S100B与颈动脉粥样硬化斑块稳定性关系的研究

杨百元，徐芙蓉

（成都市第七人民医院神经内科，成都610021）

颈动脉粥样硬化（carotid-artery atherosclerosis，CAS）是颈动脉增厚的一种病理状态，典型的动脉粥样硬化在局部形成斑块。根据斑块的稳定性可分为稳定性斑块和不稳定性斑块，后者即易损斑块。易损斑块表面能形成血栓，血栓脱落可引起以同侧黑矇、对侧肢体无力为特点的短暂性脑缺血发作或者导致脑梗死。严重的颈动脉斑块可导致颈动脉狭窄甚至完全闭塞。研究发现CAS是全身动脉粥样硬化的“窗口”［1］，斑块的稳定性与脑梗死的预后相关［2－3］。目前关于CAS的发病机制中，炎症机制是被公认的主流学说，是多种炎症因子参与共同作用的结果。

S100B属于S100蛋白家族成员之一，研究发现该家族与动脉粥样硬化有着密切的关系。在动脉粥样硬化斑块中S100A8和S100A9在动脉粥样硬化斑块表达增强，体外研究也发现S100A8、S100A9可诱导内皮细胞炎性反应，而后者正是动脉粥样硬化形成的条件之一，提示它们参与动脉粥样硬化的病理生理过程［4－5］。国外的研究也发现S100A6的 mRNA水平与心肌梗死相关［6］。而冠状动脉粥样硬化和CAS有着很多相似的发病机制。另外目前国内外尚无研究S100B和CAS的关系。因此本研究旨在通过研究CAS患者血浆中S100B的表达水平，探讨其与CAS斑块稳定性的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2011～2013年成都市第七人民医院神经内科的住院及门诊患者经过颈动脉超声诊断为CAS的共200例，其中男108例，女92例。根据颈动脉超声结果分为稳定斑块组（n＝105）及易损斑块组（n＝95）。另以年龄、性别匹配的在本院体检经颈动脉超声检查排除CAS的健康人群198例作为正常对照组。排除标准：（1）近3个月诊断为短暂性脑缺血发作、急性脑梗死或者脑出血；（2）近3个月患有心绞痛或者心肌梗死接受颅脑手术；（3）近3个月有颅脑外血管栓塞事件发生；（4）近3个月头颅外伤；（5）近3个月患中枢神经系统感染；（6）合并严重的心、肝、肺、肾疾病。

1.2 方法

1.2.1 颈动脉超声检查 所有患者及志愿者均在本院超声科由固定的2位经验丰富的超声科医师进行颈动脉超声检查，探头频率8～12MHz，分别检测双侧颈总动脉、颈总动脉分叉处及颈内动脉颅外段，观察内膜中层厚度（IMT），有无斑块形成；IMT为管腔内膜交界面到中膜与外膜交界面的垂直距离。（IMT正常范围界定为小于1.0mm；1.0mm ≤IMT＜1.2 mm为内中膜增厚，局部突入管腔部分超过周围IMT的50%或局部IMT≥1.2mm 定义为动脉粥样硬化斑块）。参照Mathiesen等［7］超声检查结果和分类标准定义CAS斑块稳定性：硬斑表现为强回声伴有声影（图1C），与周围外膜组织中的纤维回声相似或更强；软斑的斑块明显突入管腔内，表现为不同强度的混合性回声，较周围外膜组织中的纤维回声低，表面有连续的回声轮廓及光滑的纤维帽（图1B）；混和斑块表面不平，具有软斑和硬斑的2种回声特征（图1D）；以软斑和混合斑为易损斑块，硬斑和扁平斑为非易损斑块即稳定斑块。

图1 动脉粥样硬化斑块图

1.2.2 ELISA法检测血浆S100B及超敏C反应蛋白（hs-CRP）水平 取清晨空腹肘静脉血3～5mL，自然凝固30min后常温3 000r／min离心15min，分离血清，－70℃低温冰箱保存，在本院中心实验室由专业检验员严格按照说明书的步骤严格操作，采用ELISA夹心法成批检测血浆S100B和hs-CRP水平，应用Muhiskan ex酶标仪492nm处读取OD值。试剂盒购自武汉博士德公司。灵敏度最小可测人S100B、hs-CRP达8ng／mL。

1.3 统计学处理 采用SPSS17.0软件进行数据分析，正态分布的计量资料用±s表示，各组间均数比较采用方差分析，组间两两比较采用SNK-q检验；计数资料用率表示，比较采用χ2检验；检验水准α＝0.05，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 一般临床特征 各组一般临床特点见表1。各组间在年龄、性别构成等方面差异无统计学意义（P＞0.05）。患高脂血症、高血压及吸烟的的比例，在稳定斑块组和易损斑块组差异无统计学意义（P＞0.05），但均要高于正常对照组（P＜0.05）。糖尿病在易损斑块组的患病比例要显著高于稳定板块组及正常对照组（P＜0.05）；而稳定斑块组与正常对照组之间差异无统计学意义（P＞0.05）。

a：易损斑块组与正常对照组比较；b：稳定斑块组与正常对照组比较；c：稳定斑块组与易损斑块组比较。

表1 各组之间一般临床资料比较

表2 各组间hs-CRP与S100B表达水平比较

2.2 各组血浆S100B及hs-hCRP表达水平比较 血浆S100B水平在易损斑块组中较稳定斑块组及正常对照组明显的升高（P＜0.01），而在稳定斑块组与正常对照组之间S100B差异无统计学意义（P＝0.07）；血浆hs-CRP在易损斑块组中较稳定斑块组及正常对照组明显升高（P＜0.01），而在稳定斑块组与正常对照组间差异无统计学意义（P＝0.55）。见表2。

