HPLC法测定槲寄生中N-桂皮酰基丁二胺

孙永慧，郎 悦，张 颖

(黑龙江中医药大学 中医药研究院，哈尔滨 150040)

HPLC法测定槲寄生中N-桂皮酰基丁二胺

孙永慧，郎 悦，张 颖

(黑龙江中医药大学 中医药研究院，哈尔滨 150040)

建立HPLC法测定槲寄生中N-桂皮酰基丁二胺的量的方法.采用高效液相色谱法检测，DiamonsilTMC18色谱柱(5.6×250 mm，5 μm)；以乙腈-0.2%磷酸溶液(20∶80)为流动相；检测波长：278 nm；流速：1.0mL/min；柱温：25 ℃. N-桂皮酰基丁二胺在0.1～0.5 μg(r=0.999 8)范围内呈良好的线性关系；平均回收率为98.3%(n=6)，RSD=0.8%.该测定方法准确、简便、灵敏度高、重现性好，可作为该药材的质量控制方法.

槲寄生；N-桂皮酰基丁二胺；高效液相色谱

槲寄生是桑寄生科槲寄生属植物，主要含有黄酮、三萜、生物碱等成分.具有祛风湿、强筋骨、补肝肾、安胎元的功效，用于风湿痹痛，筋骨无力，崩漏经多，妊娠漏血，腰膝酸软，胎动不安，头晕目眩等症[1].据文献报道，槲寄生属植物具有抗心律失常、抗病毒、抗氧化等多种作用[2]，槲寄生生物碱抗肿瘤活性很强[3].本实验测定了槲寄生中生物碱类成分N-桂皮酰基丁二胺的量[4-5]，为评价槲寄生质量提供了参考.

1 仪器与试药

Waters 2695-2998型高效液相色谱仪(美国沃特斯公司)；CPA225D电子天平(北京赛多利斯科学仪器有限公司).槲寄生(哈尔滨顺合大药房有限公司)；N-桂皮酰基丁二胺(从槲寄生中分离得到，经MS、1H-NMR、13C-NMR鉴定结构，HPLC归一化法测定质量分数在98.0%以上)；乙腈(色谱纯，美国Tedia公司)；其他试剂(分析纯).

2 方法及结果

2.1 色谱条件

色谱柱型号：DiamonsilTMC18(5μm，5.6×250 mm)；流动相：乙腈-0.2%磷酸溶液(20∶80)；检测波长是278 nm；流速为1.0 mL/min；柱温是25 ℃.HPLC色谱图见图1、2.

图1 N-桂皮酰基丁二胺对照品HPLC图

图2 槲寄生药材HPLC图

2.2 制备供试品溶液

取干燥的槲寄生药材粗粉5 g，用分析天平精密称定质量，用75%的乙醇溶液50 mL回流提取2 h，滤过，取滤液，浓缩提取液至无醇味，然后加入水15 mL，用稀盐酸调节pH值至2～3，滤过，取滤液，用浓氨水调pH值至9～10，再用三氯甲烷提取3次，每次20 mL，合并三氯甲烷提取液，蒸干，用色谱甲醇定容至5 mL的量瓶中，用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，得到待测供试品溶液.

2.3 制备对照品溶液

称取自制的N-桂皮酰基丁二胺对照品2.5 mg，精密称定重量，置于50 mL容量瓶中，精密加甲醇至刻度，制成质量浓度为0.05 mg/mL的N-

桂皮酰基丁二胺对照品溶液.

2.4 测定线性范围及制备标准曲线

分别精密吸取N-桂皮酰基丁二胺对照品溶液2、4、6、8、10、12 μL，按前述2.1项下的色谱条件，注入液相色谱仪中，进行色谱峰面积测定，将测得的对照品色谱峰面积数据进行线性回归，以进样量为横坐标，以对照品色谱峰峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得到回归方程是：Y=2.2×106X-10 789(r=0.999 8)，上述结果显示：N-桂皮酰基丁二胺对照品进样量在0.1～0.6 μg之间呈现出良好的线性关系.

2.5 精密度试验

分别精密吸取N-桂皮酰基丁二胺对照品溶液10 μL，按照前述2.1项下的色谱条件，进样测定，连续进样6次，记录对照品峰面积，结果峰面积值的RSD为1.6 %，结果说明仪器精密度较高，测定结果可靠.

2.6 稳定性试验

取前述2.2项下制备的槲寄生供试品溶液，按照设定的时间间隔分别进样测定.时间间隔如下：0、2、4、6、8、12 h.按照前述2.1项下的色谱条件，进样测定，每次进样10 μL，记录峰面积，结果显示，槲寄生供试品溶液在12 h之内是稳定的，RSD为1.7%.

