GRP94、Caspase-9在乳腺癌中的表达及意义①

李 壮，田 寅，苏俊强，廉奇鑫，冷晓雪，汪洪盛

(佳木斯大学附属第一医院，黑龙江 佳木斯 154003)



GRP94、Caspase-9在乳腺癌中的表达及意义①

李 壮，田 寅，苏俊强，廉奇鑫，冷晓雪，汪洪盛

(佳木斯大学附属第一医院，黑龙江 佳木斯 154003)

目的：探讨不同临床分期的乳腺癌组织中GRP94及Caspase-9的表达情况及其临床意义。方法：应用免疫组织化学法检测符合研究规定标准的50例乳腺癌患者的病理及其癌旁正常组织中的GRP94及Caspase-9的表达。结果：GRP94及Caspase-9在乳腺癌组织中、不同分化程度中、不同临床分期中、有无淋巴结转移中阳性表达率的比较，差异有统计学意义(P<0.05)。GRP94及Caspase-9在不同病理类型、不同肿瘤大小中的阳性表达率比较，差异无统计学意义(P>0.05)。结论：①在乳腺癌组织中：GRP94高表达，Caspase-9低表达。②二者表达情况可能与乳腺癌发生及进展密切相关。

乳腺癌；GRP94；Caspase-9

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，目前已跃居女性各类恶性肿瘤致死率的首位，同时发病年龄年轻化[1]。我国现对乳腺癌早期诊断仍是以影像、细胞学、术后病理等基本方法，但是其前两者诊断效果不尽如意，后者难以让大部分女性接受。故应将病理学与分子水平诊断相结合来提高早起诊断率，并以成为现如今对良、恶性肿瘤的区分及提前诊断的研究热点之一。GRP94是葡萄糖调节蛋白(GRP)家族中重要的成员之一，当细胞内环境发生变化时，可与未折叠的多肽链结合，阻止错误蛋白质聚集，抑制错误蛋白质的分泌[2]。Caspase-9是半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)家族启动组成员之一，该家族在细胞凋亡过程中发挥着重要的调控作用，对细胞凋亡的形态改变和生物化学改变起着决定性作用。目前二者在各种恶性肿瘤中的研究较多，但是研究结果仍有一些异议[3]。本实验用免疫组化法检测二者在乳腺癌中的表达情况，并结合临床分期初步探讨其在乳腺癌发生、发展中的机制。

1 对象与方法

1.1 研究对象与标本采集

收集2012-06～2013-06佳木斯大学附属第一医院肿瘤科乳腺癌手术切除标本50例作为实验组、癌旁正常组织50例作为对照组[4]。其中浸润性导管癌29例，浸润性小叶癌15例，髓样癌6例，肿瘤直径大于2cm标本28例，小于2cm标本22例 ，有淋巴结转移的标本25例，无淋巴结转移的标本25例。所有被选作为实验组的患者均为女性且术前均未接受过任何治疗，包括放疗、化疗、生物治疗等，并且符合医学伦理学规定。病理标本用10%的福尔马林溶液固定。

1.2 实验方法

本实验选用免疫组化SP法测定GRP94、caspase9蛋白于乳腺癌和癌旁组织中的表达水平。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 乳腺癌组织和癌旁组织中GRP94、Caspase-9表达情况

乳腺癌组织和癌旁组织中GRP94及Caspase-9表达阳性率比较差异有统计学意义(χ2=23.2999，P<0.05；χ2=15.7266，P<0.05)，乳腺癌组织中GRP94表达阳性率高于癌旁组织；Caspase-9低于癌旁组织。见表1。

表1 乳腺癌组织和癌旁组织中GRP94、Caspase-9表达情况(n=50)

图1 GRP94在乳腺癌中阳性表达×100

图2 CRP94在乳腺癌中阳性表达 ×400

图3 Caspase-9 在乳腺癌中阳性表达 ×100

图4 Caspase-9在乳腺癌中阳性表达 ×400

2.2GRP94、Caspase-9在乳腺癌中的表达与临床病理之间的关系

乳腺癌组织中GRP94与Caspase-9表达情况：(1)不同分化程度的乳腺癌组织中GRP94及Caspase-9表达差异有统计学意义(χ2=13.8991，P<0.05；χ2=12.8058，P<0.05)，说明GRP94随肿瘤分化程度越低阳性表达率越高；Caspase-9随肿瘤分化程度越高阳性表达率越低(2)不同病理分型中比较差异无统计学意义(χ2=1.3132，P>0.05；χ2=0.3284，P>0.05)，说明不同病理类型与阳性表达率无关；(3)不同临床分期中比较差异有统计学意义(χ2=8.0653，P<0.05；χ2=13.9943，P<0.05)，说明GRP94随着肿瘤的进展阳性表达率越高；Caspase-9随着肿瘤的进展阳性表达率越低。(4)不同肿瘤大小的比较无统计学意义(χ2=1.4330，P>0.05；χ2=3.6310，P>0.05)，说明肿瘤大小不影响阳性表达率；(5)有无淋巴结转移比较差异有统计学意义(χ2=5.8824，P<0.05；χ2=20.7792，P<0.05)，说明GRP94随着淋巴结的转移阳性表达率升高；Caspase-9随着淋巴结的转移阳性表达率降低。

表2 GRP94、Caspase-9在乳腺癌中的表达与临床病理之间的关系

2.3 乳腺癌组织和癌旁组织中GRP94、Caspase-9表达情况的相关性分析

本实验采用Spearman相关性分析乳腺癌组织及癌旁组织中二者表达情况(P<0.05，rs=-0.6319、rs=-0.2954)，二者表达截然相反，呈负相关，差异具有统计学意义。见表3。

