四君子煮散饮片与传统饮片的煎出效果对比研究

赵嘉祺，刘婷婷，蒋燕萍，秦凡非，曹丽梅

·炮制制剂·

四君子煮散饮片与传统饮片的煎出效果对比研究

赵嘉祺，刘婷婷，蒋燕萍，秦凡非*，曹丽梅

目的：比较四君子煮散饮片与四君子传统饮片在不同时间点煎出液中有效成分含量和干膏收率的变化。方法：在不同时间点测定人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、甘草苷、甘草酸的含量和干膏收率，比较四君子煮散饮片与四君子传统饮片的煎出效果。结果：相同煎煮条件下四君子煮散饮片煎液中人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、甘草苷、甘草酸含量及干膏收率均显著高于传统饮片。结论：相同煎煮条件下四君子煮散饮片的煎出效果优于传统饮片，四君子煮散饮片的临床配方应用具有一定的合理性。

四君子汤；煎出率；煮散饮片；对比研究

中药煮散系指将中药材粉碎成适宜粒度，与水共煎后取汁服用的一种传统用药形式。它在保留传统汤剂辨证施治，随症加减的优势外，又具有散剂服用量小的特点[1～2]。中药材制成煮散饮片后，随着比表面积增大，药物有效成分的煎出率也相应提高，减少了药材用量，节省煎煮时间，避免了药材资源和能源的浪费[3～4]。

四君子汤出自宋代的《太平惠民和剂局方》，最初用于治疗脾胃气虚等慢性症疾，并衍生出后世诸多的补气健脾方剂，故有“天下补气第一名方”之美誉。本试验在传统中药煮散理论的指导下，以四君子汤为研究对象，将其制成煮散饮片，通过与传统复方饮片的煎出率进行对比研究，结果表明煮散饮片煎出率优于等剂量传统饮片，体现了四君子汤作为煮散运用的合理性。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1200型高效液相色谱仪（G1315D DAD检测器，ChemStation for LC 3D sysytms工作站，美国安捷伦公司）；Kromasil C18色谱柱（250×4.6mm，5µm，Scienhome公司）；高速多功能粉碎机（上海冰都电器有限公司）；Sartorius-BS110S分析天平（德国赛多利斯公司）；DGG-9240电热恒温鼓风干燥箱（上海森信实验仪器有限公司）。

1.2 材料

人参饮片（批号：140601b）、炙白术饮片（批号：140710a）购于四川科伦天然药业有限公司，取部分人参饮片制成煮散饮片（批号：140601b-1，实验室自制），取部分炙白术饮片制成煮散饮片（批号：140710a-1，实验室自制）。茯苓饮片（批号：1403066）、炙甘草饮片（批号：1401029）均购于四川新荷花中药饮片股份有限公司，取部分茯苓饮片制成煮散饮片（批号：1403066-1，实验室自制），取部分炙甘草饮片制成煮散饮片（批号：1401029-1，实验室自制）。人参皂苷Rg1（批号：140219）、人参皂苷Re（批号：130410），甘草苷（批号：131127）、甘草酸（批号：130225），均购于四川省维克奇生物科技有限公司；色谱乙腈（美国天地公司）；超纯水（实验室自制）；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 水煎液的制备

传统饮片水煎液的制备：分别称取人参饮片20g、白术饮片18 g、茯苓饮片18 g、炙甘草饮片12 g，共6份，加入10倍量水，取3份样品分别煎煮10 min、20 min、30 min，滤过，备用。另取3份样品，煎煮30 min，滤过，收集滤液备用，再将滤渣加入10倍量水，分别煎煮10 min、20 min、30 min，滤过，合并两次滤液，浓缩至250 mL，即得四君子传统饮片不同时间点的水煎液。

煮散饮片水煎液的制备称取与传统饮片量相当的四君子煮散饮片，同法制备四君子煮散饮片水煎液。

2.2 干膏收率测定

取“2.1”项下各样品溶液100 mL，摇匀，置已恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105 ℃干燥3h至恒重，置干燥器中冷却30 min，迅速精密称定重量。结果见表1。

