胃疡宁丸抗炎镇痛的药效研究

黄思明，梁志健，操红缨，吴清和，黄萍

·药理毒理·

胃疡宁丸抗炎镇痛的药效研究

黄思明，梁志健，操红缨，吴清和，黄萍

目的：对胃疡宁丸的抗炎镇痛作用进行全面的药效学评价。方法：采用小鼠扭体实验、甲醛致痛实验、热刺激致痛实验及压足致痛实验评价胃疡宁丸的镇痛作用；采用小鼠毛细管通透性实验、小鼠耳廓肿胀实验、大鼠棉球肉芽肿实验评价胃疡宁丸的抗炎作用。结果：胃疡宁丸各剂量对醋酸所致小鼠的扭体次数无明显影响；胃疡宁丸高剂量能减少小鼠第二时相中的舔左后足累积时间（P＜0.05）；胃疡宁丸各剂量组可分别提高各时间点热刺激及压足刺激所致的痛阈提高百分率（P＜0.01）；胃疡宁丸中、高剂量能显著性降低二甲苯所致小鼠的耳廓肿胀度（P＜0.05～0.01）；各剂量能显著性降低大鼠肉芽肿系数（P＜0.01）。结论：胃疡宁丸具有良好的抗炎镇痛作用，可供临床选用。

胃疡宁丸；抗炎；镇痛

胃疡宁丸由白术、乌药、山药、白及、青皮、高良姜、赤芍、仙鹤草等药物组方而成，具有温中散寒、理气止痛、制酸止血的功效。用于胃脘胀痛或刺痛，呕吐发酸属于寒凝气滞者。抗胃溃疡作用是目前对胃疡宁丸的一个研究重点。已有实验证明，胃疡宁丸可通过减少胃粘膜损伤因子、增加胃粘膜屏障的功能和增强胃粘膜修复功能，起到抗实验性胃溃疡的作用[1～2]。此外，有研究发现胃疡宁丸还具有胃肠解痉、止呕及抑制胃肠运动的作用[3]。胃溃疡本质是炎症的发生且多伴有痛疼，而目前，对胃疡宁丸抗炎镇痛的研究鲜有报道。对胃疡宁丸进行系统的、多方面、综合的抗炎镇痛研究具有重要意义，这不仅可以为其抗炎镇痛作用提供客观、全面的药效学评价，也为临床的选用提供了可靠的理论依据。

1 材料

1.1 药物

胃疡宁丸（药粉，不含辅料，2.5 g生药/g），由广州陈李济药厂提供（批号：09014）；阿斯匹林，Bayer HealthCare AG（批号：BTA8RR3）；地塞米松，天津力生制药股份有限公司（批号：110112）。

1.2 剂量设置

胃疡宁丸：小鼠和大鼠高、中、低剂量分别为3.16，1.58，0.79 g．kg-1．d-1。

阿司匹林：0.017 g．kg-1．d-1；地塞米松：0.25 g．kg-1．d-1。

1.3 动物

KM小鼠，SD大鼠：许可证号SCXK（粤）2008-0020。

1.4 试剂与仪器

醋酸（广东医药站化学公司，批号：090226）；甲醛（丹东市龙海试剂厂，批号：1004280104）；二甲苯（天津市科密欧化学试剂开发中心，批号：20081028）。

YLS-6B型智能热板仪（济南益延科技发展有限公司）；YLS-3E型电子压痛仪（山东省医学科学院设备站）；722型分光光度计（上海第三分析仪器厂）。

2 方法

2.1 镇痛实验[4～6]

2.1.1 对醋酸所致小鼠痛疼的影响 取SPF级KM小鼠，雌雄各半，体重18～22 g，随机分为对照组、阿斯匹林组、胃疡宁丸低剂量组、中剂量组和高剂量组，每组10只。动物每天灌胃给药1次，连续3天，对照组给予等量蒸馏水。并于末次给药后1 h腹腔注射0.8%醋酸生理盐水溶液0.2 mL/只，观察记录20 min内小鼠的扭体次数，比较各组差异。

2.1.2 对甲醛所致小鼠疼痛的影响 取SPF级KM小鼠，雌雄各半，体重18～22 g，随机分为对照组、阿斯匹林组、胃疡宁丸低剂量组、中剂量组和高剂量组，每组10只。动物每天灌胃给药1次，连续3天，对照组给予等量蒸馏水。于末次给药后1 h，小鼠左后足足跖皮下注射2.5%甲醛生理盐水溶液0.05 mL/只，立即计时，记录0～5 min内（第一时相）和20～30 min（第二时相）内小鼠舔左后足累积时间，比较各组差异。

