乙型肝炎肝硬化血清纤维化指标和肝功能相关性研究

陆明海，张军艳，杨宏伟

(十堰市中医医院检验科，湖北 十堰 442012)

乙型肝炎肝硬化血清纤维化指标和肝功能相关性研究

陆明海※，张军艳，杨宏伟

(十堰市中医医院检验科，湖北 十堰 442012)

摘要：目的探讨血清纤维化指标透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型胶原蛋白(PC-Ⅲ)和肝功能的关系，评价HA、LN和PC-Ⅲ对诊断肝纤维化的敏感性和特异性。方法选择2012年3月至2014年6月十堰市中医医院收治的乙型肝炎患者145例为研究对象，其中慢性乙型肝炎(A组)63例、乙型肝炎肝硬化(B组)42例、慢性HBV携带者(C组)40例，同期选择20例健康健康体检者作为健康对照组(D组)。采用生化法检测丙氨酸转氨酶(ALT)；放射免疫法检测血清HA、LN、PC-Ⅲ，荧光定量聚合酶链反应检测HBV-DNA载量。分析4组纤维化指标及其与ALT、HBV-DNA载量的关系。结果4组血清HA、LN、PC-Ⅲ水平比较差异有统计学意义(均P<0.01)。B组血清HA、LN、PC-Ⅲ水平最高[(475±103) μg/L、(158±43) μg/L、(224±78) μg/L]，与A组[(298±23) μg/L、(124±33) μg/L、(186±44) μg/L]、C组[(82±22) μg/L、(73±18) μg/L、(45±13) μg/L]、D组[(78±14) μg/L、(68±13) μg/L、(38±10) μg/L]分别比较，差异有统计学意义(均P<0.05)。A组患者HA、LN、PC-Ⅲ和ALT、HBV-DNA呈正相关(均P<0.05)；B组患者HA、LN、PC-Ⅲ和ALT、HBV-DNA无明显相关性(均P>0.05)。HA对肝硬化纤维化诊断的灵敏度最高(93.4%)，PC-Ⅲ特异度最高(88.4%)。结论乙型肝炎患者血清HA、LN、PC-Ⅲ明显升高，对慢性乙型肝炎患者联合诊断有助于早期诊断肝纤维化，及早干预。

关键词：乙型肝炎；肝纤维化；透明质酸；Ⅲ型胶原蛋白；肝功能

各类肝炎世界流行趋势不减，每年约有100万人死于乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染后导致的肝硬化、肝衰竭和肝癌[1]。当机体感染HBV后，病毒持续在体内进行复制，启动自身免疫应答清除体内的病毒，导致肝脏细胞持续损伤，刺激肝脏发生纤维化[2]。肝星状细胞与肝脏纤维化的发生、发展及肝脏星状细胞密切相关，当其受到刺激时，可分泌大量的纤维化相关修复因子，促进肝脏纤维修复[3]。本研究主要分析肝脏纤维化主要指标透明质酸(hyaluronic acid,HA)、层粘连蛋白(laminin,LN)、Ⅲ型胶原蛋白(protein collagen Ⅲ,PC-Ⅲ)与肝功能的相关性。现报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料选择2012年3月至2014年6月十堰市中医医院收治的145例乙型肝炎患者为研究对象，其中慢性乙型肝炎(A组)63例、乙型肝炎肝硬化(B组)42例、慢性HBV携带者(C组)40例。其中A组男33例、女30例，年龄23～67岁，平均(36±5)岁；B组男27例、女15例，25～57岁，平均(39±3)岁；C组男23例、女17例，23～67岁，平均(37±3)岁。同期选择20例健康健康体检者作为健康对照组(D组)，男12例、女8例，年龄22～46岁，平均(34±4)岁。慢性乙型肝炎、乙型肝炎肝硬化、慢性HBV携带者诊断均符合2010年乙型肝炎防治指南[1]，排除药物性肝炎、酒精性肝炎、肾疾病、肾功能障碍、恶性肿瘤、急性感染、服用激素类药物等，自愿参与该项目的研究，并愿意承担各项检测项目的费用。各组受试者的性别、年龄等一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2研究方法

1.2.1血清HA、LN、PC-Ⅲ检测血清HA、LN、PC-Ⅲ检测采用放射免疫法。主要仪器：γ放射免疫技术器(GC-1200H，科大创新股份有限公司)。HA放射免疫分析试剂盒(北京申宗生物技术研究所提供，批号：20121120H)；Ⅲ胶原放射免疫试剂盒(上海科美生物试剂有限公司，批号：MA20132203)；层粘连蛋白放射免疫试剂盒(上海科美生物试剂有限公司，批号：MA20130431)。

