褪色光度法测定硫酸庆大霉素

高俊杰，赵瑞华，姜金波

(沈阳理工大学 环境与化学工程学院，辽宁 沈阳 110159)

褪色光度法测定硫酸庆大霉素

高俊杰，赵瑞华，姜金波

(沈阳理工大学 环境与化学工程学院，辽宁 沈阳 110159)

实验研究了硫酸庆大霉素(GM)与刚果红(CR)反应生成离子缔合物的吸收光谱。在pH=6.50的介质中，刚果红与硫酸庆大霉素反应生成离子缔合物，使刚果红溶液褪色，在499nm处测其吸光度值，褪色吸光度值与硫酸庆大霉素的含量有关，从而建立了测定硫酸庆大霉素的褪色分光光度法。在最佳反应条件下，硫酸庆大霉素含量在0.25～5 μg/mL范围内遵守比尔定律，检出限0.111μg/mL，相对标准偏差为1.61%，刚果红与硫酸庆大霉素反应的络合比为3∶1。

硫酸庆大霉素；刚果红；分光光度法

抗生素类药物是用于人类和兽类疾病治疗的最常用药物，硫酸庆大霉素就是一种氨基糖苷类抗生素，具有水溶性好、抗菌谱广、细菌耐药性低、血浆蛋白结合率低、用药方便和价格便宜等优点，是临床上重要的抗感染药物[1]。硫酸庆大霉素含量的测定方法主要有气相色谱(GC)法、质谱法(MS)[2]、 分光光度法[3-5]等。其中分光光度法以仪器廉价、操作简便及分析快速等优点，已经在药物分析中得到了较多的应用[6-7]。本文通过实验发现，刚果红与硫酸庆大霉素反应生成离子缔合物，使刚果红溶液褪色，其褪色吸光度值与硫酸庆大霉素的含量有关，由此建立了褪色光度法测定硫酸庆大霉素的新方法。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

分光光度计(北京普析通用仪器有限公司)、pH计(上海精密科学仪器有限公司)。

硫酸庆大霉素标准溶液10μg/mL。刚果红溶液浓度为200μg/mL，BR缓冲溶液。

所用的试剂均为分析纯，蒸馏水为一次蒸馏水。

1.2 实验方法

在10mL比色管中，依次加入pH=6.50的BR缓冲溶液1.50ml、刚果红溶液1.00mL、一定量的庆大霉素标准品溶液，用蒸馏水定容，摇匀。反应30min后用分光光度计在波长499nm处，以不加庆大霉素为试剂空白，测定二者的差值ΔA。

2 结果与讨论

2.1 吸收光谱

分别吸取1.00mL刚果红溶液和刚果红与硫酸庆大霉素的混合溶液，置于10mL比色管中蒸馏水定容到刻度，测其吸收光谱，如图1所示。

图1 刚果红吸收光谱

由图1可知，本实验的最大吸收波长为499nm，硫酸庆大霉素会使刚果红溶液褪色，吸光度值减小。

2.2 适宜的反应条件

2.2.1 缓冲溶液pH值的选择

按照实验方法，在缓冲溶液不同的pH值下测定，如图2所示，发现当pH值在5到7的范围内，吸光度最大。经过反复实验，确定该实验pH值为6.50。

图2 不同pH值的吸光度值

2.2.2 缓冲溶液用量的选择

在10mL比色管中分别加入不同量pH值为6.50的缓冲溶液，然后按照实验方法测定，如图3所示，当加入量大于1.5mL时，反应吸光度稳定。所以本实验缓冲溶液的加入量为1.5mL。

图3 不同缓冲溶液用量的吸光度值

2.2.3 显色剂用量的选择

按照实验方法，在不同显色剂用量条件下进行测定，结果如图4所示。当显色剂量为1.5mL时，吸光度最大，但是经过反复试验可知，1.5mL时，标准曲线的相关性差，而当显色剂加入量为1.0mL时，溶液不仅褪色明显而且相关系数大。综上，显色剂用量选择1.0mL。

2.2.4 反应温度的选择

由于反应温度对实验结果有较大的影响，按照实验方法测定适宜的反应温度，结果表明，当温度在40℃以内，吸光度变化比较小，所以该实验选择在室温下进行。

2.2.5 反应时间的选择

实验过程中，反应时间会对实验结果有较大影响，按照实验方法，结果表明，当时间超过25min后，反应吸光度趋于稳定，故反应时间选择30min。

图4 不同显色剂用量的吸光度值

2.2.6 反应物的加入顺序对反应的影响

考虑到反应物的加入顺序会对反应造成影响，按照实验方法，分别按不同顺序加入药品，数据表明，当药品加入顺序为：缓冲溶液、显色剂、硫酸庆大霉素时，吸光度最大。所以本实验药品的加入顺序为缓冲溶液、显色剂、硫酸庆大霉素。

