酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎病毒血清学标志物的性能评价*

卢 婷，李发科，罗 杰，杨邵俊，潘 锋，章明徐,陈 鸣

(第三军医大学大坪医院野战外科研究所检验科，重庆 400042)



·论 著·

酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎病毒血清学标志物的性能评价*

卢 婷，李发科，罗 杰，杨邵俊，潘 锋，章明徐,陈 鸣△

(第三军医大学大坪医院野战外科研究所检验科，重庆 400042)

目的 通过检测乙型肝炎病毒(HBV)血清学标志物，对ADDCAER1100全自动酶免工作站进行定性试验的性能评价。方法 根据美国临床实验室标准化协会(NCCLS)颁布的EP12-A文件，以Architect I2000全自动化学发光免疫分析仪(简称Architect I2000)为参考方法，对ADDCAER1100全自动酶免工作站(简称ADDCAER1100)进行HBV血清学标志物检测的方法学对比及重复性试验，完成其定性试验的性能评价。结果 方法学比较显示，HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb的总符合率分别为99.0%、99.5%、99.5%、98.0%、100.0%；阳性符合率分别为98.0%、100.0%、99.0%、97.0%、100.0%，阴性符合率分别为100.0%、99.0%、100.0%、99.0%、100.0%，Kappa系数分别为0.98、0.99、0.99、0.96,1.00。重复性试验显示，HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb±20%浓度的临界值样本阳(阴)性率均不小于95%，95%置信区间分别为：96.6%～99.5%、97.6%～99.5%、97.6%～99.5%、94.7%～99.5%、98.6%～99.5%。结论 ADDCAER1100与Architect I2000检测HBV血清学标志物的结果一致性较强，ADDCAER1100检测HBV血清学标志物在临界值±20%的浓度内能得到稳定结果。该仪器的性能可靠，可用于标本的检测。

酶联免疫吸附试验； 定性试验； 性能评价； 乙型肝炎病毒； 血清学标志物

我国是乙型肝炎病毒(HBV)感染的高发国家，现有慢性HBV感染者约9 300万人，其中慢性乙型肝炎患者约2 000万人[1]。临床试验室已开展了多种HBV血清学标志物的检测方法，其中化学发光法是定量检测HBV血清学标志物的高灵敏度和高特异性的方法。以酶联免疫吸附试验(ELISA)为代表的定性方法因具有灵敏度和特异性高、操作简便、经济等优点，也一直是临床试验室检测HBV抗原、抗体的常用方法，同时是各级医院检验科的必备方法。ADDCAER1100全自动酶免工作站是一种基于ELISA的全自动血清标志物定性检测平台，其HBV血清学标志物检测性能未知。本研究根据美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)文件EP12-A，结合临床试验室实际情况，以HBV血清学标志物乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎表面抗体(HBsAb)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)、乙型肝炎e抗体(HBeAb)、乙型肝炎核心抗体(HBcAb)测定为例，以Architect I2000全自动化学发光免疫分析仪为参考方法，对ADDCAER1100全自动酶免工作站进行性能评价，通过重复性试验和方法学对比评价该系统的检测性能[2]，以保证临床标本检测的准确性和可靠性。

1 资料与方法

1.1 标本来源 收集2012年12月至2013年5月本院门诊、病房和体检检测HBV血清学标志物的血清标本1 000例，包括5种HBV血清学标志物(HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb)的阳性和阴性标本各100例。

1.2 试剂和仪器 采用仪器为烟台艾德康ADDCAER1100全自动酶免工作站，配套试剂为北京万泰生产的HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb的ELISA试剂盒；美国雅培Architect I2000全自动化学发光免疫分析仪及其配套试剂、定标品。质控品为卫生部临检中心提供的0.2 IU/mL HBsAg、30 IU/mL HBsAb、2 NCU/mL HBeAg、4 NCU/mL HBeAb、4 NCU/mL HBcAb的质控血清。

1.3 方法

1.3.1 方法学的对比 参考EP12-A文件设计试验方案，以 Architect I2000为参考方法，ADDCAER1100为对比方法。分别选取HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb阳性和阴性标本各100份，用以上两台设备进行检测，方法学比较在10 d内完成，按照受试者血清标本进行检测。每次试验低值质控品重复检测2次，总共检测20次，任何一次低值质控品失控，立即停止试验，该批标本检测数据视为无效，应在当天或第2天重新测量，最后比较两套检测方法结果的一致性。