2.1.3 对热刺激所致小鼠疼痛的影响 取SPF级KM小鼠，雌性，体重18～22 g。使用智能热板仪测定小鼠正常痛阈值两次，取两次痛阈平均值作为给药前的基础痛阈值，选取基础痛阈在5～30 s之间的小鼠，随机分为对照组、阿司匹林组、胃疡宁丸低剂量组、中剂量组和高剂量组，每组10只。动物每天灌胃给药1次，连续3天，对照组给予等量蒸馏水。于末次给药后30，60，120 min分别测小鼠痛阈值，计算痛阈提高百分率，比较组间差异。如60 s仍无反应，将小鼠取出，以免烫伤，其痛阈值以60 s计算。

痛阈提高百分率=（给药后痛阈-基础痛阈）/基础痛阈×100%

2.1.4 对小鼠压足致痛的影响 取SPF级KM小鼠，雌雄各半，体重18～22 g，随机分为对照组、阿司匹林组、胃疡宁丸低剂量组、中剂量组和高剂量组，每组10只。动物每天灌胃给药1次，连续3天，对照组给予等量蒸馏水。使用压痛仪测正常痛阈值两次，取两次痛阈平均值作为给药前的基础痛阈值，于末次给药后30，60，120 min测量鼠痛阈值，计算痛阈提高百分率，比较组间差异。

痛阈提高百分率=（给药后痛阈-基础痛阈）/基础痛阈×100%

2.2 抗炎实验[7～8]

2.2.1 对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高的影响 取SPF级KM小鼠，雌雄各半，体重18～22 g，随机分为对照组、阿斯匹林组、胃疡宁丸低剂量组、中剂量组和高剂量组，每组10只。动物每天灌胃给药1次，连续3天，对照组给予等量蒸馏水。于末次给药后1 h由尾静脉注入2%伊文思蓝生理盐水溶液，剂量为0.1 mL/10 g，同时于腹腔注射0.8%醋酸生理盐水溶液（0.2 mL/只），20 min后放血处死动物，用适量生理盐水反复冲洗腹腔，并收集洗出液，滤纸滤过，调整容积至10 mL，于722型分光光度计（波长590 nm）测定OD值，比较各组的差异。2.2.2 对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响 取SPF级KM小鼠，雌雄各半，体重18～22 g，随机分为对照组、阿斯匹林组、胃疡宁丸低剂量组、中剂量组和高剂量组，每组10只。动物每天灌胃给药1次，连续3天，对照组给予等量蒸馏水。末次给药1 h后将二甲苯50 µL均匀滴于小鼠右耳两面，左耳不涂作为对照。1.5 h后将小鼠脱颈椎处死，用直径8 mm打孔器分别在左、右耳同一部位打下圆耳片，称重，以左、右耳片重量之差作为肿胀度，比较各组间差异。

2.2.3 对大鼠棉球肉芽肿的影响 取SPF级SD大鼠，体重180～220 g，随机分为对照组、地塞米松组、胃疡宁丸低剂量组、中剂量组和高剂量组，每组10只。10﹪水合氯醛麻醉，常规消毒，胸部切开约1 cm，将20 mg的高压灭菌棉球（青霉素和链霉素混合液浸泡后烘干）从切口处植入腋下部皮下，左右各一个，随即缝合皮肤。从手术当日开始给药，对照组给予蒸馏水，连续给药6天，第7天打开原切口，将棉球连同周围结缔组织一起取出，剔除脂肪组织，放干燥箱中60℃烘干，称重。将称得的重量减去棉球原重即得肉芽肿重量，并计算肉芽肿系数。

肉芽肿净重（mg）=干燥后棉球肉芽肿重量（mg）－原棉球重量（mg）

肉芽肿系数（mg/100g）=肉芽肿净重（mg）/大鼠体重（100g）

2.3 统计学处理

3 结果

3.1 对醋酸所致小鼠痛疼的影响

如表1所示，胃疡宁丸各剂量对醋酸所致小鼠的扭体次数无明显影响（P＞0.05）。阿斯匹林能显著减少醋酸所致小鼠的扭体次数（P＜0.01）。

表1 胃疡宁丸对醋酸所致小鼠疼痛的影响（±s）

表1 胃疡宁丸对醋酸所致小鼠疼痛的影响（±s）

注：与对照组比较，1) P＜0.05，2) P＜0.01（下同）

组别 剂量/g．kg-1动物数/只 扭体次数/次对照 - 10 35.00 ±5.06阿斯匹林 0.017 10 9.10±2.472)胃疡宁丸低剂量 0.79 10 31.00±7.67中剂量 1.58 10 32.30±7.39高剂量 3.16 10 31.30±5.96

