苦荞黄酮提取物对2型糖尿病模型大鼠血糖与血脂的影响Δ

刘薇芝，刘 巍，胡汉昆，郑 艳，田 晗（.武汉大学中南医院，武汉 43007；.中南民族大学药学院，武汉 43007）

糖尿病（Diabetes mellitus，DM）是一组代谢性临床综合征。依据第17届国际糖尿病大会报道，全球已确诊1.5亿患者，预测到2025年该数目将增至3亿，其中2型糖尿病（T2DM）占90%以上，并且呈现逐年上升趋势[1-2]。苦荞[Fagopyrum tataricum（linn）Gaertn]又名鞑靼荞，是荞麦的一个栽培品种，属于双子叶蓼科荞麦属，为一年生草本植物。苦荞具有防治心脑血管硬化、促进消化吸收、增强机体免疫力的作用。研究表明，苦荞对糖尿病有较好的疗效，而苦荞黄酮是其主要的药效成分之一[3]。本研究采用链脲佐菌素（STZ）联合高脂高糖饮食复制大鼠2型糖尿病模型[4-5]，采用空腹血糖、葡萄糖耐量、血清胰岛素（INS）、甘油三酯（TG）以及总胆固醇（TC）多个指标，综合评价苦荞黄酮提取物对2型糖尿病模型大鼠的治疗作用，为苦荞黄酮提取物治疗2型糖尿病的临床应用提供科学依据。

1 材料

1.1 仪器

AG 5804R22331 型聚合酶链反应（PCR）仪（德国Eppendorf公司）；稳豪型血糖仪（美国强生公司）；TGL-20B型高速冷冻离心机（上海安亭科学仪器厂）；InfiniteM200型多功能酶标仪（德国Tecan公司）。

1.2 药品与试剂

STZ（美国Sigma公司，批号：S0130，规格：1 g/瓶）；苦荞黄酮提取物（西安塞纳生物技术有限公司，批号：20130105，纯度：70%）；盐酸二甲双胍片（北京中惠药业有限公司，批号：20120504，规格：0.25 g/片）；TG 试剂盒（批号：20121105）、TC试剂盒（批号：20121010）、INS试剂盒（批号：20121112）均购自北京北化康泰临床试剂有限公司。

1.3 动物

2 方法

2.1 复制模型与分组、给药

以高糖饮用水（12%果糖水，即将120 g果糖溶于1 000 ml蒸馏水中）与高脂饲料喂养大鼠[4]，2 周后一次性ip 给予STZ（30 mg/kg）以复制大鼠2型糖尿病模型；正常对照组大鼠ip给予等容柠檬酸钠-柠檬酸缓冲液。复制模型72 h后，大鼠尾静脉取血检测，血糖值＞16.7 mmol/L 为复制模型成功[2]。60 只SD 大鼠随机均分为6 组，即正常对照（等容生理氯化钠溶液）组、模型（等容生理氯化钠溶液）组、二甲双胍（300 mg/kg）组与苦荞黄酮提取物高、中、低剂量（1 000、500、250 mg/kg）组，ig给药，每天1次，连续4周。给药剂量依据参考文献[7]。

2.2 大鼠空腹血糖值与糖耐量检测[6]

给药7、14、21、28 d时检测大鼠空腹血糖：每次测定前，大鼠禁食12 h，尾静脉采血，采用血糖仪测定其空腹血糖。给药28 d 后，同上禁食处理，大鼠ig 给予葡萄糖（2 000 mg/kg），测定糖负荷后15、30、60、120 min 各时间点的血糖值，绘制口服糖耐量实验的时间-血糖曲线，计算时间-血糖的曲线下面积（AUCG）。

2.3 大鼠血浆TC、TG与血清INS的检测

末次给药后，大鼠ip 给予0.3%戊巴比妥钠（10 ml/kg）麻醉，随后摘眼球取血。部分全血以离心半径为10 cm、3 500 r/min 离心15 min，获取血清，按试剂盒说明书检测大鼠血清INS 水平。部分全血以乙二胺四乙酸盐（EDTA）抗凝，4 ℃下静置20 min 后，以离心半径为10 cm、1 500 r/min 离心15 min，获取血浆，按试剂盒说明书检测TC和TG水平。

