几种载体上血迹的定性检验

高 野 闫立强 寇 瑾 徐秀明 孙 雪（辽宁警察学院 辽宁 大连 116033）

几种载体上血迹的定性检验

高 野 闫立强 寇 瑾 徐秀明 孙 雪
（辽宁警察学院 辽宁 大连 116033）

建立一种不同载体上血迹定性分析的无损检验方法。采取健康成年人耳静脉血，分别制成玻璃等 8种带血迹样本，使用 UV-2450型紫外可见分光光度计，附反射附件 ISR-240A积分球，采取两种方式测定不同载体上血迹的反射光谱。

血迹 定性 紫外可见分光光度计

命案中血迹可以为确定第一现场和被害人身份等提供重要线索，血迹可能存在不同载体上，由于人为的或自然的等原因，血迹的颜色等可能发生变化，肉眼无法辨认是否为血迹，这时就需要对疑似血迹进行定性。经典的方法需要经过预实验后再进行确证实验，几乎所有的血迹预备实验和确证实验都会对检验对象产生不可逆的破坏，并且对检验对象及操作要求严苛，一般较陈旧血迹就无法得到正确结果，实验操作稍有不慎，即使是血迹也可能出现阴性结果。积分球是具有高反射性内表面的空心球体。它主要用来对处于球内或放在球外并靠近某个窗口处的试样对光的散射或发射，或是光源本身发出的光进行收集的一种高效率器件，积分球一般作为一个理想的漫射光源或是匀光器来使用，从而消除由于光源自身特性而造成的出射光束不均匀或者带有偏振方向。而利用紫外可见分光光度计积分球附件确证不同载体上的血迹，检测简单易操作，对样本不会有损坏，不影响下一步检测，因此在血迹无损定性中应用前景广阔。

1 实验材料与方法

1.1 实验材料

制备带血样本。采取健康同一成年女性 （1人）耳静脉血，分别将新鲜血液两滴滴在载玻片（帆船CAT.NO.7101）上，用另一块载玻片宽边侧面快速均匀推动血滴，使血液均匀涂开，制成带血迹玻璃样本。同样方法制作带血食品保鲜袋塑料（多美滋100型）、铝片（天津市科密欧化学试剂开发中心KERMEL分析纯）、脱脂纱布 （长春市卫生材料厂字2003第2640010）、滤纸（杭州特种纸业有限公司中速定性ASTME832-81）、铜片（天津市科密欧化学试剂开发中心KERMEL分析纯）、泡沫板（方正科技FD980-WT显示器包装）、电脑包装褐色纸壳 （方正科技FD980-WT显示器包装）样本。自然干燥后检验。

1.2 实验方法

UV-2450型紫外可见分光光度计(日本，岛津公司)，附反射附件 ISR-240A积分球，BaSO4标准参比粉末。扫描波长范围：190～800nm；扫描速度：中速；采样间隔：0.5；狭缝宽：1.0nm；光源转换波长：360nm。

（1） 以 BaSO4白板调整基线，然后分别以 BaSO4标准白板作参比，将带血不同载体平整地固定在样本板后将其插入积分球样品光束，测定其反射光谱。

（2） 以 BaSO4白板调整基线，然后分别以不带血迹的空白载体作参比，测定其反射光谱。

2 实验结果

同样方法实验，间隔不同时间进行了 5次。

2.1 以BaSO4标准白板作参比的结果

带血塑料、滤纸、纱布、铝片的光谱波峰波谷位置与数量一致，均有5个波峰5个波谷，波峰分别位于 250nm、310nm、372nm、510nm、560nm处，波谷分别位于 229nm、280nm、 414nm、 540nm与576nm处。带血包装纸壳从800nm到600nm之间光谱曲线急剧下降，反射率从几乎100%降到接近5%左右，只在 576nm附近有一个不明显的波谷。带血玻璃的光谱有3个波峰3个波谷，波峰分别位于365nm附近、510nm与560nm处，波谷分别位于540nm与576nm处，在410nm～420nm呈现较两侧低且平缓的曲线。带血泡沫的光谱有 3个波峰 2个波谷，波峰分别位于310nm、510nm与560nm处，波谷分别位于540nm与576nm处，在410nm～420nm呈现较两侧低且平缓的曲线。带血铜片的光谱有2个波峰 3个波谷，波峰分别位于 510nm与 560nm处，波谷分别位于540nm、576nm与630nm处，均不是非常明显，见图1。两侧低且平缓的曲线。带血铜片的光谱有4个波峰3个波谷，波峰分别位于303nm、369nm、510nm与560nm处，波谷分别位于 260nm、540nm、576nm与630nm处。

图 1 BaSO4白板作参比的几种带血载体光谱

2.3 8种载体两种方法的结果比较

以白板做参比，在630nm处带血纸壳的反射波谷不明显，以空白载体做参比的情况下，带血纸壳与带血铜片在630nm处都可见波谷；以空白载体做参比，纸壳540nm、630nm清晰可见，带血铜片在303nm与369nm处出现2个波峰。两种方法带血玻璃的波峰波谷数量位置未变，但以空白玻璃做参比，在350nm至190nm范围反射急剧升高。以空白泡沫做参比，带血泡沫的波峰波谷数量增加，波峰增加2个，在260nm与372nm处，波谷增加3个，在240nm、290nm与 410nm-420nm处，见图 2。