3 讨 论

CAS是脑梗死的最常见的危险因素，我国缺血性脑卒中患者CAS更是达到了70%～80%［7－8］。在CAS斑块尤其是易损斑块基础上导致血管狭窄、形成血栓脱落栓塞颅内动脉是脑梗死发生发展的重要病理生理学基础［9］。因此，分析CAS斑块形成的机制，并对其早期预防和治疗脑梗死的发生、复发有着重要的临床意义。

S100蛋白家族共有25个成员，S100B属于S100蛋白家族中的一员，是高级聚糖化终产物（advanced glycation end products，RAGE）的配体之一，在炎症调节、细胞分化等方面起着重要的作用。在临床研究中S100B在脑梗死、脑外伤、帕金森病患者的血清中都有显著升高［10］。研究发现RAGE通过配体作用与动脉粥样硬化的形成有着密切关系，敲除RAGE的小鼠不易发展为动脉粥样硬化［11］。在动物和细胞实验中，S100B能够激活RAGE调节的炎症通路，增加黏附分子和炎症因子的表达从而导致动脉粥样硬化的形成［12］。S100B／RAGE途径通过激活p38／ERK／NF-kB进而使单核细胞中的环氧合酶-2（COX-2）mRNA的表达升高，COX-2的增加又促进单核细胞核平滑肌细胞的黏附［13］。同时S100B可通过RAGE途径诱导单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）的表达、进而促进单核细胞与血管内皮细胞的黏附［8］，以及诱导血管平滑肌细胞炎性因子MCP-1和IL-6等的表达，并促进血管平滑肌细胞的迁移［5］。此外，S100B也可以激活过氧化物氧自由基的释放从而加重内皮损伤［14］。研究也发现S100B激活TAGE而导致外周血中 TNF－α［15］释放增加和IP-10mRNA 增加［16］。而炎性产物的表达、黏附，平滑肌细胞的迁移及氧化应激都参与了动脉粥样硬化发生发展。因此S100B有可能通过这些机制参与了动脉粥样硬化的发生发展。

在本研究中，易损斑块组及稳定斑块组中高血压、糖尿病和吸烟的患者比例均要高于正常对照组（P＜0.05）。而易损斑块组与稳定板块组差异无统计学意义（P＞0.05），但糖尿病比例明显高于稳定斑块组及正常对照组（P＜0.05）。糖尿病等已经是公认的动脉粥样硬化的危险因素，血糖升高的患者常伴有血管内皮功能障碍、血流呈高凝状态、胰岛素抵抗及脂蛋白代谢异常等，引起血管内皮细胞损伤，从而促进动脉粥样硬化的发展。有研究发现，糖尿病与斑块的稳定性，以及血管狭窄程度相关，且2型糖尿病可作为易损斑块的一个预测因素［17］。本研究发现在CAS患者的血清中，无论是稳定斑块组还是易损斑块组S100B的水平均高于正常对照组，但仅易损斑块组的S100B水平与正常对照组之间有着明显的差异，而稳定斑块组S100B水平与正常对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。推测可能的原因是易损斑块脂质含量较高，平滑肌细胞和胶原含量少，纤维帽薄，支撑力差，尤其在偏心性纤维帽的周边最为薄弱，斑块容易破裂［18］，局部的炎症物质易释放到血液中，引起易损斑块组S100B水平升高。而在稳定斑块组中，动脉粥样硬化斑块纤维帽厚，炎症物质不易释放到血浆中。本研究同样发现稳定斑块组和易损斑块组患者的血清中hs-CRP显著地高于正常对照组，和S100B的变化趋势一致，这也和以前的研究类似［19］。

然而本研究也有着一定的局限性，研究采用颈动脉超声评估斑块的稳定性，检查结果有时依赖于操作者的主观判断和操作时超声探头的角度、方向和位置。就目前而言，CAS病变的影像学评价目前还是以脑血管造影为“金标准”，因其可显示管腔进展期病变、血栓形成、斑块破裂和钙化；然而由于其需要的有全脑血管造影设备的支持，以及较高昂的费用使得其推广应用受到局限。并且因其不能显示管壁结构，也无法直接对粥样斑块的成分或组织病理学特点进行评估。许多斑块向外凸出的患者，尽管临床症状明显，但血管直径仍可表现正常，而无创性的超声检查可以弥补这一不足。因此，评估CAS斑块的稳定性目前临床上主要以颈动脉超声作为首选。

综上，S100B的水平检测可作为临床CAS患者易损斑块的炎性标记物的价值，尤其是与患者预后的关系值得进一步探讨，而调节S100B可能成为临床稳定易损斑块的重要靶点。

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