雏鸡感染IBDV后法氏囊组织结构的动态变化

刘晓晓,余燕,邵营格,陈新武,尹飞,陶换,马金友

（河南科技学院,河南新乡453003）

雏鸡感染IBDV后法氏囊组织结构的动态变化

刘晓晓,余燕,邵营格,陈新武,尹飞,陶换,马金友

（河南科技学院,河南新乡453003）

为了探究传染性法氏囊病毒（IBDV）感染后不同时间点鸡法氏囊的病理组织学变化,用实验室保存的IBDV（编号：19951128）感染19日龄雏鸡150只,分别在感染后0 h,12 h,24 h,48 h,72 h,96 h,120 h,144 h,168 h, 192 h,33 d随机选取6只,采集法氏囊制作石蜡切片,经HE染色,观察法氏囊组织的结构变化并用IPP软件统计法氏囊滤泡的面积.结果显示：IBDV感染的鸡法氏囊组织结构呈现动态变化,即感染早期,法氏囊以炎性细胞浸润为主,随后B淋巴细胞崩解,滤泡显著变小,耐过的鸡法氏囊滤泡修复后不能达到感染前的水平.

法氏囊；传染性法氏囊病毒；鸡；组织结构

传染性法氏囊病毒病（IBD）是由鸡传染性法氏囊病毒（infectious bursal disease virus,IBDV）引起的急性、高度接触性、以B淋巴细胞坏死为特征的传染病.IBDV主要侵害3～6周龄雏鸡中枢免疫器官——法氏囊,由于感染此病的雏鸡B细胞大量死亡,造成严重的长期的免疫抑制,雏鸡易感染其他传染病和疫苗接种失败,是危害世界养禽业的重要传染病之一[1-2].目前,IBD已经遍布全球养禽地区,在工业化养禽业发达的国家尤为严重,据调查,美国鸡群血清阳性率几乎100%,南美洲约90%,荷兰88%,意大利76%,日本75%,德国61.5%[3].现在IBD在我国已经传遍各地,某些地方发病率高达80%,致死率在30%～70%[4].关于鸡的法氏囊被法氏囊病毒感染后出现发炎、坏死、萎缩以及法氏囊内淋巴细胞严重受损的病理变化已有报道[5].然而,有关雏鸡感染法氏囊病毒后不同时间点法氏囊组织的动态病理变化报道较少.本文采用组织切片、HE染色技术对病毒感染后不同时间点的法氏囊进行病理组织学观察,为该病的预防提供理论依据.

1 材料与方法

1.1 试验动物

在新乡市大用种鸡孵化厂购买1日龄白来航健康雏公鸡150只,置于河南科技学院实训中心饲养室喂养,雏鸡随机分为两组,一组为试验组,另一组为对照组.

1.2 病毒感染

饲养2周后测其母源抗体水平,在母源抗体消失后用实验室保存的IBDV（编号：19951128）10倍稀释为200 μL.分别通过点眼（50 μL）、滴鼻（50 μL）和肛门吸收（100 μL）感染小鸡10只,3 d后收集感染小鸡的法氏囊称质量,按5 g加1 mL PBS（pH 7.36）放冰浴中充分匀浆,离心后收集上清,用PCR检测病毒含量,调整浓度进行试验组小鸡的感染,感染量和部位与前面相同,感染时间为19日龄.感染组和未感染IBDV组各70只分开饲养,每笼10只.

1.3 病料收集与处理

分别于感染的0 h、12 h、24 h、48 h、72 h、96 h、120 h、144 h、168 h、192 h、33 d试验组和对照组各随机拿取6只鸡,麻醉后静脉放血,然后取法氏囊,用体积分数为4%的多聚甲醛固定,采用石蜡切片、HE染色制作组织切片.每只鸡的法氏囊选取5张切片,利用Olympus显微照相系统拍照观察,并用IPP（Image-Pro Plus software 6.0）软件测量法氏囊滤泡的大小.

1.4 数据统计

全部数据用SAS software（version 8.01；SAS Institute,Cary,NC）统计软件进行多重比较（post hoc test）,所有数据用mean±SD表示,以P≤0.05为差异显著.

2 结果与分析

2.1 剖检变化

雏鸡感染法氏囊病毒24 h到48 h,剖检后可见法氏囊充血水肿,体积增大（图1-A）.随着感染时间的延长（72～122 h）,法氏囊体积逐渐变小,质地变硬（图1-B）.

