活疫苗用于小反刍兽疫防控的安全性评价试验

杨鲜银

(湖南省洞口县高沙镇动物防疫站,湖南洞口 422312)

活疫苗用于小反刍兽疫防控的安全性评价试验

杨鲜银

(湖南省洞口县高沙镇动物防疫站,湖南洞口 422312)

2014年3月11日，湖南省邵阳市洞口县某乡镇某村部分养殖户饲养的羊出现疑似小反刍兽疫症状，发病羊360只，其中死亡234只。3月24日，湖南省动物疫病预防控制中心诊断为疑似小反刍兽疫疫情。3月25日，经国家外来动物疫病研究中心确诊，该起疫情为小反刍兽疫疫情。对剩余126只病羊及同群羊进行扑杀和无害化处理。此病目前尚无有效治疗方法，主要通过早期诊断和疫苗免疫进行控制。结合国内新疆、西藏等地疫苗接种防控经验，遴选三批次小反刍兽疫活疫苗做接种试验，试验疫苗均由新疆天康畜牧生物技术股份有限公司生产，探究疫苗用于本地接种的安全性评价，是否适合本地此病防疫的大面积应用。经比较试验，所有接种动物均存活。结果表明，该疫苗安全性良好，可在民间大规模使用。

小反刍兽疫免疫接种试验

小反刍兽疫（PPR）又名小反刍兽假性牛瘟，是由小反刍兽疫病毒引起的一种急性、烈性、接触性传染病，易感群发病率高达100%，严重暴发时，死亡率达100%。自2014年起，湖南多地有小反刍兽疫疫情报道，多家畜牧批发市场由此纷纷歇业，严重影响本地畜牧产业健康可持续发展。据农业部通报，目前中国有新疆、西藏、甘肃、宁夏、四川、山东、辽宁、江西、江苏和安徽等省市，以及湖南邵阳市、湘潭市等地发生（或监测到）小反刍兽疫。因此，湖南省将继续执行活羊限制移动措施，关闭所有活羊交易市场，暂停活羊交易。

目前，该病尚无有效治疗方法，主要通过早期诊断和疫苗免疫进行控制。结合国内新疆、西藏等地疫苗接种防控经验，遴选3批次小反刍兽疫活疫苗做接种试验，试验疫苗均由新疆天康畜牧生物技术股份有限公司生产，探究疫苗用于本地接种的安全性评价，是否适合本地此病防疫的大面积应用。

1 实验设计

1.1 实验材料

接种疫苗：2007006、2007007、2007008三批小反刍兽活疫苗。

试验动物：小白鼠、豚鼠，从长沙市某专业公司自繁自养健康动物室购买；

5～18月龄山羊，怀孕3个月左右的湘东黑山羊、马头山羊，由地方规模养殖场提供。试验前，采血测定体内PPRV中和抗体效价，比较遴选抗体效价1：4之下的羊做试验。

1.2 试验方法及过程

1.2.1 检验疫苗

取3批次疫苗，分别按农业部有关中小反刍兽疫活疫苗接种的质量标准，进行动物体检测试验分析。遴选质量检验合格的疫苗，进行安全性试验。

1.2.2 单剂量和超剂量安全性试验

取检疫阴性健畜湘东黑山羊、马头山羊各5只，3批次疫苗按照使用说明分别稀释。2007006接种剂量：1头份/只；2007007接种剂量：10头份/只；2007008接种剂量100头份/只，统一颈部皮下接种。接种后，每日测定统计羊只体温，连续观察2周，详细记录临床反应。

1.2.3 单剂量和超剂量重复接种安全性试验

取检疫阴性健畜湘东黑山羊、马头山羊各5只，3批次疫苗按照使用说明分别稀释，2007006接种剂量：1头份/只；2007007接种剂量：10头份/只；2007008接种剂量100头份/只，统一颈部皮下接种。接种后间隔2周，按照相同剂量接种分别接种1次。每日测定统计羊只体温，连续观察2周，详细记录临床反应。

1.2.4 疫苗对怀孕羊的单剂量和超剂量安全性试验

健畜湘东黑山羊、马头山羊各5只，3批次疫苗任选2007006型号，参照1头份/只、10头份/只、100头份/只的剂量，统一颈部皮下接种。接种后，每日测定统计羊只体温，连续观察2周，详细记录临床反应。同时，安排不免疫的对照怀孕山羊、怀孕绵羊同样5只。比较有无接种，母羊流产、死胎等症状，同时详计产羔数，做比较试验。

