是预防ICC的必要措施。

2008年生理学医学诺贝尔奖获得者Hausen认为：几乎所有ICC患者的标本中均能找出HPV，由此证明HPV是ICC的主要病因，使ICC成为当前人类癌症中唯一明确病因的病变。2009年WHO提出在分子水平同时检测到HPV的16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68亚型即可确认为ICC高危状态。检测HPV DNA为ICC的病因学诊断带来了一场新的革命[3-4]。

国内学者吴霞等[5]报道，妊娠期妇女与非妊娠期妇女宫颈病变的发病率相似。本文对486例妊娠期妇女从不同年龄组的HPV发病率分析表明，13种HPV高危亚型阳性者为161例,阳性率为33.12%(161/486)，与国内相关报道基本一致[6]。有报道ICC的发病率为0.01%～0.10%，但CIN的发病率不一致，在0.08%～5.0%之间。本研究结果得出，妊娠期CIN的发病率为4.7%(23/486)，与国外报道基本一致[7-8]。Bergeron等[9]认为ICC主要发生在育龄期妇女，集中于20～40岁年龄段，此期为女性性活跃时期，是HPV感染的高发年龄。本研究表明，不同孕期妇女的HPV感染率，在21～35岁年龄段总体高于其他年龄段，差异有统计学意义(P<0.05)，与Bergeron等[9]的报道一致。

当前，HC2-HPV-DNA检测是评估宫颈病变发生的客观指标,也是WHO推荐的HPV检测金标准。该方法应用全长的RNA探针，避免了由于L1基因段缺失所致的假阴性，具有较高的敏感性，适用于HPV感染的诊断。而PCR只针对L1段，若L1缺失就会出现假阴性。本文的分析表明，在病理诊断为CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ、ICC的24例中，HC2-HPV-DNA检测HPV阳性者22例，敏感性为91.67(22/24)，与国内用同种方法检测HPV的敏感性为88%～100%的报道基本一致[10]。

本研究还表明，HR-HPV的病毒载量随宫颈病变的严重程度呈上升趋势，即HPV病毒含量越高，患ICC的风险越大,而HR-HPV的载量与宫颈病变的严重程度无关。笔者在2012年曾报道，非妊娠期妇女高危型HPV感染的宫颈病变的发病率为35.96%，妊娠期与非妊娠期感染的发病率及病毒载量比较，二者差异无统计学意义(P>0.05)，妊娠期ICC和CIN的生物学行为与非妊娠期相仿，妊娠本身并不能影响CIN的自然发展，一定不可忽视妊娠期和产后妇女的子宫颈疾病的筛查[11]。在国内的检测中，由于妊娠期的生理变化，易造成假阳性，产后复查，即可纠正诊断。妊娠期的宫颈病变很少发生恶化，可通过孕期观察，产后复查，以预防ICC的漏诊[12]。妊娠期CINⅡ和CINⅢ发展为ICC的风险极低，但产后的逆转相当高，因此，绝大多数妊娠期宫颈上皮内瘤无需要治疗[13-14]。妊娠期妇女TH检查异常率可达33.95%，与非妊娠期一样，TH检查和HC2-HPV-DNA检查及病理活检都是极重要的诊断方法，TH检查和HC2-HPV-DNA联合检查不会增加妊娠期流产及早产的发生，对妊娠期妇女生殖道HR-HPV高载量的妊娠期妇女应该提高警惕，同时对低载量的妊娠期妇女也要严密随访。

综上所述，本文对486例不同年龄妊娠期妇女生殖道HR-HPV感染与宫颈病变的相关性分析表明，HC2-HPV-DNA法是目前癌前病变及ICC筛查的最佳方法，不同年龄妊娠期妇女HR-HPV感染情况不同，HC2-HPV-DNA检测HR-HPV病毒载量与CIN及ICC发生有关，与宫颈病变的发生过程有关，与宫颈病变的严重程度无关。妊娠期妇女HPV感染的宫颈病变阳性率和病毒载量与非妊娠期妇女相似，二者差异无统计学意义(P>0.05)；利用HPV检测和TH检查的结果针对性地进行宫颈组织病理检查，可有效地指导CIN及ICC的临床诊断和预防，为孕期的妇女防治ICC、降低其病死率提供有效帮助。

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Correlation between cervical high-risk HPV infection with cervical lesions in pregnant women*

XIEJian-yu,YUKe-jing,DONGGuo-qiang△,CAIChun-ling,LIULi,LIYi,ZOUGuang-mei

(ChongqingHuaxiGynecologyHospital,Chongqing400039,China)

Objective To study the correlation between high risk human papilloma virus(HR-HPV) infection with cervical lesions in pregnant women.Methods A total of 486 pregnant women aged 18-43 years old treated in our hospital were selected and performed the second generation hybrid capture technique(HC2-HPV-DNA),and pathogens visual detection system(TH) and cervical biopsy under colposcopy.The pathology results served as the gold standard for the diagnosis of cervical lesions.Results Among 486 pregnant women,161 cases were positive in the HR-HPV detection with the detection rate of 33.12%(161/486);24 cases of cervical cancer(ICC) and cervical intraepithelial neoplasia(CIN) were diagnosed by histopathology,in which 22 cases were HPV positive,the sensitivity was 91.67%(22/24).The HR-HPV infection distribution had statistical difference among different age groups(P<0.05),the higher the HR-rHPV viral load,the worse the cervical lesions.Conclusion The HR-HPV infection rate is different in different ages of pregnant women;HR-HPV positive viral load is related with the occurrence of CIN and ICC,occurrence process of cervical lesions,but has no relation with the severity of cervical lesions;the positive rate of cervical lesions and viral load in pregnant women HPV infection are similar to non pregnant women;The HC2-HPV-DNA method is the best method for screening precancerous lesion and cervical cancer.

HC2-HPV-DNA； TH； pathological biopsy; cervical diseases; high risk human papilloma virus

重庆市九龙坡区科委社会发展类基金资助项目(201307)。

谢建渝，男，主任检验师，本科，主要从事实验室诊断及分子生物学诊断研究。△

，E-mail:1050015199@qq.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.15.014

A

1672-9455(2015)15-2175-03

2014-10-18

2014-12-16)