1.3.2 重复性试验 参考EP12-A文件设计试验方案，每次试验均设立阴阳性对照(试剂盒内自带)，试验在10 d完成，有双份阴阳性对照，共计20份阴阳性对照结果。将已知浓度的5种HBV血清学标志物低值质控血清进行系列稀释，每项稀释结果在ADDCAER1100上检测20次，找到阴阳性结果各占50%的标本，可确定该标本浓度为临界值(cut off值)浓度。配置5种HBV血清学标志物浓度为临界值±20%的分析物，分别在ADDCAER1100上测定20次，记录结果。临界值95%置信区间(CI)的结果判定以样本/临床值比值(S/CO值)表示：HBsAg、HBsAb、HBeAg的S/CO≥1为阳性，S/CO<1为阴性；HBeAb、HBcAb的S/CO<1为阳性，S/CO≥1为阴性。+20%浓度临界值的分析物检测阳性率不小于95%，同时-20%浓度临界值的分析物检测阴性率不小于95%，说明临界值±20%的浓度位于该检测方法的95%CI内[2]。

2 结 果

2.1 方法学比较 两套检测系统的一致性结果显示：HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb的总符合率分别为99.0%、99.5%、99.5%、98.0%、100.0%，阳性符合率分别为98.0%、100.0%、99.0%、97.0%、100.0%，阴性符合率分别为100.0%、99.0%、100.0%、99.0%、100.0%，Kappa系数分别为0.98、0.99、0.99、0.96、1.00。见表1～5。

表1 HBsAg检测 的方法学对比

表2 HBsAb检测的方法学对比

表3 HBeAg检测的方法学对比

表4 HBeAb检测的方法学对比

表5 HBcAb检测的方法学对比

2.2 重复性试验 ADDCAER1100检测设备重复性试验显示：HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb低值质控品分别稀释4、3、3.4、1.6、1.7倍的浓度为其临界值浓度，±20%浓度临界值标本阳(阴)性率均不小于95%，95%CI分别为：96.6%～99.5%、97.6%～99.5%、97.6%～99.5%、94.7%～99.5%、98.6%～99.5%。CV批内均在10%左右，CV批间均小于15%。见表6。

表6 ADDCAER1100检测仪HBV血清学标志物 重复性试验结果

注：-20%为临界值-20% 分析物浓度；+20%为临界值+20% 分析物浓度。

3 讨 论

本研究以HBV血清学标志物HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb为例，进行方法学对比和重复性试验，用于ELISA的方法学评价，结果显示：在方法学对比中，以化学发光法为原理的Architect I2000和ELISA为原理的ADDCAER1100同时检测HBV血清学标志物的结果一致性较强；在重复性试验中HBV血清学标志物标本浓度在±20%临界值标本位于95%CI内，对于临界浓度不小于20%的标本也能得到稳定的结果。

在临床试验室使用新的试剂、系统或更换试剂、系统时，为了保证标本检测结果的准确性和可靠性，在开展检测项目前需要进行性能评价。在性能评价的方法学对比中，定性试验通常运用2种或2种以上的检测方法(仪器)。由于最终的诊断结果未知，或无诊断的金标准，定性方法又分为已知诊断的定性试验和未知诊断的定性试验，未知诊断的定性试验往往对比几种检测方法的一致性，采用几种检测方法的阴性和阳性符合率表示[2-4]。本试验以HBV血清学标志物检测为例，以化学发光法为原理的Architect I2000作为参考仪器，以新引入科室的以ELISA为原理的ADDCARE1100为试验仪器。两种方法学对比时，需注意标本的选择应具有代表性，阳性标本应该随机选择，用Kappa检验判断两套检测系统一致性的强弱[3-5]。

定性试验的重复性研究是检验测量临界值精密度的方法。检测高值的阳性标本或阴性低值是不合适的，因为它们的结果明显超出了医学决定值。而在临界值附近同一份标本常出现不一样的结果[6]，本试验根据EP12-A文件的重复性试验方法，评估浓度在临界值附近的标本的精密度，通过重复测量±20%临界值的标本是否在该检测方法的临界值95%CI(重复测定临界值附近的标本，得到95%阳性并且95%阴性的结果的浓度范围，称为该检测方法的临界值的95%CI)来评价该试验方法的精密度[2]。

