不同性别Fabry患者的α-半乳糖苷酶A活性研究*

李 娟，张德莲，木拉力别克，李南方△，杨学磊，郑灵玲，黄 昱 (.石河子大学医学院，新疆 石河子 8000；新疆维吾尔自治区人民医院：.高血压中心/新疆高血压研究所；.临床医学研究 中心，乌鲁木齐 8000；.北京大学医学部医学遗传学系，北京 009)



·论 著·

不同性别Fabry患者的α-半乳糖苷酶A活性研究*

李 娟1，张德莲2，木拉力别克2，李南方2△，杨学磊3，郑灵玲3，黄 昱4(1.石河子大学医学院，新疆 石河子 832000；新疆维吾尔自治区人民医院：2.高血压中心/新疆高血压研究所；3.临床医学研究 中心，乌鲁木齐 830001；4.北京大学医学部医学遗传学系，北京 100191)

目的 了解Fabry病中不同性别患者α-半乳糖苷酶A(α-Gal A)活性情况。方法 选取一个Fabry病家系的8例患者和13例健康者，应用干血片法测定经过GLA基因检测确诊的Fabry病患者和健康者α-Gal A活性并进行比较。结果 男性患者的α-Gal A活性[(8.66±2.15)×10-15mol/(d·spot)]为健康对照者[(188.31±42.23)×10-15mol/(d·spot)]的4.6%,女性患者[(149.93±46.56)×10-15mol/(d·spot)]则为健康对照者的79.62%。男性半合子患者酶活性明显下降(P<0.05)。α-Gal A活性检测对男性半合子的灵敏度高于女性杂合子。结论 α-半乳糖苷A活性下降程度存在性别差异，男性半合子Fabry病患者酶活性明显下降。

Fabry病; GLA基因; α-半乳糖苷酶

Fabry病是1898年由Anderson和Johann Fabry提出,故名Anderson-Fabry病,简称Fabry病。它是由于α-半乳糖苷酶A(α-Gal A)先天性缺乏使其底物酰基鞘氨醇己三糖苷(Gb3)和酰基鞘氨醇己二糖苷的末端半乳糖酰基不能被降解进而不断蓄积在体内，导致皮肤、心、脑、肾、胃肠、肺等组织器官损害,也是自Gaucher病后发现的第2种溶酶体贮积病(LSDs)[1-2]。因本症缺乏特异性临床表现，筛选体系尚不完善，其误诊率和漏诊率都很高。目前针对Fabry病的诊断可以是通过在生化检查中发现α-Gal A活性下降，在病理组织中找到特征性的嗜锇性包涵体以及通过基因检测发现GLA突变[3-4]。然而病理诊断为有创检查，基因检测则需要一定周期及较高的技术要求，而α-Gal A活性检测是一快速、简便、经济的检测手段，为此本研究通过对一个Fabry病家系中不同性别的患者和健康者的α-Gal A活性进行分析比较，了解Fabry病不同性别患者中α-Gal A的活性，以期为今后提高Fabry病的检出率提供一定的理论基础。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取1个Fabry家系的8例Fabry病患者,其中男3例,女5例,平均(36.38±19.41)岁进行研究。8例中包括Fabry病先证者1例,先证者及其家系成员均经X染色体上GLA基因检测确诊为Fabry病,所有研究对象均知情同意。另对13例居住于同一地区的健康志愿者作为酶活性检测健康对照组,其中男5例,女8例,平均(46.85±18.52)岁。

1.2 方法 α-半乳糖苷酶活性测定:应用干血片法测定肝素抗凝血浆α-Gal A活性,由北京大学医学部医学遗传学系完成。荧光底物为5.0 mm 4-羟甲香豆素基-α-D-半乳糖基吡喃糖苷,抑制剂为0.1 mol/L N-乙酰-氨基半乳糖苷,标准物为4-羟甲香豆素，检测滤纸上干燥血滴(约5.5 μL)的酶活性。正常参考范围(100～500)×10-15mol/(d·spot)。

2 结 果

通过对13例健康对照组和8例Fabry患者组的α-半乳糖苷酶活性测定与比较发现：(1)对照组α-半乳糖苷酶活性平均值为(188.31±42.23)×10-15mol/(d·spot)，其中在男性健康对照组为(152.76±14.32)×10-15mol/(d·spot)，女性健康对照组为(210.53±50.70)×10-15mol/(d·spot)，男女之间差异无统计学意义(P>0.05)。(2)Fabry病患者酶活性下降，平均值为(96.96±81.15)×10-15mol/(d·spot)，且与健康对照组比较差异有统计学意义(P<0.005)。(3)Fabry病患者中3例男性半合子患者α-半乳糖苷酶活性的平均值为(8.66±2.15)×10-15mol/(d·spot)，是健康对照者的4.6%,明显低于男性健康对照组(P<0.001)，α-半乳糖苷酶活性检测灵敏度在男性半合子患者中为100%；5例女性杂合子患者的α-半乳糖苷酶活性的均值为(149.93±46.56)×10-15mol/(d·spot)，为健康对照者的79.62%，虽然较女性健康对照者有所下降，但差异无统计学意义(P>0.05)。与男性患者相比，差异有统计学意义(P<0．05)。α-半乳糖苷酶活性检测未能检测出女性杂合子患者。健康对照组与Fabry病患者一般情况比较见表1，α-半乳糖苷酶活性对Fabry病男、女患者筛检情况见表2，α-半乳糖苷酶活性在不同性别中的亚层分析情况见表3。

