柑橘拮抗内生细菌的抑菌活性及生物学性状分析

金玲莉，涂 娟，王彦波，曾 明，杜玉标

（江西省农业科学院 园艺研究所，江西 南昌 330200）

柑橘拮抗内生细菌的抑菌活性及生物学性状分析

金玲莉，涂 娟，王彦波，曾 明，杜玉标

（江西省农业科学院 园艺研究所，江西 南昌 330200）

从南丰蜜桔叶片和洋葱的健康植物组织提取液中筛选出 3 株对柑橘溃疡病[Xanthomonas campestris pv．Citri（Hasse）Dye]有拮抗作用的内生菌株Bb1、Bb2和YC1，通过拮抗菌株的抑菌活性试验得出3株菌株对柑橘溃疡病均有较好的抑制效果，并对其生物学性状进行研究分析。

拮抗；内生细菌；抑菌活性；形态特征；生物学性状

植物内生菌是指其生活史的某一阶段或全部阶段能在健康植物组织内栖居而对植物不造成实质性危害并与植物建立了和谐联合关系的微生物，主要包括真菌、细菌和放线菌，能有效地抑制病原菌的侵染或提高宿主植物的抗病性 [1] 。

内生细菌是植物各种组织和器官的细胞间隙或细胞内的天然宿居者，在其部分或整个生活周期寄居在植物组织，特别是营养繁殖的组织中生存、繁衍、传播 [2] 。由于植物内生细菌与宿主协同进化，在演化过程中形成了明显的互惠共生关系。有研究 [3] 表明，植物内生细菌对宿主具有抗病促生作用，显示了其在生物农药开发和促进植物生长等方面有着良好的应用前景。

1 材料与方法

本研究采用研磨分离法从南丰蜜桔健康组织叶片和洋葱提取液中筛选出 3 株对柑橘溃疡病有拮抗作用的内生菌株，用抑菌圈法测定其抑菌效果，并对其生物学性状进行分析研究。

南丰蜜桔叶片取自江西省农业科学院园艺研究所的柑橘资源圃内，洋葱来自超市购买的新鲜无病虫害洋葱。在园艺研究所3 000 m 2 的南丰蜜桔资源圃内，采用5点取样法，选取生长性状良好，无病害症状的健康植株20株，在每株树中采取健康叶片5片，采集后立即放入无菌样品袋中，带回实验室进行内生细菌的分离。将初步筛选出的拮抗菌接柑橘溃疡病菌，于生化培养箱内培养，用抑菌圈法测定其抑菌效果，利用公式计算抑菌率。

NA培养基：牛肉膏 3 g，蛋白胨 5 g，葡萄糖 2.5 g，琼脂 17 g，水 1 000 mL，pH7.2。

2 结果与分析

2.1 拮抗内生菌抑菌活性

图 1 拮抗菌株抑菌效果

表 1 分离的内生细菌性状描述

从图 1 和表1 看出： 从南丰蜜桔叶片中提取的内生菌Bb1、 Bb2 和从洋葱提取液中筛选的内生菌YC1对柑橘溃疡病有明显的抑制作用。而从葱中提取的内生菌 C1、C2 对柑橘溃疡病有较弱的抑制作用，其它内生菌均没有抑制作用。从抑菌圈直径看，YC1 最大，其次为 Bb1，Bb2比 Bb1 相对较弱，从洋葱提取液中提取的内生菌YC1 抑菌圈直径很小，其它都为零。

从表 2 可以看出：3 株拮抗菌中，YC1 的抑菌率最大，拮抗作用最强，其次是 Bb1，最小的是 Bb2。

表 2 3 株拮抗菌悬浮液对柑橘溃疡病的抑制效果

2.2 拮抗菌株生物学性状分析

2.2.1 个体形态性状 Bb1 菌体：杆状，营养体大小为 3.1 μL×1.0 μL，芽孢大小为 1.9 μL×0.8 μL，周生鞭毛，芽孢位于菌体中间，革兰氏阳性。

Bb2 菌体：杆状，大小为 3.1 μL×0.7 μL，芽孢中生，芽孢大小为 1.6 μL×0.6 μL，周生鞭毛，革兰氏阳性。

YC1 菌体：杆状，大小为 2.83 μL×0.71 μL，极生鞭毛 1～2 根；革兰氏染色阳性，无芽孢，无荚膜。

2.2.2 菌落形态性状 Bb1 菌落：菌落培养时中央隆起，直径为 0.3 cm，表面光滑，整齐，不透明，圆形，颜色为黄色。

Bb2菌落：菌落培养时为隆起状，直径为0.5 cm，表面光滑，整齐，不透明，近圆形，颜色为浅黄色。

YC1 菌落：菌落培养时为不规则堆状，边缘呈波浪形，表面光滑，不整齐，不透明，颜色为乳白色。

图 2 菌落形态

3 结 论

从南丰蜜桔叶片和洋葱的健康植物组织提取液中筛选出 3 株对柑橘溃疡病[Xanthomonas campestris pv．Citri（Hasse）Dye]有拮抗作用的内生菌株 Bb1、Bb2 和 YC1，通过拮抗菌株的抑菌活性试验得出 3株菌株对柑橘溃疡病均有较好的抑制效果。

[1] 史应武, 娄恺. 植物内生菌在生物防治中的应用[J]. 微生物学杂志,2009,29(6):61-64.

[2] 张颖, 王刚, 郭建伟, 等. 利用小麦内生细菌防治小麦全蚀病的初步研究[J]. 植物病理学报,2007,37(1):105-108.

[3] 高增贵, 庄敬华, 陈捷, 等. 玉米根系内生细菌种群及动态分析[J]. 应用生态学报,2004,15(8):1344-1348.

Analysis of Antimicrobial Activities and Biological Characters of CitrusAntagonism Endophytic Bacteria

JIN Ling li, TU Juan, WANG Yan bo, ZENG Ming, DU Yu biao

(Horticulture Institute, Jiangxi Academy of Agricultural Sciences, Nangchang 330200, China)

From Nanfeng orange leaves and healthy onion’s plant tissue extracts, 3 endophytic strains with antagonism against citrus bacterial canker disease [Xanthomonas campestris pv. Citri (Hasse) Dye] were screened as strains Bb1, Bb2 and YC1. Through antimicrobial activity tests of antagonistic strains, it was obtained that 3 strains had very good inhibitory effects on citrus canker, and finally, their biological characters were studied.

antagonism; endophytic bacteria; antimicrobial activity; features; biological characters

金玲莉, 涂娟, 王彦波, 等. 柑橘拮抗内生细菌的抑菌活性及生物学性状分析[J]. 生物灾害科学, 2015, 38(1):16-18.

2015-01-20

江西省科技厅支撑计划项目(20132BBF60029)

金玲莉，女，副研究员，主要从事病虫害防治研究，E-mail:jinlinglilove@163.com。

S436.66

A

2095-3704（2015）01-0016-03