本研究在方法学对比中显示两套系统同时检测HBV的5项血清学标志物的结果一致性较强。在重复性试验中，±20%临界值的标本均在95%CI内，对于临界浓度不小于20%的标本能够得到稳定的结果。临界值的CV批内值均在10%左右，CV批间<15%，说明ADDCAER1100全自动酶免工作站的稳定性和准确性符合临床标本检测要求，可运用于临床HBV的检测。

[1]中华医学会肝病分会，中华医学会感染学分会．慢性乙型肝炎防治指南(2010年版)[J]．中华肝脏病杂志，2011，19(1)：13-24．

[2]NCCLS．User protocol for evaluation of qualitative test performance proposed guideline[S]．Wayne，PA，USA：NCCLS，2002．

[3]夏邦世，吴金华．Kappa一致性检验在检验医学研究中的应用[J]．中华检验医学杂志，2006，29(1)：83-84．

[4]中国合格评定国家认可委员会．CNAS CL39:医学实验室质量和能力认可准则在临床免疫学检验领域的应用说明[S]．北京：中国合格评定国家认可委员会．2012．

[5]黄妩娇，黄宪章，庄俊华，等．CLSI EP12-A2文件在HBeAb定性检测性能评价中的应用[J]．检验医学，2012，27(11)：900-903．

[6]陈桂三，张秀明，熊继红，等．未知诊断定性试验分析性能评价方法探讨[J]．检验医学，2010，25(12)：978-981．

Performance evaluation of ELISA for detecting HBV serological markers*

LUTing,LIFa-ke,LUOJie,YANGShao-jun,PANFeng,ZHANGMing-xu,CHENMing△

(DepartmentofClinicalLaboratory,DapingHospital,ResearchInstituteofFieldSurgery,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing400042,China)

Objective To conduct the performance evaluation of the qualitative tests in the ADDCAER ELISA 1100 automated workstation by detecting the hepatitis B virus (HBV) serological markers.Methods According to EP12-A document promulgated by the National Committee for Clinical Laboratory(NCCLS),with the Architect I2000 automatic chemiluminescence immunoassay analyzer as the reference method,the methodological comparison and the repeatability test of the HBV serological markers detection by the ADDCARE ELISA automated workstation were performed for completing its qualitative test performance evaluation.Results The methodological comparison showed that of the total coincidence rate of HBsAg,HBsAb,HBeAg,HBeAb and HBcAb were 99.0%,99.5%,99.5%,98.0% and 100.0%,respectively;the positive coincidence rates were 98.0%,100.0%,99.0%,97.0% and 100.0%,respectively;the negative coincidence rate were 100.0%,99.0%,100.0%,99.0% and 100.0%,respectively;the Kappa values were 0.98,0.99,0.99,0.96 and 1.00 respectively.The repeatability tests showed that the positive(negative) rates of critical value in HBsAg,HBsAb,HBeAg,HBeAb and HBcAb within ±20% concentration ≥ 95%,the 95% confidence intervals were 96.6%-99.5%,97.6%-99.5%,97.6%-99.5%,94.7%-99.5% and 98.6%-99.5%,respectively.Conclusion The results of the ADDCAER ELISA 1100 automated workstation and the Architect I2000 automatic chemiluminescence immunoassay analyzer for detecting the HBV serological markers have strong consistency.The ADDCAER ELISA 1100 automated workstation for detect HBV serological markers obtains the stable results within ± 20% concentration near cutoff points and is reliable in performance,thus can be used to qualitatively detect HBV serological markers in clinical specimens.

enzyme-linked immunoadsordent assay； qualitative test； performance evaluation； hepatitis B virus； serological markers

卫生部专项课题资助项目(28-1-5)。

卢婷，女，在读硕士，初级检验师，主要从事乙型肝炎传染研究。△

，E-mail：chming1971@126.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.05.003

A

1672-9455(2015)05-0582-03

2014-10-20

2014-12-10)