郁李仁配方颗粒的质量标准研究Δ

晏小云（江阴天江药业有限公司，江苏江阴 214434）

郁李仁为蔷薇科植物欧李Prunus humilisBge.、郁李P.japonicaThunb.或长柄扁桃P.pedunculataMaxim.的干燥成熟种子，具有润燥滑肠、下气、利水之功效[1]。郁李仁中含有的苦杏仁苷为其主要药效成分，是临床常用的祛疲止咳剂和辅助性抗癌药物[2-4]。为有效控制郁李仁配方颗粒的质量，笔者参考原国家食品药品监督管理局《中药配方颗粒管理暂行规定》的相关要求，采用高效液相色谱（HPLC）法对郁李仁配方颗粒的质量标准进行了研究。

1 材料

1.1 仪器

1260型HPLC仪（美国Agilent公司）；REPROSTAR 3型薄层自动成像仪（瑞士CAMAG公司）；BS110S型万分之一天平（德国赛多利斯公司）；十万分之一电子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；KQ-250B型超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；硅胶G薄层板（20 cm×10 cm，青岛海洋化工厂）。

1.2 药品与试剂

郁李仁配方颗粒（江阴天江药业有限公司，批号：1210008、1207085、1202037、1110100、1107095、1101086、1009031、1003112、0907216）；苦杏仁苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号：1108020-201305，纯度＞98%）；其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 定性鉴别

取本品1.0 g，加甲醇20 ml，超声（功率：300 W，频率：50 kHz）处理20 min，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加水10 ml分散，用水饱和的正丁醇溶液萃取2次，每次15 ml，合并萃取液，蒸干，加1 ml甲醇使溶解，摇匀，作为供试品溶液。另取苦杏仁苷对照品适量，加甲醇制成每1 ml含5 mg苦杏仁苷的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱（TLC）法[2010年版《中国药典》（一部）附录VIB]试验，吸取上述两种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水溶液（3 ∶8 ∶5 ∶2，V/V/V/V）于10 ℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，立即喷以5%香草醛硫酸乙醇试液，于105 ℃烘箱中加热5～10 min，置于日光下检视。结果，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。TLC图见图1。

图1 薄层色谱图1～3.供试品；S.苦杏仁苷对照品Fig 1 TLC chromatograms1-3.test sample；S.amygdalin reference control

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱：GP-Phenyl（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-水（10 ∶90，V/V）；流速：0.8 ml/min；检测波长：210 nm；柱温：30 ℃；进样量：5 μl。理论板数按苦杏仁苷峰计算应不低于3 000；分离度＞1.5。高效液相色色谱见图2。

图2 高效液相色谱图A.对照品；B.供试品；C.阴性对照；1.苦杏仁苷Fig 2 HPLC chromatogramsA.control sample；B.test sample；C.negative control；1.amygdalin

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取苦杏仁苷对照品适量，加甲醇制成质量浓度为1.018 4 mg/ml的溶液，即得。

2.2.3 供试品溶液的制备 精密称取本品细粉约0.1 g，置于具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇溶液25 ml，称定质量，加热回流提取30 min，放冷，再次精密称定，加稀乙醇溶液补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.4 线性关系考察 分别精密吸取“2.2.2”项下对照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 ml于10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度。按“2.2.1”项下色谱条件分别进样5 μl，记录峰面积。以峰面积（y）为纵坐标、质量浓度（x，μg/ml）为横坐标，进行线性回归，得回归方程为：y＝5.390 6x+41.788（r＝0.999 8）。结果表明，苦杏仁苷的质量浓度在50.92～611.04 μg/ml范围内与其峰面积积分值呈良好线性关系。

2.2.5 精密度试验 精密吸取“2.2.2”项下对照品溶液3.0 ml于10 ml量瓶中，加甲醇定容，按“2.2.1”项下色谱条件连续进样6次。结果RSD＝0.22%，表明仪器精密度良好。

2.2.6 稳定性试验 取供试品溶液适量，分别于放置0、2、4、8、12、24 h时按“2.2.1”项下色谱条件进样测定。结果RSD＝0.87%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.2.7 重复性试验 取郁李仁配方颗粒（批号：1210008）适量，按“2.2.3”项下方法平行制备6份供试品溶液，再按“2.2.1”项下色谱条件进样测定。结果苦杏仁苷的平均质量分数为4.89%，RSD＝2.08%，表明本方法重复性良好。

2.2.8 加样回收率试验 精密称取已知含量的本品粉末（批号：1210008）0.05 g，共6份，分别精密加入苦杏仁苷对照品各适量，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，再按“2.2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积，计算加样回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果（n＝6）Tab 1 Results of recovery tests（n＝6）

2.2.9 样品含量测定 取9批郁李仁配方颗粒样品，按“2.2.3”项下方法制备供试品溶液，测定峰面积，重复2次，计算苦杏仁苷的质量分数，结果见表2。根据实验结果，规定本品按干燥品计算，含苦杏仁苷（C20H27NO11）不得少于1.5%。

表2 样品含量测定结果（n＝2）Tab 2 Results of content determination of samples（n＝2）

3 讨论

预试验中，笔者采用2010年版《中国药典》（一部）中郁李仁的TLC鉴别方法：用甲醇超声提取后，将滤液蒸干，再用甲醇溶解制备供试品溶液，以磷钼酸溶液为显色剂。结果该方法斑点拖尾严重，分离度差，斑点显色不清晰。而本研究所采用的方法斑点清晰、分离度好[1，5-6]。

在研究郁李仁配方颗粒的含量测定方法中发现，采用文献方法或者2010年版《中国药典》苦杏仁苷的含量测定项下的色谱条件[以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-水（12 ∶88，V/V）为流动相，检测波长为210 nm]，苦杏仁苷峰与另一未知峰难以分离；而采用本试验的色谱条件，苦杏仁苷峰与另一未知峰能达到基线分离，峰形可得到明显改善[1，7-8]。

笔者还比较了超声和回流两种提取方式对苦杏仁苷含量的影响，结果发现回流提取效率更高，因此本研究选用了回流提取的方式。此外，笔者还考察了水、30%甲醇、50%甲醇、70%甲醇、甲醇、30%乙醇、稀乙醇、70%乙醇和乙醇等9种溶剂对苦杏仁苷的提取效率，结果发现稀乙醇提取效果最好、苦杏仁苷的含量最高，因此最终选择稀乙醇为提取溶剂。

综上所述，该方法操作简单、灵敏、专属性强、重复性好，可作为郁李仁配方颗粒的质量控制方法。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：209.

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