脓毒症患者血小板功能相关指标检查及临床意义*

但 刚，胡莉娜，江忠勇，刘 媛，耿 雪，谢 静，熊 杰(成都军区总医院临床实验医学研究与保障中心检验科/高湿医学全军重点实验室，成都 610083)



脓毒症患者血小板功能相关指标检查及临床意义*

但 刚，胡莉娜，江忠勇，刘 媛，耿 雪，谢 静，熊 杰△(成都军区总医院临床实验医学研究与保障中心检验科/高湿医学全军重点实验室，成都 610083)

目的 探讨脓毒症患者血小板聚集功能及P选择素、活化GPⅡb/Ⅲa等血小板活化指标的变化及其意义。方法 检测56例脓毒症患者血小板聚集功能及P选择素、活化GPⅡb/Ⅲa的变化。将脓毒症患者分为器官功能不全组和器官功能正常组进行比较分析，并与50例健康对照组进行比较。结果 脓毒症患者血小板聚集率显著升高，与健康对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)，血小板表面表达的P选择素、活化GPⅡb/Ⅲa明显升高，与健康对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)；器官功能不全组血小板聚集率及血小板表面表达的P选择素、活化GPⅡb/Ⅲa与器官功能正常组比较显著升高，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 脓毒症患者血小板处于高激活状态,血小板聚集率显著升高，易导致患者发生血栓，血小板聚集率及活化指标可作为判断脏器功能损害的指标之一。

脓毒症； 血小板聚集； P选择素； GPⅡb/Ⅲa

目前研究指出，感染脓毒症后极易诱发全身炎症反应综合征(SIRS)，其主要原因是血小板和中性粒细胞在受到感染、烧伤、外科大手术、中毒后通过瀑布放大反应，导致各种致炎因子，如白细胞介素、肿瘤细胞的激活，引起脓毒症性休克、多器官功能障碍综合征[1]。而且据文献[2]报道脓毒症发生后若不积极治疗，可以导致病情迅速进展，有30%～45%的病死率。因此，对脓毒症的治疗成为临床工作的重点。有学者发现临床进行抗血小板药物治疗可对脓毒症的预后有所改善。本文选择2013年3月至2014年3月本院重症医学科收治的56例脓毒症患者作为研究对象，探讨脓毒症患者血小板聚集功能及P选择素、活化GPⅡb/Ⅲa等血小板活化指标的变化及其意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2013年3月至2014年3月本院重症医学科收治的56例脓毒症患者，均符合2001年美国危重病医学会、美国胸科医师学会和欧洲危重病医学会联席会上所定义的脓毒症诊断标准[1]：符合下列感染参数中的2项以上和炎症参数中的1项以上。感染参数:(1)发热(中心体温超过38.3 ℃或低于36.0 ℃)；(2)心率(>90次/分)；(3)气促(呼吸超过30次/分)；(4)意识改变；(5)水肿或液体正平衡大于20 mL/kg；(6)血糖大于7.7 mmol/L。炎症参数：(1)白细胞增多症(白细胞大于12.0×109/L或白细胞小于4.0×109/L)或血液中不成熟白细胞大于10%；(2)C反应蛋白(CRP)>正常2个标准差；(3)降钙素原大于正常2个标准差。所诊断的脓毒症患者中，发生一个以上脏器功能不全者31例，为器官功能不全组；脏器功能正常者25例，为器官功能正常组；抽取同期来院健康体检者50例，设为健康对照组。3组研究对象年龄、性别构成比较，差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 方法 抽取患者卧位静脉血，血小板聚集功能检查采用0.9%枸橼酸钠抗凝；血小板活化指标P选择素、活化GPⅡb/Ⅲa检测采用乙二胺四乙酸二钾抗凝，各抽取3 mL待查。

1.3 检测指标

1.3.1 血小板聚集功能检测 采用美国Helena Laboratories公司生产的血小板聚集仪(AggRAM)进行检测，诱导剂为Helena Laboratories Beaumont,TX生产的二磷酸腺苷(ADP)，ADP最终诱导浓度为5 μmol/L，配套磁珠及反应试管。

1.3.2 流式细胞仪检测血小板活化指标 P选择素、活化GPⅡb/Ⅲa选用美国Beckman Coulter公司生产的Epics XL流式细胞仪。试剂为单克隆抗体:血小板活化后期标志物(CD62P PE)为藻红蛋白标记的抗P-选择素的单克隆抗体，活化的GPⅡb/Ⅲa复合物(PAC-1FIT C)为异硫氰酸荧光素标记的抗GPⅡb/Ⅲa单克隆抗体(均购自美国BD公司)。

2 结 果

脓毒症患者与健康对照组各项指标比较见表1。与健康对照组比较，脓毒症患者血小板聚集率、P选择素、活化GPⅡb/Ⅲa明显升高，差异均有统计学意义(P<0.05)。器官功能不全组与器官功能正常组相比，患者血小板聚集率、P选择素、活化GPⅡb/Ⅲa均明显升高，差异均有统计学意义(P<0.05)。

表1 脓毒症患者与健康对照组各项指标比较±s,%)

