血站实验室梅毒抗体酶联免疫吸附测定检测试剂的评价及应用

隋丽丽，张　微,李琳琳，李天君

(北京市通州区中心血站，北京 101100)



血站实验室梅毒抗体酶联免疫吸附测定检测试剂的评价及应用

隋丽丽，张微,李琳琳，李天君※

(北京市通州区中心血站，北京 101100)

摘要：目的对本血站实验室两种梅毒抗体筛查酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂进行比较和评价。方法选择2013年12月至2014年3月北京市符合《献血者健康检查要求》(GB18467-2001)的无偿献血者血液标本17 963例，进行梅毒抗体的ELISA筛查和梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA) 确证。结果17 963例无偿献血者标本中，107例血样呈ELISA法梅毒抗体反应性，反应性率为0.6%，TPPA确认反应性为83例，反应性率为0.5%，在本血站检验判断规则下，梅毒抗体ELISA检测灵敏度为100.0%，特异度为99.9%；其中两种ELISA试剂均呈反应性的为88例，灵敏度为98.8%，特异度为100.0%。103例金豪ELISA试剂检测反应性的标本中TPPA确认反应性数为82份，灵敏度为98.8%，特异度为100.0%，漏诊率为1.2%；92例万泰试剂检测反应性的标本，确认反应性为83份，灵敏度为100.0%，特异度为99.9%，漏诊率为0.0%。结论ELISA方法单一种试剂梅毒抗体反应性假阳性率高，建议相应血液报废，献血者进行归队允许再次献血。

关键词：献血者；梅毒抗体；真阳性率

目前全世界梅毒发病率在逐渐增加，我国近年来发病率也在上升[1-4]。梅毒螺旋体是我国采供血机构血液采集后病毒筛查中的一项，采供血机构的检测目的是防止输血传播性疾病的发生，人类免疫缺陷病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、梅毒螺旋体4项经血传播病原体的感染标志物分别经过两种不同厂家试剂筛查后[5]，任一反应性即对血液进行报废，相应献血者终身不能再次献血。而酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)由于检测结果影响因素较多，同时不同厂家试剂的性能存在差异,检验结果存在一定的假阳性率[6-8]，不仅造成宝贵的血液及血源浪费,也对告知献血者准确的检测结果造成障碍。为评诂本实验室梅毒筛查实验的可靠性及相应献血者归队的风险，本研究对17 963 例献血者标本进行了梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(Treponema pallidum particle agglutination test,TPPA)确证[9-11]。

1材料与方法

1.1标本来源选择2013年12月至2014年3月北京市符合《献血者健康检查要求》(GB18467-2001)的无偿献血者年龄18～55岁的血液标本17 963 例。

1.2仪器与试剂 Microlab Star全自动加样仪(瑞士HAMILTON)、FAME24/30全自动酶免分析系统(瑞士HAMILTON)、TP-ELISA试剂盒[北京金豪制药股份有限公司(JH)，批号：2013071018；北京万泰生物药业股份有限公司(WT)，批号：N20131116]、TPPA试剂盒(日本富士瑞必欧株式会社，批号：VN30918)，试剂均在规定有效期内使用。

1.3方法用ELISA两种试剂及TPPA试剂对17 963例无偿献血者标本进行梅毒抗体检测，实验步骤及结果判断均严格按照试剂盒说明书操作。首先用ELISA两种试剂进行检测(初检)，任一或两种试剂检测反应性的标本再进行相应试剂的双孔复检(复检)，初复检两次检测结果均为反应性的标本判定为试验结果反应性。同时对17 963例标本进行TPPA确证。灵敏度=真阳性例数/(真阳性+假阳性)例数×100%；特异度=真阴性例数/(假阳性+真阴性)例数×100%。

2结果

2.1无偿献血者梅毒抗体ELISA、TPPA两种方法检测结果对比ELISA检测梅毒抗体反应性的107例标本中，83例被TPPA确证为真阳性，灵敏度为100.0%(83/83)，特异度为99.9%(17856/17880)，见表1。