2.4 统计学方法

3 结果

3.1 各组大鼠空腹血糖值的检测结果

与正常对照组比较，在复制模型后第7、14、21、28 天时模型组大鼠空腹血糖值升高，差异有统计学意义（P＜0.01）。与模型组比较，二甲双胍组与苦荞黄酮提取物高、中、低剂量组大鼠空腹血糖值降低，差异有统计学意义（P＜0.01），结果见表1。

表1 各组大鼠空腹血糖值的检测结果（，n＝10）Tab 1 Fasting blood glucose results of rats in each group（，n＝10）

表1 各组大鼠空腹血糖值的检测结果（，n＝10）Tab 1 Fasting blood glucose results of rats in each group（，n＝10）

注：与正常对照组比较，＊P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.01Note：vs.normal control group，＊P＜0.01；vs.model group，#P＜0.01

3.2 各组大鼠糖耐量的检测结果

通过时间-血糖曲线并计算AUCG。与正常对照组比较，模型组大鼠AUCG 增加，差异有统计学意义（P＜0.01）。与模型组比较，二甲双胍组与苦荞黄酮提取物高、中、低剂量组大鼠AUCG减少，差异有统计学意义（P＜0.01或P＜0.05）。各组大鼠糖耐量实验的时间-血糖曲线见图1，AUCG结果见表2。

图1 各组大鼠糖耐量实验的时间-血糖曲线（n＝10）Fig 1 The glucose blood-time curve of rats’glucose tolerance in each group（n＝10）

表2 各组大鼠AUCG、血浆TC、TG 与血清INS 水平的检测结果（，n＝10）Tab 2 Results of AUCG，serum insulin，serum triglyceride and total cholesterol of rats in each group（，n＝10）

表2 各组大鼠AUCG、血浆TC、TG 与血清INS 水平的检测结果（，n＝10）Tab 2 Results of AUCG，serum insulin，serum triglyceride and total cholesterol of rats in each group（，n＝10）

注：与正常对照组比较，＊P＜0.01；与模型组比较，#P＜0.05，##P＜0.01Note：vs.normal control group，＊P＜0.01；vs.model group，#P＜0.05，##P＜0.01

3.3 各组大鼠血浆TC、TG与血清INS的检测结果

与正常对照组比较，模型组大鼠血浆TC、TG含量增加，血清INS 活性增强，差异有统计学意义（P＜0.01）。与模型组比较，二甲双胍组与苦荞黄酮提取物高、中、低剂量组大鼠血浆TC、TG含量减少，血清INS活性减弱，差异有统计学意义（P＜0.01），结果见表2。

4 讨论

本研究采用空腹血糖水平、葡萄糖耐量、血清INS 及血浆TC、TG等多个指标综合评价苦荞黄酮提取物对STZ联合高脂高糖复制2型糖尿病模型大鼠的保护作用，从而对苦荞黄酮提取物对2 型糖尿病的治疗效果提出科学的参考依据。空腹血糖与葡萄糖耐量是临床上的重要及常用的指标，反映机体胰岛B 细胞的功能，代表着基础胰岛素的分泌能力[8]。另外，监测INS水平是临床上诊断糖尿病的重要可靠方法，也是反映胰岛B细胞分泌功能的重要指标。流行病学调查提示，随着中国社会人口的老龄化及高脂高糖的不良饮食习惯，高脂高糖饮食是导致胰岛素抵抗和糖尿病发病的高度危险因素[9-10]。由于大部分2 型糖尿病患者同时具有葡萄糖以及脂质代谢紊乱等病变，因此对TG 以及TC 的检测可较好地反映苦荞黄酮提取物的治疗效果。

本研究从多个角度综合分析苦荞黄酮提取物对STZ联合高脂高糖饮食复制的2型糖尿病模型大鼠的保护作用，结果显示苦荞黄酮提取物可明显下调模型大鼠的空腹血糖水平、葡萄糖耐量、血清INS 水平及血浆TG、TC 水平。因此本研究可为苦荞黄酮提取物对2型糖尿病的治疗提供实验依据。

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