HBV-DNA检测在乙型肝炎诊断中的价值分析

罗 澜

(湖北省荆州市公安县人民医院检验科 434300)



·临床研究·

HBV-DNA检测在乙型肝炎诊断中的价值分析

罗 澜

(湖北省荆州市公安县人民医院检验科 434300)

目的 分析乙型肝炎病毒(HBV)-DNA检测在乙型肝炎诊断中的价值。方法 选取2012年2月至2013年2月收治的门诊及住院患者684例，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HBV血清标记物，根据检测结果将所有患者分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组，并采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测HBV-DNA，比较各组 HBV-DNA 阳性检出率及水平。结果 Ⅰ组(“大三阳”组)患者HBV-DNA阳性检出率达100.0%，平均水平为5.10×107copy/mL，较其他各组明显增高，差异有统计学意义(P<0.05)；V组(乙肝两对半“全阴”组)患者HBV-DNA阳性检出率为0.0%，平均水平为1.11×102copy/mL。结论 单独采用ELISA定性检测HBV血清标志物对乙型肝炎的诊断具有一定的局限性，辅以HBV-DNA的实时荧光定量PCR检测可提高早期诊断的准确率及灵敏度。

乙型肝炎； 血清标志物； HBV-DNA； 定量检测

乙型肝炎是全球最常见的慢性传染性疾病之一，我国慢性乙型肝炎的发病率位居世界首位[1]。据统计，每年因乙型肝炎及其相关性疾病，如乙型肝炎所致肝衰竭等死亡的人数高达25万，给社会及患者家庭带来了严重的威胁[2]。乙型肝炎属于病毒性感染疾病，根治极为困难，因此临床早期诊断显得尤为重要。目前，临床对乙型肝炎的检查主要通过乙型肝炎病毒(HBV)5项血清标志物的定性检测及HBV-DNA的定量检测。本研究通过分析HBV-DNA检测在诊断乙型肝炎中的价值及其与HBV血清标志物的相关性，为临床诊断乙型肝炎提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2012年2月至2013年2月在本院就诊的684例门诊及住院患者为研究对象，其中男432例，女252例；年龄1～87岁，平均(33.7±1.1)岁；病程3 d至6年，平均为(1.5±0.1)年。所有患者均晨起抽取空腹静脉血6 mL，均分为2管，分别进行HBV血清标志物及HBV-DNA检测。

1.2 方法

1.2.1 检测方法及仪器设备 (1)HBV血清标志物的检测：乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎表面抗体(抗-HBs)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)、乙型肝炎e抗体(抗-HBe)和乙型肝炎核心抗体(抗-HBc)的检测采用中山生物公司提供的酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒。(2)HBV-DNA检测：采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)，从血清中提取HBV-DNA加入反应管，放入扩增仪进行扩增，反应结束后由电脑自动分析结果；仪器采用美国MJ公司生产的Option DNA Engine型PCR扩增仪及上海科华生物技术有限公司提供的荧光定量 HBV-DNA试剂盒。所有操作过程均严格按照试剂盒要求及防污染措施进行。

1.2.2 分组及指标阳性值界定 按照HBV血清标志物的ELISA检测结果将所有患者分成5组，Ⅰ组(“大三阳”组)为HBsAg、HBeAg、抗-HBc阳性，Ⅱ组(“小三阳”组)为HBsAg、抗-HBe、抗-HBc阳性，Ⅲ组为抗-HBs、抗-HBe、抗-HBc阳性，Ⅳ组为HBsAg、抗-HBc阳性；Ⅴ组为抗-HBs阳性。未提及者即为阴性。HBV-DNA≤500 copy/mL为阴性，>500 copy/mL为阳性。并根据HBV-DNA检测结果分为4个水平。

2 结 果

2.1 HBV血清标志物ELISA检测结果 Ⅱ组患者例数最多，所占百分率达44.0%(301/684)，其次为Ⅰ组，占30.8%(211/684)，均明显高于Ⅲ组(12.6%)、Ⅳ组(10.8%)、Ⅴ组(1.8%)，差异有统计学意义(P<0.05)。

2.2 HBV-DNA实时荧光定量PCR检测结果 Ⅰ组患者HBV-DNA阳性检出率达100.0%，HBV-DNA水平较其他各组明显增高，比较差异有统计学意义(P<0.05)。

表1 HBV-DNA实时荧光定量PCR检测结果

3 讨 论

由于肝炎病毒的入侵，急慢性肝炎患者的肝细胞受到严重的损害。我国目前约有2亿人口感染HBV，给社会造成了很大的负担[3]。HBV属于一种部分双链DNA病毒，所有遗传信息均载于DNA片段上，病毒以此复制、增殖。HBV-DNA为无蛋白质包裹的裸露DNA，具有感染性，可单独完成对宿主的侵袭，使宿主体内出现完整的HBV颗粒[4]。由于HBV感染早期的临床表现不典型，大量乙型肝炎患者就诊时已出现并发症，这给乙型肝炎的临床治疗带来了很大的困难，极大地影响患者预后[5]。因此，早期诊断与预防乙型肝炎至关重要。

HBV-DNA检测的主要目的是判断患者的病毒复制量，反映疾病的传染性，尤其在判断乙型肝炎的转归及用药前后的疗效等方面有重要的参考价值，同时也是重要的抗病毒治疗用药指征之一[6]。本研究采用实时荧光定量PCR对HBV-DNA进行检测，可以准确地为乙型肝炎的诊断提供依据。实时荧光定时PCR是临床基因诊断的有力手段，该方法现已采取闭管方式进行扩增和检测，克服了以往普通 PCR的污染问题，进一步增加了检测的可信度[7]。此外，荧光探针加强了PCR检测的特异性，使其能直接定量检测HBV水平，准确地反映HBV的感染、复制及治疗情况[8]。并且，该方法的实际操作过程可设阳性梯度，定量范围极广。而ELISA作为临床诊断HBV感染的传统方法，与实时荧光定量PCR相比，该方法是一种检测病毒感染的间接手段，反映了人体对HBV的免疫反应状态[9]。

本研究684例患者血清均经ELISA检测乙型肝炎两对半，结果显示“小三阳”患者所占百分率最高(44.0%)，其次为“大三阳”患者(30.8%)，均明显高于其他各组，比较差异有统计学意义(P<0.05)。说明目前乙型肝炎的患病率高，但早期检出率低。对所有患者行HBV-DNA的实时荧光定量PCR检测，“大三阳”患者HBV-DNA阳性检出率达100.0%，平均水平为5.10×107copy/mL，较其他各组明显增高，比较差异有统计学意义(P<0.05)。而在乙型肝炎两对半全阴的Ⅴ组，HBV-DNA定量检测平均水平为1.11×102copy/mL，阳性率为0.0%。HBV-DNA的定量检测可以作为ELISA的补充，充分反映HBV在体内的感染与复制状况；并且，在临床干预后检测HBV-DNA水平还可以判断疗效，为进一步指导临床治疗提供依据[10]。

综上所述，单纯的ELISA定性检测乙型肝炎血清标志物对乙型肝炎的诊断具有一定的局限性，辅以HBV-DNA的定量检测能提高乙型肝炎早期诊断的准确率及灵敏度。

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10.3969/j.issn.1672-9455.2015.06.045

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1672-9455(2015)06-0827-01

2014-07-27

2014-11-22)