益母草总碱在治疗丙酸睾丸素诱导大鼠前列腺增生模型中的应用研究①

马 雷，高英英，辛 华，李 升，曲灿华，于海东，李雅江，孙玉鸿

(1.佳木斯大学附属第一医院,黑龙江 佳木斯 154003;2.佳木斯大学检验医学院,黑龙江 佳木斯 154003)



益母草总碱在治疗丙酸睾丸素诱导大鼠前列腺增生模型中的应用研究①

马 雷1，高英英2，辛 华1，李 升1，曲灿华1，于海东1，李雅江1，孙玉鸿1

(1.佳木斯大学附属第一医院,黑龙江 佳木斯 154003;2.佳木斯大学检验医学院,黑龙江 佳木斯 154003)

目的：探讨益母草总碱在治疗丙酸睾丸素诱导的大鼠前列腺增生模型中的作用及前列腺增生的发生机制。方法：以丙酸睾丸素诱导建立模型，再给予益母草总碱治疗，处死后立即取前列腺组织，以放射免疫法检测DHT和T，以免疫组化法检测EGF、bFGF、TGF-β1平均光密度值。结果：各实验组与模型组比较DHT、T都存在显著性差异，有统计学意义。各实验组前列腺组织中EGF、bFGF、TGF-β1平均光密度值与模型组比较都有统计学意义。结论：丙酸睾丸素诱导大鼠前列腺增生模型成立，益母草总碱在治疗前列腺增生方面有重要应用价值。

益母草总碱；前列腺增生

随着人口老龄化的加剧，前列腺增生症(Benign prostatic hyperplasia，BPH)成为老年男性最常见的泌尿系统疾病之一，而且这一趋势愈演愈烈，无数老年男性饱受这一病症的折磨[1]。我国流行病学数据显示，在进行尸检时发现BPH发病率有向中老年人群蔓延的趋势，而在60岁以上老年人群发病率高达63.5%。BPH的临床表现主要是随着病情的发展，出现进行性的排尿困难，最后出现尿潴留，给肾脏及身体带来伤害，甚至危及人的生命[2]。所以，对BPH发生机制和治疗的研究变得越来越迫切。本实验利用中药益母草总碱对丙酸睾丸素造模的BPH大鼠进行治疗，探讨BPH的发生机制，并且对益母草总碱的功效进行评估。

1 资料与方法

1.1 一般资料

①实验动物：18月龄老年SD雄性大鼠90只，购自佳木斯大学动物实验中心。分为6组，每组15只，分别设置为益母草小剂量组、益母草中剂量组、益母草大剂量组、癃闭舒对照组、模型组、空白对照组。

②试剂：益母草总碱购自咸阳航空一六八生物工程有限公司；癃闭舒胶囊购自石家庄科迪药业有限公司；丙酸睾丸素购自河南科伦药业有限公司；大鼠双氢睾酮(Dihydrotestosterone,DHT)，睾酮(Testosterone,T)检测试剂盒购自南京森贝伽生物科技有限公司；大鼠表皮生长因子(Epidermal growth factor,EGF)、成纤维细胞生长因子(basic Fibroblast growth factor,bFGF)、转化生长因子β1(Transforming growth factor beta1,TGF-β1)免疫组化检测试剂盒购自上海雅吉生物科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 丙酸睾丸素诱导老年大鼠BPH模型和给药 首先将益母草小、中、大剂量组、癃闭舒对照组、模型组5组共75只大鼠去势，接下来连续7d给予肌注青霉素待其恢复。然后连续30d给予皮下注射丙酸睾丸素4mg/100g，空白对照组只皮下注射4mg/生理盐水。

自注射丙酸睾丸素第1天起，益母草小、中、大剂量组、癃闭舒对照组、模型组，每天1次分别给予胃饲益母草总碱12.5mg/kg、25mg/kg、50mg/kg、癃闭舒胶囊蒸馏水溶液(用量约为临床用药量的10倍)、等量蒸馏水。

1.2.2 大鼠前列腺湿重和前列腺指数计算：称大鼠体重后，处死大鼠，仔细摘取前列腺，用滤纸吸干组织表面液体，用电子天平称取前列腺组织湿重，计算前列腺指数(前列腺指数=前列腺湿重mg/鼠体重g)。

1.2.3 显微镜下观察前列腺组织结构：取前列腺组织固定后，送病理科用苏木精-伊红染色，用OlympusX51显微镜观察BPH造模成功与否。

1.2.4 大鼠前列腺组织中DHT、T检测：取200mg前列腺组织，及时匀浆，由放射免疫实验室专业人员，严格按照试剂使用说明书要求操作，测量前列腺组织中DHT、T水平。

1.2.5 大鼠前列腺组织中EGF、bFGF、TGF-β1平均光密度值检测：取前列腺组织，用4%甲醛固定保存后，进行免疫组化检测，计算生长因子的平均光密度值。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 益母草总碱对大鼠前列腺湿重和前列腺指数的影响