图1 雏鸡感染法氏囊病毒后法氏囊的剖检变化Fig.1 Anatomical changes in bursa of Fabricius of chicken infected with IBDV

2.2 病理变化

光学显微镜下,法氏囊病毒感染的0 h,雏鸡法氏囊有许多密集排列的腔上囊小结,囊小结呈圆形、卵圆形或不规则形,平均面积约61 188.13±21 960.67 μm2.小结间的界限清晰（图2-A,图3）.法氏囊病毒感染12 h后,法氏囊中的毛细血管扩张充血,组织水肿,囊小结之间的间质增宽并伴有炎性细胞浸润（图2-B）,但法氏囊囊小结的面积与感染0 h相比,差异不显著（58 413.21±25 827.11；P＞0.05）（图3）.法氏囊病毒感染24 h后,法氏囊组织水肿更甚,囊小结髓质中有坏死的淋巴细胞,其胞核浓缩,着色加深（图2-C）,囊小结面积与感染0 h相比差异仍不显著（56 383.29±24 106.57；P＞0.05）（图3）.法氏囊病毒感染48 h和72 h后,法氏囊滤泡间结缔组织大量增生,囊小结髓质内淋巴细胞大量坏死,不仅表现为核固缩,而且部分淋巴细胞核碎裂、崩解消失,留下上皮样细胞构成的网眼,在显微镜下呈空泡样,皮、髓质之间界限不清,而且囊小结面积急剧减小（图2-D、E）,与感染0 h相比分别减少了33.9%和38.3%（48 h：40 446.92±11 380.33；72 h：37 527.83±13 429.03；P＜0.05）（图3）.感染96 h后,法氏囊滤泡皮质部淋巴细胞大量坏死崩解消失,只剩均质红染的物质（图2-F）.此时,法氏囊受损最严重,滤泡面积继续变小（16 358.5±6 213.6）,显著低于48 h和72 h的滤泡面积（P＜0.05）（图3）.间质中结缔组织和淋巴细胞增生.感染120 h后,法氏囊滤泡间结缔组织.淋巴细胞和髓质区的网状上皮细胞大量增生,所以滤泡与结缔组织间界限不清晰.而上皮样网状细胞彼此间借突起相连构成,网眼内是坏死崩解的淋巴细胞,因此有少量淡染的红色物质.法氏囊滤泡皮质区域开始出现少量结构完整的淋巴细胞,滤泡面积略有增加（图2-G）,为18 815.08±8 192.89,与感染96 h相比,差异不显著（P＞0.05）（图3）.网状支架感染144 h后,法氏囊滤泡的皮质部淋巴细胞大量增生,而且囊小结的间质成分减少,但是弥散大量淋巴细胞,髓质部分变化不明显（图2-H）,此时的囊小结轮廓较清晰,平均面积与感染96 h相比差异不显著（19 047.38±3 925.26；P＞0.05）（图3）.感染168和192 h后,囊小结的数量明显增加,多成圆形,皮质区恢复较好,髓质内也开始出现结构完好的淋巴细胞,但依然存在大量空泡（图2-I）,但是此时的囊小结面积与感染96 h,120 h,144 h相比差异不显著（168 h：19 200.96±3 950.21；192 h：23 550.42±3 874.08；P＞0.05）（图3）.滤泡间结缔组织大量增生,所以间质成分变得致密.感染33 d后,法氏囊滤泡结构清晰,3层分界明显,而且排列紧密,髓质中网状支架的网眼内填充大量淋巴细胞,髓质部分也恢复较好.另外间质成分中的淋巴细胞大量减少,基本恢复正常（图2-J）,滤泡面积与96 h、120 h、144 h、168 h和192 h相比明显增高（33 919.5± 9 652.85；P＜0.05）（图3）.

图2 法氏囊病毒感染后不同时间点法氏囊病理组织学观察Fig.2 Pathological histology of bursa of Fabricius at different time points after chicken infected with IBDV

图3 法氏囊病毒感染后不同时间点法氏囊滤泡面积Fig.3 Area of bursal follicle at different time points after chicken infected with IBDV

