第三代HIV ELISA诊断试剂初筛试验假阳性原因分析*

吴志奇，黄慧青，陈 丹，刘雁雁，倪 芳，宋为娟，谢而付，徐华国△

(1.南京医科大学第一附属医院检验学部 210029；2.江苏省连云港市东方医院检验科 222042 )



·临床探讨·

第三代HIV ELISA诊断试剂初筛试验假阳性原因分析*

吴志奇1，黄慧青2，陈 丹1，刘雁雁1，倪 芳1，宋为娟1，谢而付1，徐华国1△

(1.南京医科大学第一附属医院检验学部 210029；2.江苏省连云港市东方医院检验科 222042 )

目的 探讨第三代HIV ELISA诊断试剂检测HIV抗体假阳性的原因。方法 对HIV抗体初筛试验呈阳性而确证试验为阴性的90例患者(HIV抗体假阳性组)的临床资料进行分析，与90例健康体检者(健康对照组)的相关实验室检测指标进行比较，分析HIV抗体假阳性结果产生的原因。 结果 HIV假阳性组白细胞计数(WBC)、乳酸脱氢酶(LDT)、α-羟丁酸脱氢酶(HBDH)水平均显著高于健康对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)；高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平明显低于健康对照组，差异也有统计学意义(P<0.05)。结论 WBC、LDH和HBDH的异常升高及HDL-C的明显降低与第三代HIV ELISA试剂初筛试验假阳性密切相关。

人类免疫缺陷病毒抗体； 筛查试验； 确证试验； 假阳性

获得性免疫缺陷综合征即艾滋病(AIDS)，由HIV感染所致，已成为21世纪危害人类健康的主要疾病之一。为了能够早期诊断HIV感染，筛查试验极为重要[1]。但现有的筛查技术，依然难以避免假阳性结果的出现，这给实验室工作带来诸多不便，也给临床诊断带来困扰。收集并分析了2010年1月至2014年4月在南京医科大学第一附属医院就诊的90例门诊及住院患者的临床资料，其HIV抗体初筛为阳性，经南京市疾病预防控制中心确证为阴性，以期明确假阳性结果的具体原因，为早期、快速、准确诊断HIV感染提供科学依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 HIV抗体假阳性组为2010年1月至2014年4月在南京医科大学第一附属医院住院及门诊的HIV抗体初筛试验呈阳性而确证试验为阴性的资料完整的90例患者(HIV抗体假阳性组)，其中男42例，女48例，年龄20～98岁，平均(51.52±18.25)岁。健康对照组为该院健康体检者90例，其中男42例，女48例，年龄24～86岁，平均(51.89±17.84)岁。研究对象均排除肝脏、血液系统和心脑血管疾病及恶性肿瘤。两组研究对象年龄差异无统计学意义(t=0.136，P=0.892)。

1.2 方法

1.2.1 HIV抗体检测 初筛HIV抗体采用ELISA法，试剂为第三代诊断试剂，由上海科华生物工程股份有限公司提供，仪器为全自动酶联免疫系统，包括MICROLAB STAR VENUS加样系统和MICROLAB FAME分析系统。对初筛试验阳性的标本，使用原试剂和胶体金试剂复检。胶体金试剂由英科新创(厦门)科技有限公司提供。筛查阳性标本送南京市疾病预防控制中心做确证试验。

1.2.2 其他实验室指标检测 生化指标检测标本为早上空腹采集静脉血3～4 mL，3 000 r/min离心5 min后分离血清于2 h内进行检测。所有生化指标均采用Olympus AU5400全自动生化分析仪进行测定，分析试剂由上海科华东菱诊断用品有限公司提供。血常规检测使用EDTA-K2抗凝静脉血，采用Sysmex EX2100血细胞分析仪及其配套试剂检测。检测指标包括：白细胞计数(WBC)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、α-羟丁酸脱氢酶(HBDH)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、脂蛋白a[LP(a)]。

2 结 果

从90例HIV抗体假阳性组标本ELISA法检测S/CO值分布可见，S/CO≤6的标本占97.78%(88/90)，见表1。HIV抗体假阳性组WBC、AST、LDH、HBDH、HDL-C、LDL-C水平与健康对照组比较，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表2。Spearman相关分析显示，WBC、LDH、HBDH、HDL-C与ELISA法假阳性率的相关系数r分别为：0.308、0.446、0.549、-0.561，在置信度为0.01时，相关性是显著的。Logistic回归分析各检测指标与假阳性结果的关系，见表3。

表1 90例HIV抗体假阳性标本ELISA法及胶体金法检测结果比较(n)

