复方中草药肉鸡饲料添加剂的药效学研究

范广璞+杨猛

摘要：为了给复方中草药肉鸡饲料添加剂的研制奠定药效学基础，依据单味中草药对肉鸡规模化养殖常见病原菌的抑菌和饲喂效果，结合中医药理论，配制出3剂中草药复方制剂，研究了3剂中草药复方制剂的免疫学试验，结果显示配制的3剂中草药复方制剂都能够明显提高肉鸡机体的免疫机能。免疫学综合试验结果表明，复方制剂Ⅲ效果最佳，最终确定中草药复方Ⅲ进行饲喂试验。

关键词：中草药；饲料添加剂；药效学

中图分类号： S816.75文献标志码： A文章编号：1002-1302（2015）02-0198-03

收稿日期：2014-04-17

基金项目：江苏省高校科研成果产业化推进项目（编号：JHZD08-47）。

作者简介：范广璞（1968—），江苏淮安人，副教授，主要研究方向为药物微生物技术。E-mail：spxyym80@163.com。

随着肉鸡饲养方式从散养型向规模化转变，养殖密度增加1倍，发病率会增加4倍以上。为保障肉鸡的存活率，饲料添加剂的使用量逐渐增加，在为肉鸡养殖业的健康发展作出巨大贡献的同时，也衍生了不少问题。饲料添加剂含有抗生素类药物，可以提高肉鸡的存活率和产量，但鸡肉中药物残留的提高，直接危害了人类健康[1-3]。随着生活水平的提高，人们健康保健意识显著增强，消费者对鸡肉的品质和安全性等方面的要求显著提高，低脂药残少的鸡肉成为消费者的首选。

开发一种既能提高肉鸡存活率和产量，又能改善鸡肉品质的饲料添加剂迫在眉睫，中草药无毒副作用、无抗药性、无污染、无残留，多为常见药物，价格低廉，优于抗生素，因而成为人们研究开发的首选对象[4-8]。本研究在单味中草药对肉鸡养殖常见菌抑菌和饲喂研究的基础上，依据中药配伍的原理，配制3剂中草药复方制剂，并对其进行免疫学试验，筛选出药效最好的中草药复方制剂，进行饲喂试验，旨在为研制应用于肉鸡养殖业的复方中草药肉鸡饲料添加剂奠定基础。

1材料与方法

1.1试验中草药复方

根据单味中草药的抑菌效果和病原菌种类，结合中医药理论，配制出3剂中草药复方制剂，分别为制剂Ⅰ、制剂Ⅱ、制剂Ⅲ[9]。

1.2试验动物

昆明种小白鼠、家兔、鸡。

1.3试剂与仪器

牛津杯、琼脂培养基、鲜血琼脂培养基、无菌营养肉汤、抗鸡红细胞抗体、蒸馏水、无菌生理盐水、小牛血清淋巴细胞分层液、0.8%戊二醛溶液、苏木精和伊红染色液、培养皿 TDL-40B 低速台式水平离心机、低温冰箱、电热恒温水浴箱、OLYMPUS显微镜等。

1.4方法

1.4.1抗鸡红细胞抗体的制备选择体重量2～3 kg的健康雄性家兔，用Hanks液洗过的压积鸡红细胞进行免疫。每日背部皮下注射50%鸡压积红细胞1次，连续5次，注射量分别为0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL；7 d后耳静脉注射50%的压积鸡红细胞悬液1 mL，连续3 d，用96孔反应板测定抗体效价，当抗体效价开始下降时，耳静脉注射50%的压积红细胞悬液2 mL加强免疫1次，3 d后开始测定抗体效价，当效价达1 ∶4 096时捕杀，采血、分离血清，-20 ℃保存备用[10]。

1.4.2中草药饲料添加剂饲喂试验试验组小白鼠饲喂含1%中草药饲料添加剂的饲料，对照组小白鼠饲喂正常的饲料，连续饲喂7 d，分别对试验组和对照组小白鼠Ea花环形成率、EAC花环形成率、淋巴细胞转化率、红细胞C3b受体花环形成率和IC花环形成率等免疫指标进行测定[10]。

1.4.3测定方法Ea花环形成率的测定：按林清华的方法[11]；EAC花环形成率的测定、淋巴细胞转化率的测定、中性粒细胞功能的测定，按何昭阳等的方法[12]；红细胞免疫功能的测定：按朱立平等的方法[13]测定红细胞C3b受体花环形成率和红细胞IC花环形成率。

1.5统计与分析

试验值以平均数±标准差（x±s）表示，并采用SPSS 17.0进行单因素方差分析。

2结果与分析

2.1中草药饲料添加剂对小白鼠Ea花环率的影响

2.2中草药饲料添加剂对小白鼠EAC花环形成率的影响

从表2可以看出，饲喂后10 d，制剂Ⅰ、制剂Ⅱ试验组小白鼠EAC玫瑰花环形成率与对照差异显著，制剂Ⅲ试验组与对照比较差异极显著，制剂Ⅲ试验组与制剂Ⅰ、制剂Ⅱ组比较差异显著；20 d时，制剂Ⅰ、制剂Ⅱ和制剂Ⅲ试验组小白鼠EAC玫瑰花环形成率与对照差异显著，各制剂试验组间差异不显著。30 d时，各处理间差异不显著。表2中药饲料添加剂对小白鼠EAC玫瑰花环形成率的影响