2.2.7 络合物组成的测定

试验通过摩尔比法可测得硫酸庆大霉素与刚果红反应的络合比大约为3∶1。

2.3 工作曲线及检出限

在选定的最佳条件下，按照实验方法改变硫酸庆大霉素的加入量测定吸光度值并绘制工作曲线。硫酸庆大霉素测定含量在0.25～5.00μg/mL的范围内其含量与吸光度成良好的线性关系，即该标准曲线的回归方程为y=0.1271x+0.0704,R2=0.9952，检测限为0.111μg/mL。

2.4 共存物质的影响

按照实验方法，加入不同浓度的共存物质进行测定。在硫酸庆大霉素的存在量为2.50μg/mL，相对误差在±5%时，下列物质(以倍数计)不干扰测定:pb2+(0.06)；Mn2+(1)；Ba2+(3)；Mg2+、Fe3+(5) ；草酸钠 (25)；Na+、 K+、磷酸根、D-果糖、醋酸根、葡萄糖、组氨酸、硫酸根、尿素、L-精氨酸、硼酸根、卵蛋白、柠檬酸铵、柠檬酸钠、苏氨酸 (500)。由数据可看出，除部分金属对实验干扰较大，其余氨基酸、糖以及酸根离子对实验均无干扰。由于药物中很少有金属离子存在，故本方法有良好的选择性。

3 样品分析

取不同厂家的硫酸庆大霉素注射液，分别置于100mL容量瓶中，用蒸馏水稀释到刻度，摇匀。再取配制好的上述溶液5mL置于500mL容量瓶中，用蒸馏水稀释到刻度，摇匀。此为样品溶液，按照实验方法对其进行分析测定，并做加标回收率测定，结果如表1所示。

表1 样品测定数据(n=8)

4 结论

通过实验确定了一种测定硫酸庆大霉素含量的新方法：刚果红-硫酸庆大霉素褪色分光光度法。该方法是利用刚果红与硫酸庆大霉素在适宜的条件下反应，使刚果红褪色，测定其褪色吸光度值，通过测定体系的褪色吸光度值来确定硫酸庆大霉素的含量。应用此方法测定市售注射液中硫酸庆大霉素含量，操作简单快速，灵敏度高，并且具有良好的选择性。该方法可以应用于常规的硫酸庆大霉素含量的分析。

[1]赵敏.氨基糖苷类抗生素的发展现状和展望[J].中国抗生素杂志，1999,24(4):319-320.[2]杨利红,胡昌勤,刘文英.14种氨基糖苷类抗生素质谱分析[J].药物分析杂志,2006,26(8):1050-1053.[3]王洪海.可见分光光度法直接测定药物青藤碱[J].光谱实验室,2012,29(5):2988-2994.

[4]金迎春,敖登高娃.甲酚红褪色分光光度法测定芬布芬的研究及其应用[J].化学研究与应用,2011,23(1):77-81.

[5]黄亚励,徐红.署红Y分光光度法测定硫酸庆大霉素[J].化学与生物工程,2007,24(5):77-78.

[6]徐红,刘绍璞,罗红群.碱性二苯基萘基甲烷染料褪色分光光度法测肝素[J].高等学校化学学报，2002,23(12):216-218.

(责任编辑：马金发)

Fading Spectrophotometric Determination of Gentamicin Sulfate

GAO Junjie,ZHAO Ruihua,JIANG Jinbo

(Shenyang Ligong University,Shenyang 110159,China)

The absorp tion spectrum of ion-association complex produced by the reacticn of gentamicin sulfate(GM)and Congo red(CR)is studied.In the medium of pH=6.50,Congo red reacts with gentamicin sulfate to form ion association complex,which causes the fading of Congo red solution.The absorbance value of fading is related to the content of gentamicin sulfate.Thus,according to this method fading spectrophotometric for the determination of gentamicin sulfate is established.Under the optimal conditions,Beer′s law was obeyed in the range of GM concentration of 0.25～5 μg/mL.The detection limit is 0.111μg/mL and the relative standard deviation is 1.61%.The complexation ratio of Congo red with gentamicin sulfate reactions is 3∶1.This method is used to determine the content of gentamicin sulfate injection with satisfactory results.

gentamicin sulfate;Congo red;spectrophotometry

2014-05-12

高俊杰(1962—)，男，教授，研究方向：光谱分析.

1003-1251(2015)03-0050-03

O657.3

A