HPLC法测定肠内营养乳剂中烟酰胺的含量

王 培，覃婷婷，白海娇

(天津市药品检验所，天津 300070)



HPLC法测定肠内营养乳剂中烟酰胺的含量

王 培，覃婷婷，白海娇

(天津市药品检验所，天津 300070)

目的：建立肠内营养乳剂中烟酰胺的含量测定方法。方法：采用Shodex RSpak DE-613色谱柱，以0.12 mmol/L磷酸溶液为流动相，流速：0.95 ml/min，检测波长：261 nm。结果：烟酰胺在1.0～3.5 μg/ml的浓度范围内和峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 8)。结论：本方法操作简单、灵敏度高、重现性好，可用于肠内营养乳剂中烟酰胺的含量测定。

肠内营养乳剂，烟酰胺，HPLC法，含量测定

肠内营养乳剂是由蛋白质、脂肪、碳水化合物、维生素、电解质和微量元素等组成的复方制剂，口服或管饲经胃肠道提供代谢所需营养物质，现已成为临床一项重要的治疗措施[1]，烟酰胺是烟酸的酰胺形式，参与氧化还原反应、干预能量代谢等生理过程，在维持细胞的正常生命活动中发挥重要作用，具有DNA修复、延缓衰老等方面的药理作用[2]。由于制剂中烟酰胺含量很低(约为2.50 mg/100 ml)，其他成分干扰其检测，现行标准未对烟酰胺的含量进行控制。本研究使用蛋白质酶解的方法，解决了样品中蛋白质对检测的干扰，再采用HPLC法以聚甲基丙烯酸酯为填充剂的色谱柱使样品中的烟酰胺与其他成分进行有效分离。

1 仪器与试药

岛津LC-20A高效液相色谱仪；Sartorius PB-10 pH计；DN 44干燥箱；0.2 μm 膜过滤器。烟酰胺对照品(日本药局方标准品，批号NI0313)；Nˊ-甲基烟酰胺(TCI，批号PCX01-RPGF，>98.0%)；蛋白分解酶(日本科研制药株式会社，1百万单位/g)；其他试剂均为分析纯。肠内营养乳剂(日本EN大冢制药株式会社，批号T1204161、T1204162、T1204163)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Shodex RSpak DE-613(6.0 mm×150 mm，5 μm)；流动相：0.12 mmol/L磷酸溶；流速：0.95 ml/min；柱温：50 ℃；检测波长：261 nm；进样量：40 μl。

2.2 溶液的制备

2.2.1 供试品溶液的制备 精密量取本品5 ml，加入蛋白分解酶溶液(1→5 000)0.5 ml，混匀，40 ℃下静置30 min，用高氯酸溶液(1→500)调pH至4.5，静置15 min后转移至50 ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度。用0.2 μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取烟酰胺对照品适量，加水溶解并稀释制成每1 ml中约含500 μg的溶液，精密量取5 ml，置100 ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，再精密量取上述溶液5 ml,置50 ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，作为对照溶液。

2.2.3 空白溶液的制备 按照处方称取除烟酰胺外的其他成分，照“2.2.1”项下样品溶液的制备方法制备空白样品溶液。

2.3 专属性试验 精密量取上述对照品溶液、供试品溶液和空白溶液进样分析，结果见图1。供试品溶液中烟酰胺色谱峰的保留时间为16.1 min，空白样品溶液在烟酰胺色谱峰附近没有干扰峰出现。

1.烟酰胺

2.4 线性试验 精密称取烟酰胺对照品50.07 mg置100 ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，再精密量取5 ml置100 ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，作为对照品浓溶液，分别量取2.0、3.0、4.0、5.0、6.0和7.0 ml置50 ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，制成6个浓度(1.0～ 3.5 μg/ml)的对照品溶液。照“2.1”项下色谱条件进样分析，记录色谱图。以峰面积Y为纵坐标，浓度X为横坐标，进行线性回归，线性方程为Y=65 031X-1 984(r=0.999 8)，结果表明在1.0～3.5 μg/ml浓度范围内烟酰胺浓度和峰面积呈良好的线性关系。

2.5 加样回收试验 精密量取批号为T1204161的样品2 ml，分别加入浓度为25 μg/ml的对照溶液2、3和4 ml，照“2.2.1”项下方法制备样品溶液，每份样品含烟酰胺的量分别为测定量的80%、100%和120%，照“2.1”项下色谱条件进样分析，每份样品测定3次。结果见表1。

表1 加样回收试验结果

2.6 精密度试验 取对照溶液，连续进样6次，记录烟酰胺色谱峰面积，RSD为0.3%，表明分析结果精密度良好。

2.7 系统适用性试验 精密称取Nˊ-甲基烟酰胺和烟酰胺对照品适量，照“2.2.2”项下对照品溶液的制

备方法配制对照品混合溶液。结果Nˊ-甲基烟酰胺和烟酰胺的分离度为7.6，见图2。

1.烟酰胺 2.Nˊ-甲基烟酰胺

2.8 样品含量测定 取3批样品，照“2.2.1”项下的方法制备，进样分析，记录色谱图，结果见表2。

表2 3批样品的含量

3 讨论

3.1 本试验烟酰胺含量的测定浓度较低(约为2.5 μg/ml)，本产品的成分比较复杂，除烟酰胺外还包含其他27种成分，可能是造成加样回收试验回收率偏低的原因。

3.2 《中国药典》2010年版收载了烟酰胺原料[3]及其制剂[4]的质量标准，分别采用非水溶液滴定法和紫外-可见分光光度法测定。肠内营养乳剂是多组分的复方制剂，样品的制备过程中加入蛋白分解酶和高氯酸除去样品中的蛋白质和脂肪，进而采用HPLC法测定烟酰胺。本方法操作简单，灵敏度高，重现性好，可用于肠内营养乳剂中烟酰胺的含量测定。

1 杨爱霞,方彩飞.我院肠内营养药物使用分析[J].中国药师,2012,15(10):1493-1494

2 杨驰,郑咏秋,戴敏.烟酰胺药理作用研究进展[J].临床肺科杂质,2011,16(12):1914-1915

3 中国药典[S].二部. 2010:856

4 中国药典[S].二部. 2010:857

2014-12-10

R927.2

A

1006-5687(2015)02-0027-02