表1　无偿献血者梅毒抗体ELISA、TPPA

ELISA：酶联免疫吸附测定；TPPA：梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验

2.2107例TP-ELISA反应性标本TPPA确认试验结果17 963 例献血者标本中，107例ELISA判断为梅毒抗体反应性的标本，共有103例金豪ELISA试剂检测反应性的标本，其中TPPA确认反应性数为82份，灵敏度为98.8%，特异度为100.0%，漏诊率为1.2%；92例万泰试剂检测反应性的标本，确认反应性为83份，灵敏度为100.0%，特异度为99.9%，漏诊率为0.0%。单一试剂阳性的样本假阳性率分别达到0.2%(JH-/WT+)、0.1%(JH+/WT-)。见表2。

表2　不同情况下TP-ELISA反应性标本TPPA确认试验灵敏度、特异度结果

ELISA：酶联免疫吸附测定；TPPA：梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验

3讨论

目前梅毒诊断的常用方法主要是梅毒血清学检测,主要包括ELISA、TPPA、甲苯胺红不加热血清试验等。采供血机构需要对血液进行大批量筛查，ELISA方法由于实验操作及结果判读的容易实现自动化,有利于大批量样本的检测和结果追溯，所以广泛应用于血站。

本研究针对梅毒抗体，使用两种双抗原夹心法ELISA试剂筛查了17 963例无偿献血者标本，并同时进行了TPPA确认试验。本血站实验室结果判断规则为一种试剂或两种试剂重复两次检测均反应性的标本判断为反应性标本。采供血机构的传染病源筛查原则与医疗机构有所不同，采供血机构以防止供给临床有输血传播疾病的血液为检验原则，所以试剂应用上优先选择灵敏度高的试剂。本研究结果显示，两种ELISA试剂同时应用检测灵敏度达100.0%，梅毒抗体ELISA检测未出现漏检现象。本研究中两种ELISA试剂的灵敏度是符合血站梅毒抗体筛查要求的，提示选择试剂时应严格评估试剂性能。血液筛查试剂的灵敏度高，而特异性相对较低会导致一些血液传染病标志物假阳性的献血者被永久屏蔽，无法再次献血。制订合理的献血者归队的规则对防止这部分献血人群的流失有积极意义。

综上所述，单一试剂梅毒抗体呈反应性的标本有一定的假阳性率，允许单一ELISA试剂梅毒检测反应性的献血者归队[12-14]是比较合理的。目前大部分血站未对检测结果进行确证，容易造成血源的浪费，本研究也提示加快血站的建设，引入确证试验对献血者结果的告之以及避免血液和血源的浪费具有重要意义。

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Evaluation and Application of Syphilis Antibody Enzyme-linked Immunosorbent Assay Reagents in Blood Station LaboratorySUILi-li,ZHANGWei,LILin-lin,LITian-jun.(CentralBloodStationofTongzhouinBeijing，Beijing101100,China)

Abstract:ObjectiveTo compare and evaluate two syphilis antibody screening enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) kits used in the blood station laboratory.MethodsTotal of 17 963 cases blood donors′ samples with the "donor health inspection requirements" (GB18467-2001) from Dec.2013 to Mar.2014 in Beijing were included，the syphilis antibody ELISA screening and Treponema pallidum particle agglutination(TPPA) test were done.ResultsAmong the 17 963 samples,107 blood samples showed ELISA syphilis antibody reaction,the reactive rate was 0.6%,TPPA confirmed 83 samples were reactive,the reactive rate was 0.5%,according to the rules of blood station laboratory,sensitivity of syphilis antibody ELISA was 100.0%,specificity was 99.9%.TPPA confirmed reaction number of 103 patients with Jinhao ELISA kit was 82,the sensitivity was 98.8%,the specificity was 100.0%,misdiagnosis rate was 1.2%; confirmed reaction number of 92 Wantai reagent tested sampleswas 83 cases,the sensitivity was 100%,specificity of 99.9%,misdiagnosis rate was 0.0%.ConclusionIt can be seen from the results of ELISA method of single reagent for syphilis antibody reactivity has high false positive rate,it′s suggested that the corresponding blood being scrapped,and the blood donors should be allowed to donate blood again.

Key words:Blood donors; Syphilis antibody; True positive rate

收稿日期：2015-02-11修回日期：2015-07-07编辑：伊姗

基金项目：北京市科技工作基础专项(2013004)

doi：10.3969/j.issn.1006-2084.2015.19.061

中图分类号：R446.61

文献标识码：A

文章编号：1006-2084(2015)19-3621-02