3.2 对甲醛所致小鼠疼痛的影响

表2结果提示，第一时相，胃疡宁丸低、中、高剂量对小鼠的舔左后足累积时间均无明显影响（P＞0.05），第二时相，胃疡宁丸高剂量能减少小鼠的舔左后足累积时间（P＜0.05）。阿斯匹林能显著减少第一、第二时相小鼠的舔左后足累积时间（P＜0.01）。

表2 胃疡宁丸对甲醛所致小鼠疼痛的影响（±s）

表2 胃疡宁丸对甲醛所致小鼠疼痛的影响（±s）

动物数/只组别 剂量/ g．kg-1第一时相/s第二时相/s对照 - 10 76.40±21.54 160.50±23.48阿斯匹林 0.017 10 33.10±19.582)126.20±26.972)胃疡宁丸低剂量 0.79 10 77.57±18.41 139.40±40.47中剂量 1.58 10 60.70±21.30 159.10±22.65高剂量 3.16 10 63.10±14.25 138.50±18.751

3.3 对热刺激所致小鼠疼痛的影响

如表3所示，胃疡宁丸低剂量可明显增加药后30，120min痛阈提高百分率（P＜0.01），中、高剂量明显增加药后30，60，120 min痛阈提高百分率（P＜0.01）；阿斯匹林亦明显增加药后30，60，120 min痛阈提高百分率（P＜0.01）。

表3 胃疡宁丸对热刺激所致小鼠疼痛的影响（±s）

表3 胃疡宁丸对热刺激所致小鼠疼痛的影响（±s）

痛阈提高百分率/% 30 min 60 min 120 min对照 — 10 5.18±2.67 5.17±3.29 4.11±1.74阿斯匹林 0.017 10 26.42±8.282)10.92±6.972)16.08±7.652)组别 剂量/ g．kg-1动物数/只

胃疡宁丸低剂量 0.79 10 17.95±5.852)7.50±4.14 8.92±4.412)中剂量 1.58 10 19.96±9.392)11.40±5.502)14.73±7.432)高剂量 3.16 10 13.50±4.292)16.96±3.822)6.56±1.472)

3.4 对小鼠压足致痛的影响

如表4所示，胃疡宁丸低、中、高剂量以及阿斯匹林均可明显增加药后30，60，120 min痛阈提高百分率（P＜0.01）。

3.5 对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高的影响

如表5所示，胃疡宁丸各剂量组对醋酸所致小鼠毛细血管通透性增高无明显的影响（P＞0.05）；阿斯匹林对醋酸所致小鼠毛细血管通透性增高有抑制作用（P＜0.05）。

?胃疡宁丸

3.6 对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响

表6结果提示，胃疡宁丸中、高剂量明显降低二甲苯所致小鼠耳肿胀（P＜0.05～0.01），阿斯匹林亦可降低二甲苯所致小鼠耳肿胀（P＜0.05）。

组别 剂量/g．kg-1动物数/只 肿胀度对照 — 10 14.62±4.95阿斯匹林 0.017 10 10.47±1.881)胃疡宁丸低剂量 0.79 10 12.20±3.82中剂量 1.58 10 9.50±3.081)高剂量 3.16 10 8.01±2.902)

3.7 对大鼠棉球肉芽肿的影响

表7结果提示，胃疡宁丸低、中、高剂量以及地塞米松均能使大鼠棉球肉芽肿的肉芽肿系数明显减少（P＜0.01）。

表7 胃疡宁丸对大鼠棉球肉芽肿的影响（±s）

表7 胃疡宁丸对大鼠棉球肉芽肿的影响（±s）

?

4 讨论

炎症，是指具有血管系统的活体组织对损伤因子的防御性反应，伴有红、肿、热、痛的表现。炎症作为常见而又重要的病理过程，与多种疾病有着密切的联系，如肺炎、肾炎、肝炎等。胃疡宁丸由白术、乌药、山药、白及、青皮、高良姜、赤芍、仙鹤草等药物组成。方中药物具有补气健脾、行气止痛、降气止呕之功，多用于慢性胃炎、消化性溃疡等多种胃肠性疾病。而胃肠性疾病多与炎症、痛疼相伴。全面、系统地考察胃疡宁丸抗炎镇痛的药效有助于了解其抗慢性胃炎、抗消化性溃疡的药理学机制及作用特点，有利于合理地、科学地选用药物。本课题着重对胃疡宁丸抗炎、镇痛之功进行了药效学评价，为临床选用提供科学依据。