表1 不同时间点干膏收率测定结果（n=3）

结果表明，在第一次加水煎煮中和在第二次加水煎煮中，四君子煮散饮片的干膏收率均高于四君子传统饮片。

2.3 不同时间点煎出液中人参皂苷的含量测定

2.3.1 色谱条件及系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以0.05%磷酸-水为流动相A（81%），乙腈为流动相B（19%），流速1.5 mL．min-1，柱温35 ℃，检测波长203 nm，洗脱时间0～60 min，等度洗脱。

2.3.2 标准曲线 称取人参皂苷Rg1、Re对照品各10 mg，加甲醇制成每1 mL各含0.2 mg的混合对照品溶液。精密吸取5μL、8μL、10μL、12μL、16μL、20 μL混合对照品溶液，分别进样，以峰面积Y为纵坐标，进样量X为横坐标绘制标准曲线（见图1、图2），分别得回归方程为：YRg1= 150.25X+11.042（R2=0.9989）；YRe=118.46X+32.965（R2=0.9991），表明人参皂苷Rg1、Re在1 μg～4 μg范围内，峰面积与进样量线性关系良好。

2.3.3 精密度试验 吸取人参皂苷对照品溶液10 µL，重复进样6次，按上述色谱条件测定, 记录人参皂苷峰面积值，计算RSD值。结果表明人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的RSD值分别为1.04%、1.03%。

2.3.4 稳定性试验 取“2.1”项下煮散饮片水煎液，于0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h，分别进样10 µL，记录峰面积值，结果显示人参皂苷Rg1、人参皂苷Re的RSD值分别为2.05%、0.63%，表明24 h内供试品溶液基本稳定。

2.3.5 重复性试验 取四君子汤煮散饮片6份，按“2.1”项下方法制备供试品溶液，分别进样10 µL，记录人参皂苷Rg1、Re色谱峰峰面积，其RSD分别为1.23%、0.84%，表明该方法重复性良好。

2.3.6 加样回收率试验 精密量取已知含量的样品溶液（人参皂苷Rg10.173 mg．mL-1、人参皂苷Re 0.138 mg．mL-1）10 mL，共6份，分别各加入人参皂苷对照品溶液（人参皂苷Rg10.203 mg．mL-1、人参皂苷Re 0.151 mg．mL-1）1 mL，按供试品制备方法及色谱条件，测定含量，计算回收率，结果见表2、表3。

表2 人参皂苷Rg1加样回收率试验结果

3 10 0.173 0.203 0.392 97.97 99.04 2.23 4 10 0.173 0.203 0.372 98.01 5 10 0.173 0.203 0.378 101.15 6 10 0.173 0.203 0.368 95.87

表3 人参皂苷Re加样回收率试验结果

以上试验结果表明，人参皂苷Rg1、Re加样回收率在95～105%之间，平均回收率分别为99.04%、98.99%，RSD值分别为2.23%、2.18%，表明该方法可靠，符合含量测定的要求。

2.3.7 含量测定 按“2.1”项下方法制备供试品溶液，各精密吸取10 μL，按含量测定方法测定，代入回归方程，结果见图1、图2、表4、表5。

图1 人参皂苷标准品色谱图

图2 四君子煮散饮片人参皂苷色谱图

表4 不同时间点人参皂苷Rg1含量测定结果（n=3）

表5 不同时间点人参皂苷Re含量测定结果（n=3）

结果表明，不同时间四君子煮散饮片水煎液中的人参皂苷Rg1和Re含量均高于传统饮片水煎液，且煎出速率较传统饮片快，最大煎出总量大于传统饮片中人参皂苷Rg1和Re的最大煎出总量。

2.4 不同时间点煎出液中甘草苷、甘草酸含量测定

2.4.1 色谱条件及系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相乙腈-0.05%磷酸水溶液，梯度洗脱：0～8 min：19%乙腈，8～35 min：19→50%乙腈，35～36 min：50→100%乙腈，36～40 min：100→19%乙腈，流速1.0 mL．min-1；检测波长237 nm。检温35℃。

