多耐药基因（MDR1）在宫颈癌组织中的表达及临床意义

寇蓬+徐勤+杨丽华

摘要：目的 探讨多耐药基因（MDR1）在宫颈癌组织中的表达及临床意义。方法 免疫组化法检测78例中、晚期宫颈癌组织微阵列芯片标本中MDR1表达，探讨其与宫颈癌临床病理特征的关系。结果 78例宫颈癌组织中MDR1阳性表达率为85.6%，随着FIGO分期的变晚、淋巴转移的出现、分化程度的降低，MDR1的表达逐渐增高。结论 MDR1在宫颈癌组织中表达可能与宫颈癌的侵袭、转移和进展密切相关。

关键词：子宫颈癌；MDR1基因；耐药；表达

宫颈癌是全球女性第二高发癌症，每年有52.9万例新发病例，50%发生于发展中国家[1]，发病率仅次于乳腺癌，严重危害着女性的身心健康，近27.4万女性死于该病[2-3]。其中侵袭、转移被认为是宫颈癌患者死亡的重要原因，是影响患者预后的独立因素。因此研究与宫颈癌侵袭、转移的相关因素具有重要意义。多药耐药（muhidrugresistance，MDR）指的是肿瘤细胞对一种抗肿瘤药物产生耐药性的同时，对结构和作用机制完全不同的抗肿瘤药物产生交叉耐药性[4]。本研究采用免疫组织化学方法检测MDR1在中、晚期宫颈癌组织中的表达，分析MDR与中晚期宫颈癌临床病理之间的关系，探讨MDR1在宫颈癌侵袭、转移和进展中的作用。

1 资料与方法

1.1一般资料 宫颈癌组织微阵列芯片购自西安艾丽娜生物科技有限公司，组织芯片的病理学诊断由两个独立的病理科医师一致得出。芯片组织标本由宫颈活检病理确诊，按照国际妇产科联盟（FIGO）2009年修订的宫颈肿瘤分期标准，Ⅱ期43例，Ⅲ期22例，Ⅳ期13例（含淋巴结转移癌8例）。1例正常宫颈腺体作为阴性对照，年龄为47岁。另有一例粘液表皮样癌，不进入统计。有1例标本无组织学分级资料。山羊血清、HRP-山羊抗兔二抗均购自康为世纪、兔抗人MDR、DAB显色试剂盒、苏木素染色剂、中性树胶均够自博士德。

1.2免疫组化法检测MDR在宫颈癌组织中的表达 切片常规烘烤、脱蜡、水化、抗原修复、山羊血清室温封闭1h，每张切片分别滴加0.01M PBS按1：100稀释的兔抗人MDR一抗，4℃过夜，滴加生物素标记的二抗300μl，室温避光孵育30min，滴加DAB显色液液300μl，苏木素复染、常规脱水、透明、中性树胶封片、读片。己知阳性片为阳性对照，PBS代替一抗作为阴性对照。

1.3 MDR表达评判标准 参照相关文献[5]，在Leica光学显微镜200倍放大倍数观察切片，MDR1以细胞核或细胞质呈淡黄色至棕褐色颗粒为阳性。随机选择五个视野，每个视野计数200个细胞。评分标准按Shimizu方法，根据阳性细胞百分比和染色强度评分：根据染色强度分别记为0分（阴性反应），1分（淡黄色），2分（棕黄色）和3分（棕褐色）；根据阳性细胞数目分别记为0分（阳性细胞<10%），1分（阳性细胞数<40%），2分（阳性细胞数40%～70%），和3分（强阳性：阳性细胞数>70%）。两类分值相乘，5个视野评分结果取均值。0～3分为（-），4～5分为（+），6～分为（++），9分为（+++）。得到各组的平均分数后进行统计分析比较。

1.4统计学方法 采用SPSS17.0软件对数据进行统计分析处理：计数资料采用Fisher's精确概率法及非参数秩和检验；若P<0.05，则差异有统计学意义。

2 结果

MDR在宫颈癌组织中的表达及与临床病理特征的关系MDR免疫组化阳性产物呈淡黄色至棕褐色颗粒，主要定位于细胞浆或细胞核（见图1）。78例宫颈癌组织中MDR的阳性表达率为85.6%。MDR在宫颈癌组织中的表达与肿瘤组织学类型、年龄无关；与FIGO分期、淋巴转移、分化程度密切相关，随着FIGO分期的变晚、淋巴转移的出现、分化程度的降低MDR的表达均逐渐增高（P<0.05），见表1。

3 讨论

化疗在肿瘤的治疗中发挥了重要的作用，但是肿瘤细胞对药物的耐药性严重影响了化疗药的临床效果。本文探讨了常见的耐药基因及宫颈癌进展的相关性，MDR1基因是MDR发生的主要基因，其编码一种细胞膜糖蛋即P-糖蛋白（P-glymprotein，PgP），利用细胞膜ATP泵与化疗药物结合并将药物泵出细胞外，导致细胞内药物浓度降低，进而产生耐药。张岩等[6]发现，P-gp蛋白阳性表达可能是导致宫颈癌患者化疗失败的原因之一，提示通过检测治疗前MDR1基因的表达，可预测患者的预后及化疗效果。本研究还发现发现MDR1基因的表达与淋巴结转移、分化程度及FIGO分期呈正相关，随着淋巴结转移、分化程度越低、FIGO分期越高，其阳性表达越高。说明MDR1基因的表达除了与化疗耐药发生有关外，与宫颈的发生、发展、浸润转移也密切相关。因此，检测MDR1的表达可以预测宫颈癌化疗敏感性、协助临床选择化疗方案，同时可推测宫颈癌浸润、转移程度，评估宫颈癌病情，具有一定的临床意义。但MDR1高表达与宫颈癌进展、浸润转移的机制还需要进一步研究。

参考文献：

[1]Justin O，Parkhurst，Madhulika Vulimiri，et al.Cervical cancer and the global health agenda：Insights from multiple policy-analysis frameworks[J].Global Public Health，2013，8（10）：1093-1108.

[2]Jemal A，Center M M，Desantis C，et al.Global patternsof cancer incidence and mortality rates and trends[J].Cancer Epidemiology Biomarkers&Prevention，2010，19（8）：1893-1907.

[3]Ferlay J，Shin HR，Bray F，et al.Estimates of worldwideburden of cancer in 2008：GLOBOCAN 2008[J].Int JCancer，2010，127（12）：2 893-2 917.

[4]Murakami S.Molecular mechanism of multi-drug resistance[J].Nihon Rinsho，2008，66（1）：193-203.

[5]韩晶，骞爱荣，胡丽芳，等.基于免疫荧光图像的微管蛋白半定量分析[J].第四军医大学学报，2009（24）：2901-2904.

[6]张岩，李宁.宫颈鳞癌组织中P-gP、LRP的表达及临床意义[M].山东医药，2011，51（15）：1-3.编辑/哈涛