表3 乳腺癌组织和癌旁组织中GRP94、

3 讨论

研究表明GRP94在多种恶性肿瘤中高表达，在肿瘤发生、发展中起着重要的作用。主要概括为抑制肿瘤生长与促进肿瘤生长两个作用。抑制肿瘤作用：首先，GRP94持续高表达激活体内的固有免疫，使机体产生特异性抗肿瘤反应。其次，GRP94高表达可以刺激Th1细胞产生及分泌大量的肿瘤坏死因子α(TNF-α)[5]。再次，GRP94高表达可以刺激巨噬细胞及树突状细胞产生及分泌细胞因子及趋化因子。促进肿瘤作用：在各类肿瘤中，特别是实体肿瘤，肿瘤生长初期血管没有大量生成，肿瘤细胞又处于高代谢状态，使细胞内环境发生变化，内质网应激产生大量GRP94，通过自分泌或旁分泌的形式活化血管内皮细胞，促进肿瘤周围血管生成，使肿瘤得到充分的血液及养分供应。还有研究表明，GRP94在肿瘤细胞中有信号传递功能，促进肿瘤生长[6]。WANG等[7]对结肠癌病理研究中表明，GRP94表达依然是随着分化程度降低、临床分期升高而升高。应小平等[8]用免疫组化法研究表明乳腺癌的转移与GPR94的表达有关。本实验研究表明：GRP94在乳腺癌中阳性表达率明显高于癌旁组织中，并与乳腺癌淋巴结转移、分化程度、临床分期密切相关，这与上述等研究结论相一致，并且可以推测GRP94在恶性肿瘤形成过程中对肿瘤的促进作用大于抑制作用。说明乳腺癌的发生、发展与GRP94有着密切的联系，因此有望成为乳腺癌的早期诊断及判断预后的重要指标。

肿瘤是多基因表达控制的综合性疾病。肿瘤的发生及发展的基础是细胞的增殖与凋亡异常，但是目前Caspase-9的凋亡途径与恶性肿瘤的关系尚未研究清楚，Ito和Ikeguchi等[9]研究表明，在某些恶性肿瘤(如肝癌)中凋亡抑制因子survivin高度表达，Chandele等[10]发现survivin抗凋亡作用途径主要是通过抑制Caspase-9活性途径实现的，进而导致其表达降低。Soengas等[12]认为Caspase-9是一种抑癌基因，因其可以抑制肿瘤的生长，所以在肿瘤中低表达。还有研究表明Caspase-9在恶性肿瘤中表达的高与低，与肿瘤周围炎症程度有一定相关性，如结、直肠癌中Caspase-9高表达，因其周围的炎症反应导致炎症因子IL-1β，IL-18和IL-33的前体等，在线粒体凋亡途径中与Apaf-1及Caspase-9结合，促进凋亡的启动，但其肿瘤细胞的凋亡未增加反而减低。本实验研究表明：Caspase-9在乳腺癌组表达明显低于癌旁正常组织，说明在乳腺癌形成过程中Caspase-9凋亡通路受到抑制。实验还表明该因子与乳腺癌淋巴结转移、分化程度、临床分期密切相关，与邱芳等[12]研究一致，说明乳腺癌发展越严重对该凋亡通路的抑制越重，因此可以大胆的推测该因子不仅参与乳腺癌的早期形成过程，还直接影响乳腺癌患者的预后，可作为乳腺癌的早期筛查及预后的重要指标。

目前对GRP94在恶性肿瘤参与Caspase-9凋亡通路过程中的作用机制尚不是十分清晰。本实验的50例乳腺癌患者病理免疫组化染色研究表明二者存在负相关(P<0.05，rs=-0.6319)，推测在乳腺癌形成过程中GRP94的高表达抑制了Caspase-9的凋亡启动，二者密不可分。因此，进一步研究二者在乳腺癌中的作用机制可望为乳腺癌的早期发现及预后提供新的思路。

[1]王博,王宇,李壮.双侧乳腺癌24例诊治分析[J].黑龙江医药科学，2004,27(2):21

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[3]安亚伟，赵文江，李勇.Livin、Caspase-9与胃癌关系的研究进展[J].山西医药杂志，2010,39(5)：389-390

[4]李义强,王瑞,王彩霞,等.乳腺癌浸润发生前后Ang-2的表达及其意义[J].黑龙江医药科学，2011,34(1):20-21

[5]StrboN,PodackER.ecretedheatshockproteingp96-Ig:aninnovativevaccineapproach[J].AmJReprodImmunol,2008,59(5):407-416

[6]WangXP,QiuFR,LiuGZ,etal.orrelationbetweenclinicopathologyandexpressionofheatshockprotein70andglucose-regulatedprotein94inhumancolonicadenocarcinoma[J].WorldJGastroenterol,2005,11(7):1056-1059

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[9]ChandeleA,PrasadV,JagtapJC,etal.UpregulationofsurvivininG2/Mcellsandinhibitionofcaspase-9activityenhancesresistanceinstaurosporine-inducedapoptosis[J].Neoplasia,2004,6(1):29-40

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[11]SoengasMS,AlarconRM,YoshidaH,etal.Apaf-1andcaspase-9inp53-dependentapoptosisandtumorinhibition[J].Science, 1999, 284(5411) :156-159

[12]邱芳，彭松林，戴显伟.C-FIAP、bcl-xs和Caspase-3在乳腺癌中的表达及其临床意义[J].现代肿瘤学，2008,16(7)：1145-1148

李壮(1963～)男，黑龙江佳木斯人，副教授，副主任医师，硕士研究生导师。E-mail:779589868@qq.com。

田寅(1962～)男，黑龙江佳木斯人，学士，主任医师。

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