2.4.2 标准曲线绘制 取甘草苷、甘草酸对照品适量，精密称定，加甲醇分别配制成含甘草酸1.92 mg．mL-1、甘草苷1.02 mg．mL-1的对照品溶液（甘草酸重量=甘草酸铵重量/1.0207）。进样体积分别为5µL、8µL、10µL、12µL、16µL、20µL，以峰面积(Y)为纵坐标，对照品含量(X)为横坐标绘制标准曲线，回归方程为：甘草酸Y1= 112.2X1+17.7，R2=0.9996；甘草苷Y2= 690.7X2+335.7，R2=0.9993。结果表明，甘草苷在5.1μg～20.4μg范围内，甘草酸在9.6 μg～38.4 μg范围内，对照品峰面积与进样量呈良好线性关系。

2.4.3 精密度试验 精密吸取混合对照品溶液5 µL，连续进样6次，测定甘草苷、甘草酸色谱峰峰面积，结果RSD值为0.99%、2.07%，表明仪器精密度良好。

2.4.4 稳定性试验 取“2.1”项下煮散饮片水煎液，于0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h，分别进样10 µL，记录甘草苷、甘草酸峰面积值， RSD值为0.57%、1.94%，表明24 h内样品中甘草苷、甘草酸含量稳定。

2.4.5 重复性试验 取四君子汤煮散饮片6份，按“2.1”项下方法制备供试品溶液，分别进样10 µL，记录甘草苷、甘草酸色谱峰峰面积，其RSD分别为0.75%、2.09%，表明该方法重复性良好。

2.4.6 加样回收率试验 精密量取已知含量的样品溶液4 mL（甘草酸0.281 mg．mL-1、甘草苷0.174 mg．mL-1），共6份，分别精密加入混合对照品溶液（甘草酸1.055 mg．mL-1、甘草苷0.634 mg．mL-1）1 mL，按供试品制备方法及色谱条件测定含量，计算回收率，结果见表6、表7。

表6 甘草苷加样回收率试验结果

表7 甘草酸加样回收率试验结果

试验结果表明，甘草苷和甘草酸的加样回收率在95～105%之间，平均回收率为99.65%、99.26%，RSD为2.15%、1.41%，表明该方法可靠，符合含量测定要求。

2.4.7 含量测定 按“2.1”项下方法制备供试品溶液，各精密吸取10 μL，按含量测定方法测定，代入回归方程，结果见图3、图4、图5、表8、表9。

图3 甘草苷色谱图

图4 甘草酸色谱图

图5 四君子煮散饮片色谱图

表8 不同时间点甘草苷含量测定结果（n=3）

表9 不同时间点甘草酸含量测定结果（n=3）

结果表明，不同时间点四君子煮散饮片煎液中的甘草苷与甘草酸含量均高于四君子传统饮片煎

液，且煎出速率较传统饮片快，最大煎出总量大于传统饮片中甘草苷与甘草酸的最大煎出总量。

2.5 综合加权评分结果

根据四君子煮散饮片的性质和临床疗效，选择四君子煎液中人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、甘草苷、甘草酸煎出率和干膏收率为评价指标，进行综合加权评分。人参皂苷Re、人参皂苷Rg1、甘草苷、甘草酸作为指标性成分，权重系数相应较高，各为0.2，共计0.8为宜；干膏收率从侧面反映了四君子煮散饮片的固体成分煎出率，但与功能主治的强度不成量效关系，综合评价时权重系数相应较小，以0.2为宜。结果见表10、图7。