处理EAC玫瑰花环率（%）10 d20 d30 d对照 12.050±1.682aA12.450±1.763bA 12.320±1.780a 制剂Ⅰ15.050±1.528bAB 14.785±1.248aA 13.617±1.491a 制剂Ⅱ15.796±1.426aAB14.869±1.236aA13.627±1.483a制剂Ⅲ18.326±2.236cB15.896±2.432aA13.323±1.681a

2.3淋巴细胞转化率测定

从表3可以看出，饲喂10 d，制剂Ⅰ、制剂Ⅱ试验组小白鼠的淋巴细胞转化率与对照差异显著，制剂Ⅲ试验组与对照差异极显著，与制剂Ⅰ组、制剂Ⅱ组差异显著；20 d时，制剂Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组与对照差异显著。30 d时，各处理间差异不显著。表3中草药饲料添加剂对小白鼠淋巴细胞转化率的影响

处理淋巴细胞转化率（%）10 d20 d30 d对照 52.520±3.543aA52.785±3.203bA57.785±2.858a制剂Ⅰ56.735±3.595bAB55.520±3.355aA53.570±3.508a制剂Ⅱ56.265±3.240bAB55.785±2.548aA53.858±2.580a制剂Ⅲ60.582±3.430cB56.510±2.436aA53.695±2.230aendprint

2.4中性粒细胞功能测定

由表4可知，饲喂10 d，制剂Ⅰ、Ⅱ试验组小白鼠中性白细胞吞噬活性与对照差异显著，制剂Ⅲ组与对照差异极显著，与制剂Ⅰ、Ⅱ组差异显著；20 d时，制剂Ⅰ组、制剂Ⅱ组和制剂Ⅲ组小白鼠中性白细胞吞噬活性与对照差异显著。30 d时，各处理间差异不显著。

2.5红细胞C3b受体花环率的测定

从表5可以看出，饲喂10 d，制剂Ⅰ试验组、制剂Ⅱ试验组小白鼠C3b受体花环形成率与对照差异显著，制剂Ⅲ组与对照差异极显著，与制剂Ⅰ组、制剂Ⅱ组比较差异显著；20 d 时，制剂Ⅰ组、制剂Ⅱ组和制剂Ⅲ组小白鼠C3b受体花环形成率与对照差异显著。30 d时，各处理间差异不显著。表5中药复方对小白鼠红细胞C3b受体花环形成率

处理C3b花环形成率（%）10 d20 d30 d对照 8.735±1.798aA8.653±1.899bA8.893±1.471a制剂Ⅰ11.653±2.423bAB 11.520±2.630aA8.328±1.680a制剂Ⅱ11.381±1.932bAB11.450±1.652aA8.130±1.864a 制剂Ⅲ14.910±1.796cB 11.553±1.657aA9.800±1.675a

2.6红细胞IC花环率的测定

从表6可以看出，饲喂10 d时，制剂Ⅰ组、制剂Ⅱ组和制剂Ⅲ组小白鼠IC花环形成率与对照差异显著，制剂Ⅰ组、制剂Ⅱ组与制剂Ⅲ组差异显著；20 d时，制剂Ⅰ组、制剂Ⅱ组和制剂Ⅲ组小白鼠IC花环形成率与对照差异显著。30 d时，各处理间差异不显著。

3结论

通过Ea花环形成率、EAC花环形成率、淋巴细胞转化率、红细胞C3b受体花环形成率和IC花环形成率等免疫指标分析，结果表明，由金银花等中草药制成的小白鼠中草药饲料添加剂能够明显促进小白鼠机体的免疫机能，复方制剂Ⅲ效果最佳。

参考文献：

[1]尹绪贵. 当前养殖业中抗生素的应用情况[J]. 兽医导刊，2013（2）：44-45.

[2]刘世刚，丁景华. 饲料中添加金霉素和喹乙醇使用现状的分析[J]. 现代畜牧兽医，2012（11）：41-42.

[3]林云. 饲料抗生素的应用及面临的问题[J]. 饲料研究，2001（4）：25-26.

[4]李喆，郑家明，张勇，等. 复合中草药饲料添加剂改善蛋鸡蛋品质的试验研究[J]. 中国畜牧杂志，2011，47（16）：59-61.

[5]吴汉东. 中草药添加剂对蛋鸡生产性能及蛋品质的影响[J]. 饲料研究，2013（3）：80-82.

[6]王改琴，王恬. 中草药饲料添加剂的功能及其在蛋鸡生产中的应用[J]. 饲料博览，2010（10）：37-39.

[7]彭玉麟，参木有. 中草药饲料添加剂开发中存在的问题及对策[J]. 中国饲料，2001（8）：31-33.

[8]马玉敏. 中草药饲料添加剂研究综述[J]. 乳业科学与技术，2001，24（1）：22-24.

[9]黄亚东，孔庆新，王仁雷，等. 复方中草药治疗奶牛隐性乳腺炎试验[J]. 中国乳品工业，2007，35（8）：39-41.

[10]黄亚东，王仁雷，杨 猛.中草药饲料添加剂对奶牛免疫机能影响的研究[J]. 中国动物检疫，2008，25（4）：23-24.

[11]林清华. 免疫学实验[M]. 武汉：武汉大学出版社，1999：210.

[12]何昭阳，胡桂学，王春风. 动物免疫学实验技术[M]. 长春：吉林科学技术出版社，2002：146-149.

[13]朱立平，陈学清. 免疫学常用实验方法[M]. 北京：人民军医出版社，2000：187-188.

朱爱荣，霍如林，张林，等. 氟苯尼考多克隆抗体的制备及其鉴定[J]. 江苏农业科学，2015，43（2）：201-204.endprint