表2 两组生化指标及血常规检测结果比较

续表2 两组生化指标及血常规检测结果比较

表3 假阳性标本检测指标的Logistic回归分析

3 讨 论

目前，绝大多数实验室采用ELISA法作为HIV抗体筛查试验，假阳性结果不可避免。考虑到本院已经采用全自动酶联免疫系统进行HIV检测，检测步骤相比手工操作更加标准化，重复性好，人为因素的干扰明显减少。同时，初筛试验为阳性或有疑问时，会要求患者抽第2份标本进行重复检测，也大大地减少了随机误差和系统误差的影响。因此在分析HIV抗体假阳性标本的结果时不需要过多地考虑人为因素。

ELISA法检测HIV抗体为阳性的标本再采用胶体金法进行复检。胶体金法依靠肉眼判断结果，容易受主观因素影响。为避免漏检，凡肉眼可见的弱反应都判定为阳性，本文90例假阳性标本中，胶体金法检测HIV阳性8例。S/CO为客观指标，以S/CO≥1为阳性。本文90例HIV抗体确证阴性标本在用第三代ELISA试剂筛查时，S/CO为1.0～6.0的标本有88例，S/CO>6的标本有2例。可见随着S/CO值的升高，假阳性例数明显减少[2]。

为了找到疾病与假阳性之间的关系，本文对患者的其他实验室指标检测结果进行了分析，发现在90例HIV抗体假阳性标本所属的患者中，有10例进行过自身抗体检测，其中6例自身抗体检测呈阳性，分别为风湿科2例，肾科、呼吸科、消化科和感染科各1例，提示自身免疫性疾病产生的自身抗体可能导致HIV抗体假阳性，与之前的报道结论相近[3-4]。

90例HIV抗体假阳性标本中，WBC显著高于健康对照组(P<0.05)，可能是因为90例患者中有36例来自血液科，占40%(36/90)。由于WBC升高伴巨脾症可考虑肿瘤性疾病[5]，提示血液病患者自身或接受治疗的情况可能对HIV抗体的检测有影响。有研究表明，LDH可能与血液系统肿瘤发生、发展相关[6]。LDH水平与急性T细胞白血病患者骨髓血管增生程度呈正相关，且与肿瘤侵袭性及耐药相关[7]。LDH存在于心肌、肝脏、骨骼肌、红细胞等组织细胞的细胞质和线粒体中，在恶性肿瘤发生时，LDH和HBDH活力就会明显增高，血清中LDH和HBDH水平可以反映出细胞增殖和代谢等生物学性状。由于白血病患者肿瘤细胞富含LDH和HBDH，而且具有较强的代谢性和增殖性，因此白血病患者血清LDH和HBDH水平显著升高。本研究发现，HIV抗体假阳性标本的LDH和HBDH水平也明显高于健康对照组(P<0.05)，提示肿瘤性疾病可能是导致HIV抗体假阳性的原因之一。AST、HBDH和LDH是心肌酶谱中的一部分，在心肌梗死的诊断中具有良好的临床价值[8]。本研究中，HIV抗体假阳性组的AST、HBDH和LDH显著高于对照组(P<0.05)，提示心肌梗死可能是引起HIV抗体假阳性的原因之一。

非高密度脂蛋白胆固醇是指除HDL-C以外其他脂蛋白中含有胆固醇的总和。即非高密度脂蛋白胆固醇等于TC减去HDL-C。可见非高密度脂蛋白胆固醇与HDL-C呈负相关，即TC一定，HDL-C降低，则非高密度脂蛋白胆固醇增加。有研究发现，随着非高密度脂蛋白胆固醇水平的升高，冠心病、心肌梗死、缺血性卒中的发病风险也会增加[9]。本研究发现，HIV抗体假阳性标本的TC水平与健康对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)，而HDL-C水平明显低于健康对照组(P<0.05)，并且这90例标本中，HDL-C≤1 mmol/L的标本有56例，占62.22%(56/90)，这56例标本所属的患者中，年龄≥50岁者占50%(28/56)，提示老年冠心病、心肌梗死、脑血管病及缺血性卒中等疾病可能是HIV抗体产生假阳性的风险因素之一。Logistic回归结果也表明WBC、LDH和HBDH的异常增高及HDL-C的明显降低与第三代HIV ELISA初筛试验假阳性密切相关。

本研究结果将为HIV检测结果提供更加科学的解释，为早期、快速并准确诊断HIV感染提供科学依据。

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国家自然科学基金青年项目(81302531)；江苏省自然科学基金青年基金项目(BK20131018)；江苏高校优势学科建设工程资助项目。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.19.051

A

1672-9455(2015)19-2937-03

2015-01-26

2015-04-12)

△通讯作者，E-mail：huaguoxu@njmu.edu.cn。