HPLC法测定健胃乐合剂中槲皮素含量

李维超，张 囡，陈贵起

(天津市儿童医院 天津 300074)



HPLC法测定健胃乐合剂中槲皮素含量

李维超，张 囡，陈贵起

(天津市儿童医院 天津 300074)

目的：建立高效液相色谱法测定健胃乐合剂中槲皮素含量。方法：色谱柱：C18(Shim-pack VP-ODS，150 mm×4.6 mm,5 μm)，流动相：0.4%磷酸-乙腈(75∶25)，流速1 ml/min，检测波长256 nm。结果：槲皮素在4.016～40.16 μg/ml浓度范围内进样具有良好的线性关系(r=0.999 8),平均加样回收率98.84%，RSD为0.77%(n=9)。结论：该方法简便灵敏准确，重复性良好，可用于控制健胃乐合剂的质量。

健胃乐合剂，槲皮素，高效液相色谱法，含量测定

健胃乐合剂为本院传统制剂，主要成分为腊梅花，具有增加食欲及肌体免疫力的功效，临床用于小儿厌食症等。槲皮素是一种具有多种生物活性的黄酮类化合物，具有免疫调节的作用[1]。为了提升健胃乐的制剂质量标准，本试验采用HPLC法对制剂中腊梅花的槲皮素含量进行定量测定。

1 仪器与试药

1.1 仪器 LC-2010A高效液相色谱仪(日本岛津公司)，紫外检测器，Lcsolution工作站(日本岛津公司)，FE20K酸度计(梅特勒-托利多公司)，XS型分析天平(梅特勒-托利多公司)。

1.2 试药 槲皮素对照品(中国食品药品检定研究院提供，批号100081-200907)，甲醇、乙腈和磷酸均为色谱纯，健胃乐合剂(本院制剂室提供，批号20120201、20120202、20120301，每1 000 ml含腊梅花100 g、蜂蜜250 ml和5%羟苯乙酯溶液8.9 ml)，纯化水(本院制剂室自制)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：C18(Shim-pack VP-ODS，150 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：0.4%磷酸-乙腈(75∶25)；柱温：30 ℃；流速：1 ml/min；检测波长：256 nm；进样量：10 μl。

2.2 溶液配制

2.2.1 对照品溶液 精密称取槲皮素对照品5.02 mg，置25 ml量瓶中，加甲醇20 ml，超声5 min使溶解，取出，稀释至刻度，再精密量取5 ml溶于25 ml量瓶，混匀，备用。

2.2.2 供试品溶液 精密量取健胃乐合剂2 ml，置100 ml量瓶中，加水稀释至100 ml，备用。

2.2.3 阴性对照溶液 按照处方比例，称取除腊梅花的其他辅料，加水制成阴性对照溶液。

2.3 系统适用性试验 分别取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液10 μl，依“2.1”项下色谱条件进样，样品主峰的保留时间与对照品主峰的保留时间一致，约为3.44 min。主药和其他杂质峰的分离度大于1.5，空白辅料对样品测定无干扰，色谱图见图1。

1.槲皮素

2.4 线性关系考查 精密量取“2.2.1”项下对照品溶液1、2、4、6、8和10 ml分别置于10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成4.016、8.032、16.064、24.096、32.128和40.16 μg/ml的系列溶液，分别进样测定其峰面积。以槲皮素对照品峰面积积分值为纵坐标Y，进样浓度X(μg/ml)为横坐标，进行线性回归，槲皮素的回归方程为:Y=35 885.41X-1446.98(r=0.999 8)，其结果表明槲皮素在4.016～40.16 μg/ml浓度范围内进样，浓度与峰面积呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验 取“2.2.1”项下对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件下重复进样6次。结果测得槲皮素平均峰面积为359 868.70，RSD为1.12%。

2.6 重现性试验 取同一批制剂(批号20120301)5份，按“2.2.2”项下配制供试品溶液，分别按“2.1”项下色谱条件进样测定，结果RSD为1.06%。

2.7稳定性试验 取同一供试品(批号20120301)，按“2.2.2”项下配制，在配制后0、2、4、8和12 h按“2.1”项下色谱条件各进样1次，共进样5次。结果供试品溶液在配制后12 h内槲皮素含量无明显变化，RSD为0.94%。

2.8 加样回收率试验 取槲皮素对照品的甲醇溶液3份(含槲皮素分别为0.100 64、0.125 8和0.150 96 mg/ml)适量，精密量取10 ml，共9份，分别置100 ml圆底烧瓶中，减压蒸干，分别精密加入同一批号(批号20120301)供试品2.5 ml，加水适量使溶解，并转移至100 ml量瓶中，加水至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，制得供加样回收试验用供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件分析测定，计算回收率，结果平均回收率为98.84%，RSD为0.77%。见表1。

表1 回收率试验结果(n=9)

2.9 样品含量测定 取3批样品(批号201200201、20120202、20120301)按“2.2.2”项下方法配制，按“2.1”项下色谱条件进行分析测定，槲皮素平均含量均大于0.3 mg/ml，结果见表2。

表2 样品含量测定结果

3 讨论

有文献报道[2]，甲醇-水的流动相条件下,柱压比较高,对色谱柱的损耗较大,并且色谱峰的分离度不好,且考虑到槲皮素有一定的脂溶性，故加入一定量的乙腈。选用不同比例，经多次实验筛选，发现采用0.4%磷酸-乙腈(75∶25)溶液系统作为流动相效果较理想，组分分离好，峰形对称，保留时间适宜。槲皮素在256 nm与370 nm波长处均有较大吸收，其中在256 nm处杂质干扰少，目标峰与其他相邻色谱峰分离度较好[3]，故选择256 nm做为测定波长。

以槲皮素为指标，通过测定其含量来控制健胃乐合剂的质量，方法精密度好、准确性高，具有较强的专属性，能够达到准确反映中药整体质量的要求。

1 宋玉乔，姚凌云，曹蔚，等. 槲皮素的药理作用研究近况[J]. 西北药学杂志，2002，17(1)：40-42

2 黄千，刘辉，李遇伯，等. HPLC法测定槐花中槲皮素的含量[J].天津药学，2007， 19(2)：10-11

3 周伟，蔡光明，黄鹤慧，等. 高效液相色谱法测定小叶黑柴胡中槲皮素与异鼠李素的含量[J].中国药房，2007,18(9)：693-694

Determination of quercetin in Jianweile mixture by HPLC

Li Weichao，Zhang Nan，Chen Guiqi

(Tianjin Children’s Hospital,Tianjin 300074)

Objective：To establish an HPLC method for the determination of quercetin in Jianweile mixure. Methods: HPLC method was performed on Shim-pack VP-ODS column with mobile phase consisting of 0.4% phosphate-acetonitrile (75∶25)，the flow rate of which was 1 ml/min. The detection wavelength was set at 256 nm and column temperature was at 30 ℃. Results：A good linear relations between the concentrations of quercetin and the peak areas over a rang of 4.016～40.16 μg/ml(r=0.999 8). The average recovery was 98.84% (RSD=0.77%，n=9). Conclusions：The method is simple，sensitive，accurate，reliable，and can be used as method for the quality control of Jianweile mixrure.

Jianweile mixrure，quercetin，HPLC， determination

2014-12-25

R927.2

A

1006-5687(2015)02-0019-03