图2 不同载体两种方法的结果

2.2 以空白载体作参比的结果

带血塑料、滤纸、纱布、铝片的光谱波峰波谷位置与数量一致，均有 5个波峰 6个波谷，波峰分别位于 250nm、310nm、372nm、510nm、560nm处，波谷分别位 于 229nm、280nm、 414nm、540nm、576nm与 630nm处。带血包装纸壳从800nm到600nm之间光谱曲线急剧下降，反射率从几乎 100%降到接近5%左右，在560nm附近有一个波峰，在540nm、576nm与630nm附近各有一个不明显的波谷，在540nm到190nm之间光谱曲线明显升高。带血玻璃的光谱有 3个波峰 4个波谷，波峰分别位于365nm附近、510nm与560nm处，波谷分别位于540nm、576nm与630nm处，在410nm～420nm呈现较两侧低且平缓的曲线。带血泡沫的光谱有 5个波峰6个波谷，波峰分别位于 260nm、310nm、372nm、510nm与560nm处，波谷分别位于240nm、290nm、540nm、576nm与630nm处，410nm～420nm呈现较

2.4 不同载体上陈旧血迹的结果

分别使用两种方法考察了实验室条件下纺织陈旧42天血迹的反射光谱，与新鲜血迹的结果基本一致。以纱布载体为例，见图3。有5个波峰6个波谷，波峰分别位于250nm、310nm、372nm、510nm、560nm处，波谷分别位于229nm、280nm、414nm、533nm、576nm与 630nm处。

图3 两种方法采集的陈旧 42天纱布血迹的反射光谱

3 讨论

3.1 不同载体上血迹定性的依据

我们使用两种方法均表明，带血塑料、滤纸、纱布、铝片的反射光谱曲线在 280nm、414nm、540nm、576nm与630nm处存在波谷。与闫立强的研究结果一致。[1]带血玻璃与带血泡沫波谷分别位于540nm、576nm与630nm处，在410nm～420nm呈现较两侧低且平缓的曲线。谢济运等人的研究表明，血液中的血红蛋白的吸收峰分别位于412nm、540nm与575nm处，血浆蛋白的吸收峰在280nm处。[2]反射光谱在280nm的波谷是血浆蛋白的贡献，540nm、576nm的波谷是血红蛋白的贡献，630nm处的波谷是高铁血红蛋白的贡献，在血液在体时，血液处在人体正常生理环境下，高铁血红蛋白数量处于动态平衡状态，约为1%，血液离体后，被氧化生成较多的高铁血红蛋白，[3-4]因此干燥血迹中高铁血红蛋白含量较高，波谷明显。

3.2 两种方法不同带血载体光谱异同的讨论

以相应的空白作参比，较以BaSO4白板作参比，所有载体的光谱曲线波峰波谷数量不变或增加。塑料、滤纸、纱布与铝片作为载体的血迹光谱波峰波谷数量与位置，在两种方法上一致，可能与这几种载体本身在 190nm～800nm范围内的反射率与 BaSO4相似有关。

两种方法带血玻璃的波峰波谷数量位置未变，但以空白玻璃做参比，在350nm至190nm范围反射急剧升高。可能是玻璃的主要成分二氧化硅的影响，二氧化硅在紫外区域具有明显的吸收。[5]泡沫与铜片都有波峰波谷的增加，增加的波峰波谷位置与纱布一致或接近，说明以空白做参比，可以扣除相应载体的一些影响，对结果的呈现更科学。如果在提取检材时，有条件又提取到了空白对照，建议实验室检验时以空白载体作参比。

3.3 关于陈旧血迹与新鲜血迹光谱差异的讨论

随着时间的增长，血迹中的一些物质发生了变化，如氧合血红蛋白分解甚至变性为高铁血红蛋白。物质结构不同对某一波长的光的吸收或反射可能不同，于是就产生了波峰波谷位置的变化。蓝移速度与程度的影响因素有哪些，如何进行影响的，有待于进一步研究。

4 结论

利用紫外可见反射光谱仪的反射功能可以实现对几种不同载体上血迹的定性分析。检验对检材没有特殊要求，不需要进行任何处理，保证了检材的完整性，不影响后续检验，并且检验快速。

[1]闫立强．紫外可见漫反射光谱法无损确证血痕的研究．刑事技术[J]，2014，（5）：30～32．

[2]谢济运，蒋治良，钟福新，等．血细胞的光谱特性研究[J]．分析测试技术与仪器，2000，6(3): 178～181．

[3]郭世 珺，曾长春，李丽君，聂广，刘颂豪．亚硝酸钠化高铁血红蛋白的拉曼光谱量化检测研究．光谱学与光谱分析，2013，33（7）：1805～1809．

[4]阚雪梅，尤国兴，赵莲，周虹．高铁血红蛋白含量测定方法研究进展．军事医学科学院院刊，2010，34（4）：385～388．

[5]谢康，周永恒，赵修建，顾真安．多孔玻璃的制备及光谱研究．功能材料，2001，10（25）：548～550．

（责任编辑：于 萍）

R 89

A

2095-7939(2015)03-0068-03

2015-01-28

高野 （1968-），男，辽宁辽阳人，辽宁警察学院刑事科学技术系副教授，学士，主要从事刑事物证检验研究。