1.2.5 疫苗对试验动物安全性接种试验

与2.2.4同等型号的疫苗，与无血清MEM细胞培养液稀释，调配成含100头份/ml的注射溶剂。遴选6只体重在200～250g的豚鼠，2只肌肉注射，0.5ml/只；2只腹腔注射，0.5ml/只；2只不接种，仅作对照试验。2周为观察周期，做数据统计。遴选8只体重在18～22g的小白鼠，5只腹腔注射，0.1ml/只；5只不接种，仅作对照试验。2周为观察周期，做数据统计。

2 实验结果分析

2.1 疫苗检验效果分析

接种疫苗用于安全评价性试验之前，首先做检验效果分析。取3批次疫苗分别按农业部有关中小反刍兽疫活疫苗接种的质量标准，进行动物体检测试验分析。

表1 疫苗质量检测效果

从表1的数据可以看出，3批次疫苗安全检验病毒含量分别为104.9TCID50/头份、104.1TCID50/头份、104.8TCID50/头份，效力检验均≥1：25。由此可见，3批疫苗的质量检验均符合质量标准要求，可安全用于评价试验。

2.2 单剂量和超剂量安全性试验结果分析

经疫苗接种后，逐日观察接种湘东黑山羊、马头山羊的体温、临床症状，经连续2周不间断的观察分析，接种湘东黑山羊、马头山羊均未出现不良反应，所有接种湘东黑山羊、马头山羊精神状态良好、食欲正常，安全性良好。统计结果详见表2，图中记录温度曲线为接种5头羊的平均体温变化。

2.3 单剂量和超剂量重复性接种安全性试验结果分析

疫苗接种后14 d，按照相同剂量接种。相关数据以表格形式记录分析，详见表3。

从表3数据可以看出，仅马头山羊接种2007008100头份/只，在重复接种中出现一过性体温波动反应，其余接种湘东黑山羊、马头山羊均未出现不良反应。接下来的2周观察，几乎所有接种湘东黑山羊、马头山羊精神状态良好、食欲正常，安全性良好。统计结果汇总如下，图中记录温度曲线为接种5头羊的平均体温变化。

表2 单剂量和超剂量安全性试验结果分析

表3 单剂量和超剂量重复性接种安全性试验结果分析

2.4 安全性试验结果分析

表4 怀孕湘东黑山羊、马头山羊的安全性试验结果

随意取任意批号疫苗接种怀孕期母羊和山羊，接种后观察发现经接种怀孕期、马头山羊，均为发生流产、难产等繁殖类疾病。延长观察期，发现分娩后胎儿均显正常，未见畸形胎、死胎等等。在繁殖数量上，经对照也没有很大的变化。

2.5 试验动物安全性接种试验结果分析

对试验用小白鼠、豚鼠接种同等剂量疫苗，连续观察2周。经对照组和试验组比较，没有任何异常情况出现，由此可证实非特异性安全良好。

3 试验结果讨论

为明确疫苗的安全性能，本实验室根据《新兽药研制管理办法》、《兽用生物制品注册分类及注册资料要求》的有关规定，对疫苗的安全性进行了系统评价。

为全面评价疫苗的安全性，本研究选择了不同年龄、不同品种的羊进行特异性安全试验；同时选择小白鼠、豚鼠进行非特异性安全试验。特异性安全试验结果表明，按l头份、10头份、100头份单次和重复接种健康易感湘东黑山羊、马头山羊，均未观察到异常临床反应；按同样剂量接种怀孕湘东黑山羊、马头山羊，接种后怀孕母羊未发生流产、死胎等异常临床反应；所产羔羊数量与对照无明显差异。非特异性安全试验结果表明，按10头份接种小白鼠，按50头份接种豚鼠，所有接种动物均未观察到异常临床症状。

4 建议

做好当前小反刍兽疫防控工作，基层防疫单位必须要认清形势，及时做好疫苗接种工作，防控于未然。经试验证实，选择的三批次疫苗用于基层小反刍兽疫防控安全性较好，可批量推广应用。在接种过程中，应该注意影响接种效力的其他安全因素，像是接种群体健康程度；疫苗装瓶有无破损；用前注意预热和摇匀；注射器、针头及其他稀释用具在用前应严格消毒；经稀释后避光阴凉保存；接种后有无应激反应等等，真真切切将接种效力发挥到最大。

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