2.7 重复性试验

取槲寄生药材粉末6份，每份大约5 g，精密称定质量，按前述2.2项下方法提取制备槲寄生供试品溶液并进行测定，计算6批供试品中N-桂皮酰基丁二胺的量，结果N-桂皮酰基丁二胺的量平均值为0.062 5 mg/g，RSD为1.5%.试验结果表明，本方法重复性良好.

2.8 加样回收率试验

取槲寄生药材粉末6份，每份大约2.5 g，精密称定重量，每份供试品分别加入N-桂皮酰基丁二胺对照品0.15 mg(精密加入配制的质量浓度为0.1 mg/mL的对照溶液1.50 mL)，按照前述2.2项下供试品溶液制备方法制得待测加样回收率的样品溶液，注入液相色谱仪，依前述2.1项下色谱条件法进样检测，检测结果见表1.测定结果表明，该测定方法回收率较好，测定结果可靠.

表1 加样回收率测定结果

取样量/g样品中的量/mg对照品加入量/mg测得量/mg回收率/%回收率平均值/%RSD/%2．50590．15660．15000．305699．32．51060．15690．15000．304598．42．49260．15580．15000．304499．12．50070．15630．15000．301997．12．50820．15680．15000．303898．02．51910．15740．15000．304197．898．30．8

2.9 样品测定

取6批槲寄生药材，分别粉成细粉，按前述2.2项下方法制备槲寄生供试品溶液，分别精密吸取前述2.3项下的对照品溶液与槲寄生药材供试品溶液各10 μL，按照前述2.1项下色谱条件进样测定，结果见表2.

表2 槲寄生药材测定结果

批号取样量/gN-桂皮酰基丁二胺的量/(mg·g-1)平均值/(mg·g-1)RSD/%201309015．05840．0659201309025．03360．0615201309034．94200．0641201309045．06110．0628201309054．99710．0631201309065．10740．06030．06252．4

3 讨 论

本实验采用了高效液相色谱法进行了N-桂皮酰基丁二胺的量测定，由于槲寄生生物碱类成分复杂，高效液相色谱测定干扰较多，因此本实验采用酸溶碱沉有机溶剂提取法提取纯化槲寄生总生物碱.

经紫外扫描N-桂皮酰基丁二胺在278 nm有最大吸收且干扰最小，因此本实验测定波长确定为278 nm.实验中发现磷酸溶液的酸度及用量对分离效果有较大影响，以乙腈-0.2%磷酸水为流动相，流动相比例为20∶80时，色谱峰分离效果较好，峰形及相邻峰分离良好.

采用HPLC测定槲寄生药材中N-桂皮酰基丁二胺的量，对于评价槲寄生的质量具有较大意义，为槲寄生生物碱类的开发利用提供了科学依据.

[1] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典[M]. 北京: 化学工业出版社, 2010. 348.

[2] 张水仙,刘 越,孙洪波,等.槲寄生化学成分及药理作用研究进展[J].中药材, 2011, 34(12): 1962-1967.

[3] 彭海燕, 章永红, 韩 英, 等. 槲寄生碱抗肿瘤作用的研究[J]. 中国中药杂志, 2005, 30(5): 381-382.

[4] 孙永慧, 凌 勇, 张 嵩, 等. 不同寄主红果槲寄生中总生物碱的含量测定[J]. 中医药信息, 2009, 26(3): 15-16.

[5] 孙永慧, 凌 勇, 任美荣, 等. 红果槲寄生的化学成分研究[J].中草药, 2010, 41(9): 1418- 1420.

Determination of N-cinnamoyl putrescine in Viscum coloratum (Kom.) Nakai by HPLC

SUN Yong-hui, LANG Yue, ZHANG Ying

(Academy of Chinese Medicine, Heilongjiang University of Traditional Chinese Medicine, Harbin 150040, China)

An assay method was established for the determination of N-cinnamoyl putrescine in Viscum coloratum (Kom.) Nakai by HPLC. DiamonsilTMC18analytical column (250 mm×5.6 mm, 5 μm) was used with a mobile phase of aceronitrile-0.2% H3PO4(20∶80). The flow rate was 1.0 mL/min. The detecting wavelength was at 278 nm. The column temperature was at 25 ℃. The linear range of N-cinnamoyl putrescine was 0.1～0.5 μg (r=0.999 8).The average recovery was 99.9%.RSD=1.80%. The method was accurate, simple, highly sensitive and reproducible. It can be used for the quality control of Visum coloratum (Kom.) Nakai.

Viscum coloratum (Kom.) Nakai; N-cinnamoyl putrescine; HPLC

2014-12-07.

黑龙江省教育厅科学技术研究项目(12531635)

孙永慧(1974-)，女，博士，副研究员，研究方向：中药质量标准及药效物质基础研究.

R284

A

1672-0946(2015)05-0530-03