在镇痛实验中多用醋酸扭体法、甲醛致痛法、热刺激法、压足致痛法等多种方法，且各种方法特点不一，合理选用多种方法，有助综合评价药物的镇痛功效。甲醛致痛法中第一时相反应主要是直接刺激C纤维，第二时相反应则有炎症机制参与，为慢性疼痛模型[9]。胃疡宁丸高剂量可显著降低第二时相中小鼠的舔左后足累积时间，表明胃疡宁丸具有减轻炎症所引起慢性疼痛。热刺激法多用于评价中枢镇痛药，胃疡宁丸各剂量组的痛阈提高百分率与对照组相比具有显著性的提高。压足致痛法多用于评价中枢镇痛药，且可用于分析药物的时效关系。胃疡宁丸各剂量组的痛阈提高百分率较对照组具有显著性的提高，且随时间延长逐渐升高，表明胃疡宁丸镇痛作用具有长效、稳定的特点。

在抗炎实验部分，采用小鼠毛细管通透性实验、小鼠耳廓肿胀实验、大鼠棉球肉芽肿实验评价胃疡宁丸抗急性炎症、亚急性炎症的药效。与对照组相比，胃疡宁丸中、高剂量能显著性降低二甲苯所致小鼠的耳廓肿胀度；各剂量能显著性降低大鼠肉芽肿系数。结果表明，胃疡宁丸可减轻炎症初期局部组织的肿胀并缓解由此带来的疼痛，此外还能降低炎症后期的组织增生。

综上所述，胃疡宁丸具有良好的抗炎镇痛作用，不仅可以治疗炎症所引的胃肠性疾病，且可以减轻炎症所引的多种疼痛，减轻患者的因疾病所带来的不适。本课题只涉及胃疡宁丸抗炎镇痛的药效学评价，其深入的机制研究将在后续的实验展开。

[1] 李洪梅,周爱香,李小芹,等.胃疡宁凝胶对大鼠乙酸烧灼型胃溃疡的影响及其机理探讨[J].中国实验方剂学杂志,2005,11(1):55.

[2] 徐晶晶,黄萍,吴清和,等.胃疡宁丸抗实验性胃溃疡的药效及机制研究[J].中国中药杂志,2013,38(5):736.

[3] 刘静,黄萍,吴清和,等.胃疡宁丸对胃肠运动影响的研究[J].中国实验方剂学杂志,2013,19(10):273.

[4] 胡竟一,邱春燕,雷玲,等. 细辛的镇痛和抗炎作用[J].中药药理与临床,2011,27 (2):67.

[5] 李敏,王斌,唐志书,等.芒硝及其主成分抗炎镇痛泻下效应差异研究[J].中药药理与临床,2012,28 (5):55.

[6] 杨广民,王宇红,张迪光,等.春雨烧伤膏的抗炎和镇痛实验研究[J].中国实验方剂学杂志,2005,11 (3):53.

[7] 胡明财,顾立,刘剑,等.香砂六君颗粒的抗炎、镇痛及抗实验性胃溃疡作用[J].泸州医学院学报,2006,29 (6):499.

[8] 迟莉,李茹柳,徐颂芬,等.白竹黄芪新方镇痛抗炎作用和对胃肠运动影响的研究[J].中药药理与临床,2007,23 (2):8.

[9] 姚东,孟宪生,潘英,等.气滞胃痛颗粒镇痛作用研究及机制初探[J].中成药,2012,34 (3):556.

（责任编辑：陈思敏）

Research on anti-inflammatory and analgesic effects of Weiyangning Pill/

HUANG Si-ming LIANG Zhi-jian, CAO Hong-ying, WU Qing-he, HUANG Ping//(Pharmacy School, Guangzhou University of Chinese Medicine, Guangzhou 510006, Guangdong)

Objective:To study the anti-infammatory and analgesic effects of Weiyangning Pill.Method:Mouse writhing induced acetic acid, and pain in mouse caused by methanol, heat or press method were used to value the analgesic effects. Capillaries permeability increase induced by acid, xylene induced mouse ear swelling and cotton pellet induced granuloma formation in rats were used to value the anti-infammatory effects of Weiyangning Pill.Result:All dose had no effect on the mouse writhing induced by acetic acid. The high dose of Weiyangning Pill could reduce the mouse's cumulative time of licking foot in the second phase (P＜0.05). All dose could improve the increment percentage of analgesic threshold induced by heat or press (P＜0.01). The middle and high dose can reverse the increase of ear swelling caused xylene (P＜0.05～0.01). All dose could reduce the degree of rats granuloma (P＜0.01).Conclusion:Weiyangning Pill has good effect of anti-infammatory and analgesic.

Weiyangning Pill; anti-infammatory; analgesic

R 285.5

A

1674-926X(2015)02-018-04

广州中医药大学中药学院，广东 广州 510006

黄思明，硕士，主要从事中药药理研究

Tel:1392957334 Email: huangsiming198@163.com

黄萍，硕士，教授，主要从事中药药理研究

Tel:13697436601 Email:hping331@126.com

2014-12-22