表1 2组一般情况的比较±s)

注：与对照组比较，*P<0.05。

表2 家系成员中男、女的基因检测及酶活性情况(n)

表3 按性别分层后2组α-半乳糖苷酶活性的比较±s)

3 讨 论

Fabry病是由于编码α-Gal A的GLA基因发生突变，使鞘糖脂特别是三聚己糖神经酰胺沉积在溶酶体内，可引起多个系统脏器的损害[5]。Fabry病常见死亡原因是肾功能衰竭、脑血管意外和心肌梗死等。此外，由于α-Gal A代谢产物的沉积是一个渐进的过程，Fabry病的临床表现也随着年龄的变化而有所不同，男性半合子平均生存期较健康人群短20年，女性杂合子平均生存期则缩短约10年[6]。在欧洲针对Fabry病的酶替代疗法已用于临床治疗，而国内尚无治疗该病的特效药物，对Fabry病的治疗多为对症治疗[7]。所以早期准确地诊断Fabry病患者，从而尽早给予治疗以减缓病情进展，成为Fabry病诊疗过程中非常重要的环节。

Fabry病的发病机制是由于α-Gal A活性缺陷导致机体内鞘糖脂异常代谢堆积致病,故酶活性测定可用于诊断Fabry病。1967年，Brady等首先提出Fabry病患者血中α-Gal A活性降低。本研究通过对一个经基因检测确诊的家系成员和健康对照者的α-Gal A活性进行分析比较，发现男性半合子患者酶活性明显减低，仅是健康对照者的4.6%，而家系中女性携带者酶活性在正常范围内，男性与女性患者之间的酶活性存在明显差异，证实了α-Gal A活性检测对于男性半合子具有非常高的敏感性及特异性，但是在女性杂合子患者酶活性检测结果可在正常范围内,从而使酶法诊断产生部分假阴性结果[8-9]。这一结果也与2005年Linthorst等[10]提出的在女性杂合子患者中，约有1/3因GLA基因上的特殊突变(如发生N215S突变)，其α-Gal A活性测定常在正常范围一致。

总之，利用α-Gal A活性检测在Fabry病女性患者筛查中易造成漏诊，进而影响其自身的生活质量，增加后代的患病率。为此，针对家系中确诊有Fabry病的患者以及Fabry病可疑的女性，在检测α-Gal A活性的同时应进行基因检测。此外，2011年，Paschke等[11]证实尿液Gb3总量和Gb3亚型可用于诊断女性Fabry病患者。但也有报道指出尿液和血浆中Gb3水平测定的可靠性和实用性还有待进一步探讨[12]。因此，寻找无创、可靠、易测的生物标志物来快速诊断并评估Fabry 病女性患者的病情，提高Fabry病检出率仍需进一步研究。

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[10]Linthorst GE，Vedder AC，Aerts JM，et al． Screening for Fabry disease using whole blood spots fails to identify one-third of female carriers[J].Clin Chim Acta，2005，353(1/2):201-203．

[11]Paschke E，Fauler G，Winkler H，et al.Urinary total globotriaosylceramide and isoforms to identify women with Fabry disease:a diagnostic test study[J]． Am J Kidney Dis，2011，57(5):673-681.

[12]Kistler AD，Siwy J，Breunig F，et al．A distinct urinary biomarker pattern characteristic of female Fabry patients that mirrors response to enzyme replacement therapy[J].PLoS One,2011,6(6):e20534.

基金项目：福建省大学生创新性课题(2011257)。 作者简介：陈金花，女，副主任技师，本科，主要从事血液检验方面的研究。

Study of alpha galactosidase A activity in different genders of patients with Fabry disease*

LIJuan1,ZHANGDe-lian2,Mulalibieke2,LINan-fang2△,YANGXue-lei3,ZHENGLing-ling3,HUANGYu4

(1.MedicalSchoolofShiheziUniversity,Shihezi,Xinjiang832000,China;2.HypertensionCenter/HypertensionInstituteofXinjiang;3.ClinicalMedicineResearchCenter,People′sHospitalofXinjiangUygurAutonomousRegion,Wulumuqi,Xinjiang830001,China;4.DepartmentofMedicalGenetics,DepartmentofMedicine,PekingUniversity,Beijing100191,China)

Objective To investigate the activity of α-galactosidase A(α-Gal A) in different genders of the patients with Fabry disease.Methods 8 patients with Fabry disease GLA gene detection diagnosed by and 13 healthy members in a family were selected and detected the α-Gal A activity by using the dried blood spots method.Results The α-Gal A activity in the male patients with Fabry disease was [(8.66±2.15)×10-15mol/(d·spot)],which was only 4.6% of [(188.31±42.23)×10-15mol/(d·spot)] in the healthy controls,whereas female patients was 79.62% of [(149.93±46.56)×10-15mol/(d·spot)] in the healthy controls.The α-Gal A activity in hemizygous male patients was significantly lowered(P<0.05),the α-Gal A activity detection had higher sensitivity in male hemizygote than female heterozygous.Conclusion The gender difference exists in the decreased degree of α-Gal A activity.The enzymatic activity is significant reduced in male patients with hemizygotie Fabry disease.

Fabry disease； GLA gene； α-galactosidase A

新疆维吾尔自治区重点实验室资助项目(XJYS0906)。

李娟，女，在读研究生，主要从事心血管系统疾病方面的研究。△

，E-mail:Lnanfang2010@sina.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.16.010

A

1672-9455(2015)16-2323-02

2015-02-15

2015-04-20)