表10 不同时间点甘草酸含量测定结果（n=3）

图7 四君子传统饮片与煮散饮片煎出效率加权评分比较

3 结果与讨论

上述试验结果表明，四君子煮散饮片1g大约相当于传统饮片1.24g，四君子煮散饮片的煎出效果优于传统饮片。

煮散的应用源远流长，在东汉名医张仲景所著《伤寒论》和《金匮要略》中便有相应记载，至宋代《太平惠民和剂局方》，采用煮散的方剂已达237个[4]，其应用已达到了顶峰，甚至一度取代了传统汤剂（“近世用汤者殊少，应汤皆用煮散。”[5]）。中药煮散在中医药基本理论的指导下，保留了传统汤剂的长处，缩短了煎煮时间，同时节约能源和药材，降低了用药成本[6]，体现了社会效益和经济效益。中药材资源日益缺乏成为了限制中药可持续利用发展的重要因素之一[7～8]，煮散无疑是一种更加优良的饮片形式，值得推广应用。

目前对于煮散的基础研究相对较少，且多集中在工艺研究方向，对其药效及量效关系的研究较为缺乏，局限了煮散的临床推广。要确定临床上使用多少剂量的煮散饮片可与传统饮片作用功效相似，单对二者的煎出效果进行分析尚显不足，为了更准确、全面地反映煮散饮片与传统饮片的量效关系，还需进行药效学等多方面的考察，才能更加科学合理地应用于临床。

[1] 杨琳,傅延龄.《外台秘要》煮散方初探[J].中医杂志,2012,53 (3):241.

[2] 仝小林,张家成,穆兰澄,等.恢复煮散,节省药材[J].中国新药杂志,2012,21(5):470.

[3] 贺颖,王志萍,王力宁,等.不同粉碎度对麻杏石甘汤煮散中盐酸麻黄碱和苦杏仁苷的影响[J].中成药,2013,35(3):631.

[4] 邢丹,贺莹,郑虎占.从《太平惠民和剂局方》论中药煮散技术规范[J].中国临床医生,2012,40(11):73.

[5] 沈括.梦溪笔谈[M].沈阳:辽宁教育出版社,1997:151.

[6] 文谨,刘起华,彭智平,等.黄芩煮散与传统饮片有效成分的煎出效果比较[J].中国实验方剂学杂志,2014,20(11):34.

[7] 肖小河,肖培根.关于中药资源的基本形势、科学保护与再调查的几点看法[J].中国中药杂志,2005,30(2):85.

[8] 周然,王永辉.中药资源的保护与可持续开发利用[J].世界中西医结合杂志,2008,3(1):6.

（责任编辑：何瑶）

Comparative study of decoction effect between decocting powders and traditional decoction pieces of Sijunzi/

QIN Fanfei, CAO Li-mei, ZHAO Jia-qi, FU Chao-mei//(Pharmacy College, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine; The Ministry of Education Key Laboratory of Standardization of Chinese Herbal Medicine; Key laboratory of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources in Sichuan Province—Key Laboratory Breeding Base of Co-founded by Sichuan Province and MOST, Chengdu 611137, Sichuan)

Objective:To compare changes of active constituents and yield of dry extract between decoction pieces and powder of Sijunzi in different boiling time.Method:Ginsenoside Rg1and Re, liquiritin, glycyrrhizic acid and dry extract yield were determined in different boiling time to compare the extraction effciency.Result:Sijunzi decocting powders showed higher performance in contents of ginsenoside Rg1and Re, liquiritin, glycyrrhizic acid and yield of dry extract under same boiling condition compared with traditional slices.Conclusion:The extraction efficiency of Sijunzi decocting powder is higher than traditional decoction pieces under the same circumstances, which confrms the rationality of Sijunzi decocting powder in clinical application.

Sijunzi decoction; decocting rate; decocting powder; comparative study

R 283.6

A

1674-926X(2015)02-006-05

成都中医药大学药学院 中药材标准化教育部重点实验室 中药资源系统研究与开发利用省部共建国家重点实验室培育基地，成都 611137

赵嘉祺，成都中医药大学中药学专业本科在读，

Tel:18215516008 Email:513142926@qq.com

秦凡非，在读硕士研究生，从事中药药剂学研究。Email: ohmightcat@163.com

2014-11-23