空白对照组与模型组比较分析，可见大鼠前列腺组织的湿重和指数都有显著性差异，说明诱导BPH模型成功。各治疗组与模型组比较，湿重只有小剂量组有统计学意义，前列腺指数只有大剂量组无统计学意义，并且癃闭舒组存在显著性差异，见表1。

表1 益母草总碱对大鼠前列腺湿重和前列腺指数的影响

※与模型组比P<0.05,※※与模型组比P<0.01。

2.2 显微镜观察各试验组大鼠前列腺组织结构的情况

模型组大鼠前列腺褶皱增多，呈乳头状突起，朝向前列腺腺腔内部，细胞层次增多，间质增厚，腺腔面积明显缩小，期间可见大量粉红色分泌物。空白对照组大鼠前列腺褶皱很少，上皮细胞排列整齐一致，细胞间质很薄，由单层柱状上皮组成，腺腔面积较大，分泌物很少。说明使用丙酸睾丸素诱导大鼠BPH模型成功。同模型组比较，癃闭舒给药组和益母草总碱大、中、小剂量给药组大鼠前列腺组织都有不同程度的褶皱增生减少、腺腔扩大和间质变薄。

2.3 益母草总碱对大鼠前列腺组织中DHT、T的表达水平的影响

各实验组与模型组比较DHT、T都存在显著性差异，有统计学意义，见表2。

表2 各实验组大鼠前列腺组织中DHT、

※与模型组比P<0.05,※※与模型组比P<0.01。

2.4 益母草总碱对大鼠前列腺组织中EGF、bFGF、TGF-β1的平均值的影响

各实验组前列腺组织中EGF平均光密度值与模型组比较都有统计学意义，其中小剂量组和癃闭舒组存在显著性差异。各组与模型组比较，bFGF平均光密度值都有统计学意义。各组与模型组比较，TGF-β1平均光密度值都有统计学意义，其中益母草总碱中、小剂量组和癃闭舒组存在显著性差异，见表3。

表3 各实验组大鼠前列腺组织中EGF、bFGF、TGF-β1平均光密度值

※与模型组比P<0.05,※※与模型组比P<0.01。

3 讨论

益母草味苦、辛，微寒。分布于全国大部分地区，可以植物全草入药，功效为活血调经，利尿消肿，清热解淋。益母草总碱是益母草发挥主要功效的组成成分[3]。本课题应用益母草总碱治疗BPH正符合中医药应对 “癃闭”、“淋证”的诊治原则。模型组与空白对照组比较，前列腺组织形态出现褶皱增多，间质变厚，腺腔缩小，分泌物量多。同时，模型组大鼠的前列腺湿重，尤其是前列腺指数显著大于空白对照组。充分说明本实验利用丙酸睾丸素诱导建立老年大鼠BPH模型是成功的。需要注意的是本实验时间较长，动物处理过程较复杂，故应挑取健康状况良好的大鼠，来减少损失率。各治疗组及模型组大鼠前列腺组织匀浆标本中DHT和T的水平均高于空白对照组，模型组显著增高，说明DHT和T在前列腺组织中的含量增高与BPH发生发展有着密切的关系。与模型组比较，益母草总碱和癃闭舒胶囊治疗大鼠BPH的过程中降低了前列腺组织中EGF和bFGF水平，提高了TGF-β1水平，与文献报道一致[4,5]，证明益母草总碱可以通过调节生长因子的动态平衡的方式，来达到治疗BPH的目的。这为阐明BPH发病机制中细胞因子途径提供有力的证据。根据实验结果发现大鼠BPH模型前列腺组织中的激素水平和生长因子呈现一定的相关性，BPH发生过程中激素和生长因子之间的相互作用关系有待进一步探讨。

[1]DijkmanGA，DebruyneFM.Epidemiologyofprostatecancer[J].EurUrol,1996,30(3):281-295

[2]马雷，辛华，高英英,等. 血清总PSA、游离PSA检测在前列腺癌诊断中的临床应用研究[J].黑龙江医药科学,2007, 30(2):11-12

[3]郑师明，严鹏科，李世煌，等.精制益母草生物碱提取纯化工艺研究[J],中国药房,2010,21(15):1370

[4]Gandour-EdwardsR,MackPC,GumerlockPH.Abnormalitiesofapoptoticandcellcycleregulatoryproteinsindistincthistopathologiccomponentsofbenignprostatichyperplasia[J].ProstateCancerandProstaticDiseases, 2004, 7(4):321-326

[5]GuessHA.Benignprostatichyperplasia:antecedentsandnaturalhistory[J].Epidemiologicreviews, 1992, 14(1): 131-153

黑龙江省中医药科研项目，编号：ZHY12-Z191;佳木斯大学科研项目,编号:S2010-103。

马雷(1980～)男,黑龙江哈尔滨人,硕士,主管技师。

高英英(1980～)女,黑龙江鸡西人,硕士,讲师。E-mail:happygaoyingying@163.com。

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1008-0104(2015)03-0082-02

2015-01-20)