3 结论与讨论

法氏囊是禽类所特有的免疫器官,与体液免疫密切相关,且其免疫功能只出现在生命的最初几周[6].而机体的特异性免疫包括B淋巴细胞介导的体液免疫和T淋巴细胞介导的细胞免疫.IBDV主要在B淋巴细胞内复制,所以当鸡群感染IBDV后其体液免疫将严重受阻,而隋欣等研究证明IBDV侵染雏鸡后T细胞的数量也大量降低,细胞免疫也受到抑制,从而引起继发感染[7].本研究结果显示IBDV感染初期,法氏囊组织充血,水肿,结缔组织增生以及大量的浸润性T细胞出现,这种浸润性的T细胞在病毒感染后的前5天对于抑制病毒复制和清除病毒粒子起着重要作用[8],但T细胞在法氏囊中的活化导致大量细胞因子如IL-10、IL-2、IL-4和IFN-γ的上调[9],造成了法氏囊的组织损伤,减缓了法氏囊滤泡的修复[8],对该病的防治增加了难度.研究结果还表明,IBDV主要侵害囊小结髓质区,其次才是皮质区,由于囊小结髓质区主要是大中型淋巴细胞,而皮质区主要是中小型淋巴细胞,可见,IBDV主要侵害大中型淋巴细胞,其次才是中小型淋巴细胞,这可能是因为大中型淋巴细胞主要分泌sIgM,而带有sIgM的B淋巴细胞是IBDV重要的靶细胞[10].研究还发现,对IBD耐过的鸡群法氏囊滤泡修复以后,滤泡的大小仍然不能达到未感染前的水平,如何进一步修复法氏囊组织尚需进一步研究.

[1]Jackwood D J,Jackwood R J.Infectious bursal disease viruses：molecular differentiation of antigenic subtypesamong serotype 1 viruses[J].Avian Dis.,1994,38：531-537.

[2]BergT P.Acute infectious bursal disease in poultry：a review[J].Avian Pathol.,2000,29：175-194.

[3]程安春.鸡病疗治大全[M].北京：中国农业出版社,2000.

[4]彭大新.传染性法氏囊病病毒分子结构与功能研究进展[J].动物医学进展,2000,4（21）：36-39.

[5]张燕欣,IBDV-TJ-hg在鸡体内主要器官动态分布规律的研究[D].天津：天津农学院,2013.

[6]卿素珠,杨延平.鸡法氏囊中血管活性肠肽的表达特点[J].西北农林科技学学报：自然科学版,2005,33（5）：5-8.

[7]隋欣,郑艳生,高雪丽,等.传染性囊病病毒感染雏鸡外周血液T细胞亚型数量及增殖功能的变化[J].中国兽医杂志, 2013,49（11）：3-5.

[8]Rautenschlein S,Yeh H Y,Njenga M K,et al.Role of intrabursal T cells in infectious bursal disease virus（IBDV）infection：T cells promote viral clearance but delay follicular recovery[J].Arch Virol,2002,147：285-304.

[9]Liu H W,Zhang M F,Han H T,et al.Comparison of the expression of cytokine genes in the bursal tissues of the chickens following challenge with infectious bursal disease viruses of varying virulence[J].Virology Journal,2010,7：364-373.

[10]肖琛闻,季权安,赵凤英,等.传染性腔上囊病病毒免疫学研究进展[J].动物医学进展,2011,32（10）：94-98.

（责任编辑：卢奇）

Dynamic structural variation in bursa of Fabricius of chicken infected with IBDV

Liu Xiaoxiao,Yu Yan,Shao Yingge,Chen Xinwu,Yin Fei,Tao Huan,Ma Jinyou
（Henan Institute of Science and Technology,Xinxiang 453003,China）

To explore the changes of histological structure in bursa of chicken infected IBDV （infectious bursal disease virus）,one hundred fifty 19-day-old chickens were infected with the standard strains of IBDV saved in our laboratoyry （number：19951128）.Bursal tissue of 6 chickens was collected at 0 h,24 h,48 h,72 h,96 h,120 h,144 h, 168 h,192 h,33 d after infecting IBDV.Paraffin section and HE staining were performed to investigate structural variation in bursa of fabricius,and IPP software was used to calculating area of bursal.The results suggested that：tissue structure of bursa of Fabricius in IBDV infected chicken presents the dynamic variation,at the early stage of infection,bursa of Fabricius is given priority to with inflammatory cells infiltration,subsequently,B lymphocyte disintegration,follicle significantly smaller,resistance to chicken bursa of Fabricius of follicular cannot achieve the level before infection after repair.

bursa of Fabricius；infectious bursal disease virus；chicken；the organizational structure

S858.31

A

：1008-7516（2015）04-0040-04

10.3969/j.issn.1008-7516.2015.04.008

2015-03-26

河南省高校科技创新人才支持计划（13HASTIT006）；河南科技学院大学生创新实验项目（2014CX041）

刘晓晓（1993―）,河南驻马店人,本科生.

马金友（1968―）,男,河南信阳人,博士,副教授.主要从事分子病理学与动物病原学研究.