气相色谱法测定止汗搽剂中苯酚和乙醇的含量

段和祥 程奇珍 杨毅生 王晓青

1.江西省药品检验检测研究院，江西省药品与医疗器械质量工程技术研究中心，江西南昌 330029；2.解放军总医院第一附属医院药剂药理科，北京100048

止汗擦剂为医院制剂[1]，具有消毒、杀菌作用，处方由5%甲醛、2%苯酚、3.75%乙醇组成的水溶液。它可使皮肤发赤，改善皮下血液循环，有利于药物的渗透与吸收，是临床使用较广的药物，主治手足多汗症。止汗擦剂由苯酚和乙醇等组成，原质量标准对苯酚采用紫外吸收系数法进行控制，未对乙醇含量进行控制，为更好的控制产品的质量，建立专属性好、准确度高的气相色谱法对止汗擦剂中苯酚[2-6]和乙醇[7-12]的含量进行控制，并进行方法学考察。结果表明，所建立的方法简便、快捷，灵敏度高，准确度好。

1 仪器与试药

Agilent 6890N 型气相色谱仪，氢火焰离子化检 测 器（FID），Sartorius BP211D 精 密 电 子 天 平（德国赛多利斯股份公司）。苯酚、乙醇对照品（中国食品药品检定研究院，批号100509-201203、130106-201202）；止汗擦剂（某医院，批号130311、131108-1、131108-2、131108-3）；N，N-二甲基甲酰胺为色谱纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱HP-5 石英毛细管柱（30mm×0.53mm，5.0μm）；程序升温：初始柱温90℃，保持6min，以20℃/min 的速率升至170℃，保持7min。进样口温度220℃，检测器温度250℃，分流比为2 ∶1，氮气流速2mL/min，氢气的流速40mL/min，空气流速400mL/min。

2.2 溶液的制备

供试品溶液：精密量取本品1mL，置50mL 量瓶中，加N，N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

对照品溶液：精密称取对照品苯酚0.1986g、乙醇0.3013g，置50mL 量瓶中，加N，N-二甲基甲酰胺溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备溶液。精密量取对照品贮备溶液各1mL，置同一10 量瓶中，用N，N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

阴性样品溶液：按处方比例取甲醛溶液5mL，置100mL 量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，作为空白辅料；再精密量取空白辅料1mL，置50mL 量瓶中，加N，N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，作为空白辅料溶液。

2.3 专属性试验

分别吸取“2.2”项下制备的供试品溶液、对照品溶液和阴性样品溶液，按“2.1”项下色谱条件，测定，记录色谱图。结果苯酚和乙醇色谱峰的理论板数均大于5000，分离度均大于2.0，阳性样品溶液对测定无干扰，见图1（A、B、C）。

图1 气相色谱图

2.4 线性关系及检出限

精 密 量 取 对 照 品 贮 备 溶 液2.0、1.0、1.0、2.5、2.5、2.5mL，分别5、5、10、50、100、200mL 量瓶中，用N，N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，作为线性供试液。精密量取上述线性供试液各1μL，按“2.1”项下色谱条件测定，以各自测得的峰面积为纵坐标（A），浓度为横坐标（c）进行线性回归。苯酚、乙醇回归方程分别为：A=5861 c -73.487（0.9998）和A=2561.6 c -9.5617（0.9999）。结果表明苯酚在0.0497 ～1.59mg/mL 浓度范围内线性关系良好；乙醇在0.0753 ～2.41mg/mL 浓度范围内线性关系良好。另取对照品溶液，采用逐步稀释法，按上述色谱条件测定和方法进样分析，检测限以S/N=3 计算。结果苯酚、乙醇的检出限分别为0.32、0.61μg/mL。

2.5 精密度试验

取“2.2”项下对照品溶液6 份，照“2.1”项下色谱条件，分别进样，计算峰面积相对标准偏差（RSD）。结果苯酚、乙醇的RSD 分别为0.63%、0.94%。

2.6 重复性

取止汗擦剂（批号为130311）样品6份，按“2.2”项下方法制备供试品溶液，依法测定，按外标法以峰面积计算含量，结果苯酚和乙醇的RSD 分别为0.71%、1.47%。

2.7 稳定性试验

取“2.2”项下供试品溶液（批号130311），照“2.1”项 下 色 谱 条 件，分 别 于0、6、12、18、24h 进样，计算峰面积的RSD。苯酚、乙醇的RSD 分别为0.54%、0.82%。结果表明供试品溶液在24h 内，稳定性良好。

2.8 回收率试验

精密量取9 份按处方比例配制的空白辅料各1mL，分别置50mL 量瓶中，分别精密加入对照品贮备溶液4.0、5.0、6.0mL，用N，N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀，进行回收率测定。苯酚、乙醇的平均回收率为102.8%（RSD=1.44%）、101.0%（RSD=1.45%）。结果表明方法的准确性良好，见表1。

表1 回收率试验结果（n=9）

2.9 样品测定

取对照品溶液及供试品溶液，按上述色谱条件进样，记录色谱图，以外标法按峰面积计算，结果：批号130311、131108-1、131108-2、131108-3 的苯酚含量（g/mL）分别为1.64%、1.80%、1.81%、1.79%；乙醇含量（g/mL）分别为2.82%、3.05%、3.00%、3.00%。

3 讨论

3.1 溶剂的选择

乙醇与水、乙醚、氯仿、酯、烃类衍生物等有机溶剂混溶；苯酚微溶于冷水，可在水中形成白色混浊，易溶于65℃以上的热水，易溶于醇、醚等有机溶剂。N，N-二甲基甲酰胺与水、醇、醚、酮、不饱和烃、芳香烃烃等混溶，溶解能力强。考虑水与气相色谱柱的固定液反应或溶解造成柱流失，降低柱效，不宜用水作为溶剂，而选择N，N-二甲基甲酰胺作为溶剂。

3.2 色谱柱的选择

苯酚与乙醇均为弱极性分子，均含有羟基，当苯酚受到苯环π 键的影响，使氧和碳形成p-π 共轭，使得羟基强度减小，也能够电离，所以也呈酸性，乙醇不电离，所以它的羟基强度最大，而碳氧单键强度最小，故乙醇的极性强于苯酚。根据相似相溶原则-即待测组分与固定液极性匹配原则选择色谱柱：（1）选择DB-5 和HP-5 毛细管柱，从分离度和分离效果来分析，HP-5 的效果较好；（2）同时考察了非极性DB-1、HP-1 毛细管柱；中等极性毛细管柱DB-1701、DB-17；强极性毛细管柱DBWAX、DB-FFAP、HP-INNOWAX 共7 种色谱柱的分离效果，结果均不理想。

3.3 色谱条件的优化

常压下乙醇的沸点78.4℃，苯酚的沸点182℃，两组份的沸点相差较大，在恒温条件下，假如柱温较低，则低沸点组合分离得好，而高沸点组分的流出时间会太长，造成峰展宽，甚至滞留在柱中造成柱污染，反之柱温太高，低沸点组分又难以分离，故采用程序升温条件。

本实验方法简便、快捷，灵敏度高，结果准确。可用于止汗擦剂质量的有效控制。

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