过敏性哮喘患者外周血细胞因子水平变化及临床意义＊

申卫红，龚 芳，朱 岚，史建平

（南通大学第三附属医院：1.检验科；2.呼吸科，江苏无锡214041）

过敏性哮喘是由多种细胞，如Th17细胞、调节性T细胞（regulatory T cell，Treg）及其细胞因子共同参与的呼吸道变态反应性疾病，其发病率在呼吸科患者中呈上升趋势。近年的研究发现，Th17细胞和Treg分泌的细胞因子在过敏性哮喘发病中发挥了重要作用。Th17细胞主要分泌细胞因子IL-17和IL-22；而Treg是一类具有免疫抑制功能的T淋巴细胞，通过分泌细胞因子IL-10的方式对免疫细胞发挥作用[1-3]。国外的许多研究表明，改变外周血中IL-17、IL-22和IL-10的表达可以影响过敏性哮喘患者的炎症反应程度，从而参与哮喘的发生[4-5]。本研究主要通过检测过敏性哮喘患者外周血中细胞因子IL-17、IL-22和IL-10的表达水平，从而探讨其在过敏性哮喘患者发病机制中的意义及其与严重程度的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2012年3月至2013年5月在本院呼吸科住院治疗的过敏性哮喘患者40例，其哮喘症状符合2007年中华医学会呼吸病学分会哮喘学组修订的《支气管哮喘防治指南》中诊断标准。根据其临床症状，所用药物及呼气峰流速将哮喘分为轻、中、重度哮喘组，其中男28例，女12例，平均年龄（38.2±11.5）岁。本院健康体检者30例作对照组，男15例，女15例，平均年龄（30.3±8.1）岁，均无过敏性疾病和近期无呼吸道感染，近1个月内未使用糖皮质激素，肺功能正常等。所有参加研究的对象均获得了知情同意权。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 各哮喘组患者和健康者分别于清晨空腹抽取肘部静脉血2mL各2份，一份肝素抗凝，一份分离血清，待检。

1.2.2 外周血单个核细胞的分离培养 以聚蔗糖-泛影葡胺液分离患者和健康人外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell，PBMC），PBS洗涤后以（3～5）×105个／孔的细胞浓度接种于24孔培养板，以含10%小牛血清的RPMI-1640完全培养液于37℃、5%CO2的培养箱中培养，72h后收集培养上清液，待检。

1.2.3 外周血细胞因子水平检测 细胞因子IL-17、IL-22、IL-10的检测采用ELISA试剂盒（美国BD公司），检测严格按照试剂盒说明书进行。

1.2.4 血清IgE水平及全血嗜酸性粒细胞（EO）比率的检测 空腹IgE定量测定采用电化学发光免疫分析法（罗氏全自动免疫分析仪），EO比率的检测采用全自动血液分析仪（日本SYSMEX全自动血液分析仪），操作严格按照仪器程序测定。

1.2.5 细胞因子与哮喘严重程度相关性分析 采用Pearson相关性分析IL-17、IL-22、IL-10与过敏性哮喘严重程度的相关性。

1.3 统计学处理 采用SPSS19.0统计分析软件对样本数据进行处理，所得计量资料以±s表示。两组间的均数比较采用组间t检验，多组间比较采用one way ANOVA检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 外周血细胞因子IL-17、IL-22、IL-10的检测 轻、中、重度哮喘组IL-17、IL-22的水平均明显高于对照组（P＜0.05），而IL-10的水平均明显低于对照组（P＜0.05），见表1。

表1 各组外周血IL-17、IL-22、IL-10表达量的比较（±s，pg／mL）

表1 各组外周血IL-17、IL-22、IL-10表达量的比较（±s，pg／mL）

组别 n IL-17 IL-22 IL-10轻度哮喘组10 20.18±6.36 320.24±119.11 40.03±15.23中度哮喘组 20 37.37±9.87 360.35±101.46 31.61±13.48重度哮喘组 10 56.52±15.60 396.53±92.53 26.52±12.36对照组30 11.65±4.89 159.39±97.32 58.53±38.48

2.2 血清IgE水平及EO比率的检测 哮喘组患者空腹IgE的水平（300.71±78.66）ng／mL，明显高于对照组（53.45±8.55）ng／mL（P＜0.05）；哮喘组患者全血EO比率（27.51±6.04）mmol／L，明显高于对照组（3.45±0.52）mmol／L（P＜0.05）。

2.3 细胞因子与哮喘严重程度相关性分析 根据Pearson相关性分析IL-17、IL-22水平与哮喘严重程度呈正相关（r＝0.715，P＜0.01），而IL-10水平与哮喘严重程度呈负相关（r＝-0.346，P＜0.05）。

3 讨论

过敏性哮喘是一种慢性的气道炎症性疾病，多种组织细胞及其分泌的细胞因子直接参与哮喘的发生、发展。Th17细胞主要分泌IL-17和IL-22，在自身免疫性疾病和炎症性疾病等多种疾病中发挥重要作用[6-8]。国外有研究显示，在过敏性哮喘患者外周血中Th17细胞及其分泌的IL-17和IL-22的表达均增加[9-10]。因而，Th17细胞在哮喘的发病机制中发挥着重要作用，而其效应的发挥主要通过特征性细胞因子IL-17及IL-22来完成。本研究的结果也显示，在过敏性哮喘患者组中，外周血细胞因子IL-17和IL-22的表达均增加，并且其增加的程度与哮喘发病的严重程度相一致。最近调控免疫反应的CD4＋CD25＋Treg成为免疫抑制治疗的研究焦点。CD4＋CD25＋Treg可通过分泌细胞因子IL-10等方式来抑制免疫应答，从而使机体产生免疫耐受。有研究发现，在IL-10表达减少的小鼠中其CD4＋CD25＋Treg也相应减少，而对于过敏原诱导的哮喘炎症反应相应地增加。因此，IL-10表达减少可加重哮喘的发作，提示CD4＋CD25＋Treg在过敏性哮喘中起重要作用[11-12]。

本研究结果显示，过敏性哮喘组血清中IgE的水平及EO比率高于对照组；外周血细胞因子IL-17、IL-22水平均高于对照组，而IL-10水平低于对照组，提示Th17细胞和CD4＋CD25＋Treg共同参与过敏性哮喘的发病。在本研究中，哮喘组同时存在IL-17、IL-22水平增加而IL-10水平却减少的情况，提示其细胞水平Th17／CD4＋CD25＋Treg表达失衡可能在过敏性哮喘的发病机制中起重要作用。综上所述，通过从过敏性哮喘患者细胞因子水平的研究发现，IL-17、IL-22、IL-10在过敏性哮喘的发病机制中起重要作用。因而，在过敏性哮喘患者的治疗中，动态监测其变化将有助于临床诊断及治疗。

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