注：与健康对照组比较，*P<0.05；与器官功能正常组比较，△P<0.05。

3 讨 论

脓毒症是由感染引起的SIRS，而且随着病情的发展，脓毒症可以逐步发展为休克和多器官功能障碍综合征，最后导致死亡[3]。目前研究发现，临床上危重症患者中死亡的首要原因为脓毒症，占30%～45%。因此采取合理的指标发现脓毒症患者病情的发展，对于早期治疗和早期干预有积极作用。

血小板由骨髓造血组织中的巨核细胞产生，定向分化成原始的巨核细胞，逐步成为成熟的巨核细胞[4]。血小板的变化对指导炎症有重要作用。有学者取出脓毒症合并多器官功能障碍综合征患者血浆中的血小板，然后放入健康的白兔中，结果显示，3 h后白兔体内出现高凝状态，大量血小板黏附于血管内皮细胞中，而且随着时间延长，白兔体内出现弥散性血管内凝血，大量组织器官微循环出现栓塞[5]。研究还发现，脓毒症不仅增加血小板通过使白细胞介素-6转录因子活化,激活JAK激酶等酪氨酸激酶,增加对内皮细胞的黏附性，还增强脓毒症中受损内皮细胞的凝血活性。此外血小板还具有调整血管机能的作用，释放营养素，减少氧自由基毒性，维持血管的完整性[6-8]。

脓毒症发生后，中性粒细胞通过激活免疫细胞膜Ⅱ类分子的表达，使P选择素糖蛋白配体水平增高，加强与血小板表面结合，形成血小板-中性粒细胞聚集，当血小板磷酸化后，血小板黏附在表达有P选择素糖蛋白的组织中，发生聚集和促进白色血栓形成[9]。本研究发现，脓毒症患者血小板聚集率及血小板活化指标P选择素、活化GPⅡb/Ⅲa均明显升高，显著高于健康对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；在脓毒症患者中，器官功能不全组患者血小板聚集率及血小板活化指标P选择素、活化GPⅡb/Ⅲa均明显升高，显著高于器官功能正常组患者，差异有统计学意义(P<0.05)。进一步说明血小板聚集率的升高及活化指标的升高与脓毒症病情密切相关，由此提示在脓毒症发病过程中出现明显的血小板活化和聚集，活化的血小板形成循环血栓并黏附于血管内皮上。内源性凝血途径与外源性凝血途径活化血小板，使血小板可通过纤维蛋白互相聚集[10]；活化后的血小板自身以“自分泌”形式形成级联放大效应，诱导更多血小板过度聚集，形成循环血栓[11]。

此外脓毒症患者血小板激活程度与脏器功能损害程度有关,器官功能不全组患者均有一个或多个脏器受损，其血小板聚集率及血小板活化指标P选择素、活化GPⅡb/Ⅲa均明显高于器官功能正常组患者，显示脏器功能损害越严重,血小板活性越高。由此提示血小板激活指标可作为判断脓毒血症患者脏器功能损害的指标之一[12-13]。

综上所述,脓毒症患者血小板膜糖蛋白显著增高,激活的血小板与中性粒细胞、内皮细胞等细胞的黏附作用增强，这可能诱发微循环障碍，容易发生多器官功能障碍。在临床应用中，对脓毒症患者血小板聚集功能及血小板活化指标P选择素、活化GPⅡb/Ⅲa进行检测，可用于指导评估患者的病情及预后判断。

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Detection of platelet function related indicators in patients with sepsis and their clinical significance*

DANGang,HULi-na,JIANGZhong-yong,LIUYuan,GENGXue,XIEJingXIONGJie△

(DepartmentofClinicalLaboratory,CenterofClinicalLaboratoryMedicineandAssurance/theKeyLaboratoryofHighWetMedicine,GeneralHospitalofChengduMilitaryRegion,Chengdu,Sichuan610083,China)

Objective To explore the platelet aggregation function and the change of the P selectin,activated GPⅡb/Ⅲa in the patients with sepsis and their significance.Methods The platelet aggregation function and P selectin,activated GPⅡb/Ⅲa levels were detected in 56 cases of sepsis.The sepsis patients were divided into the organ dysfunction group and the normal organ function group for conducting the comparative analysis,and the comparison with 50 healthy controls were performed.Results The platelet aggregation rate in sepsis patients was significantly increased,showing the statistically significant difference compared with healthy control group(P<0.05),the levels of P selectin and activated GPⅡb/Ⅲis expressed on platelet surface were significantly increased,showing the statistically significant difference compared with healthy control group (P<0.05);the platelet aggregation rate and the levels of P selectin and activated GPⅡb/Ⅲexpressed on platelet surface in the organ dysfunction group were significantly increased compared with the normal organ function group,the difference was statistically significant(P<0.05).Conclusion The platelets in sepsis patients are in high activated state,and the platelet aggregation rate is significantly increased,which is easily cause the patients to develop thrombosis.The platelet aggregation rate and activated indexes can be used as the indicators for judging visceral function damage.

sepsis; platelet aggregation; P selectin; GPⅡb/Ⅲa

国家高技术研究发展计划(863计划)(2011AA02A111)；四川省卫计委科研课题(140007)。

但刚，男，本科，主管技师，主要从事临床血液学诊断。

△通讯作者，E-mail：byx410@sina.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.09.005

A

1672-9455(2015)09-1191-02

2014-10-24

2015-01-26)