1.2.2HBV核酸的检测方法荧光定量PCR检测(厦门新创科技有限公司)。检测步骤规范对待来自患者血浆样本和对照品(阴、阳)进行处理，其中步骤方法严格按试剂盒中说明书进行操作。样品在进行荧光定量PCR扩增前要进行反转录。对数据相关性进行分析，采用对数计算的方法同时定量计算HBV-DNA的平均拷贝数。所用试剂检测下限为<80 copies/mL。仅A、B、C组完成HBV-DNA检测。

1.2.3丙氨酸转氨酶(alanine aminotransferase,ALT)检测主要试剂：ALT测定试剂盒，北京利德曼公司生产[国食药监械(进)字2004第3400295号]。采用生化方法，用贝克曼DX800全自动生化分析仪结合ALT测定试剂盒进行检测。仅A、B、C组进行ALT检测。

2结果

2.1各组HA、LN、PC-Ⅲ水平比较4组血清HA、LN、PC-Ⅲ水平比较差异有统计学意义(均P<0.01)。B组血清HA、LN、PC-Ⅲ水平最高，与A、C、D组比较，差异有统计学意义(均P<0.05)；C、D组高于B组(P<0.05)。而C组血清HA、LN、PC-Ⅲ水平与D组比较，差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

HA：透明质酸；LN：层粘连蛋白；PC-Ⅲ：Ⅲ型胶原蛋白；a与A组比较，P<0.05；b与B组比较，P<0.05；A组：慢性乙型肝炎；B组：乙型肝炎肝硬化；C组：慢性HBV携带者；D组：健康对照组

2.2乙型肝炎患者HA、LN、PC-Ⅲ和ALT、HBV-DNA的关系A组患者HA、LN、PC-Ⅲ与ALT呈正相关(r=0.34，0.35，0.41，均P<0.05)。B组和C组HA、LN、PC-Ⅲ和ALT无明显相关性(P>0.05)。A组患者HA、LN、PC-Ⅲ与HBV-DNA呈正相关(r=0.35，0.45，0.53，均P<0.05)。B组和C组HA、LN、PC-Ⅲ与HBV-DNA无明显相关性(r=0.04，P>0.05)。

2.3ROC曲线评价血清HA、LN、PC-Ⅲ对肝硬化诊断的敏感性和特异性HA曲线下面积最大，为0.93，而LN和PC-Ⅲ分别为0.86、0.89，HA、LN、PC-ⅢROC曲线均位于机会线上，HA和LN、PC-Ⅲ曲线下面积比较差异有统计学意义(Z=3.05，P<0.05)，LN、PC-Ⅲ曲线下面积比较差异无统计学意义(P>0.05)。在最佳临床诊断分界点时，HA对肝硬化纤维化诊断的灵敏度最高，PC-Ⅲ对肝硬化纤维化的特异度较高。见表2，图1。

HA：透明质酸；LN：层粘连蛋白；PC-Ⅲ：Ⅲ型胶原蛋白；每个指标检测的灵敏度和特异度为该指标最佳临床诊断分界点下的灵敏度和特异度

HA：透明质酸；LN：层粘连蛋白；PC-Ⅲ：Ⅲ型胶原蛋白

图1乙型肝炎肝硬化患者血清HA、LN、PC-Ⅲ水平ROC曲线结果

3讨论

肝纤维化是各类肝脏疾病共同的病理进程，最终发展到肝硬化、肝癌阶段，导致最终疾病发展不可逆，但早期肝纤维化是可逆的病理改变，所以临床对早期肝纤维化诊断尤为重要[4]。肝纤维化诊断的金标准是肝脏组织活检，但因其创伤性不为临床广泛应用[5]。虽然超声对肝纤维化的诊断临床应用广泛，尤其是弹性超声技术的发展，对肝纤维化的诊断更为准确，但肝纤维化一旦发生超声学改变，多数情况下肝纤维病程已经进展到不可逆阶段[6]。

目前临床对早期肝纤维化血清学诊断还处于不成熟阶段，血清学研究最多的指标有转化生长因子β1、PC-Ⅲ、血小板衍生生长因子、HA等，这些因子主要由肝脏库普弗细胞、星状细胞分泌[7-8]。TGF-β1主要是抑制细胞外基质降解和肝细胞再生能力，使肝纤维化逐渐加重，与肝纤维化程度呈正相关[9]。HA由间质细胞合成，是结缔组织主要的非细胞成分，当肝纤维化库普弗细胞清除能力明显下降，使得HA代谢速率明显下降，血清中HA水平明显增高[10]。血清PC-Ⅲ主要是由肝脏星状细胞合成，其血清水平增高表明PC-Ⅲ合成活跃，表明肝脏库普弗细胞功能活跃，血清含量与肝纤维程度相一致[11]。LN主要是内皮细胞合成，介导细胞间粘连作用，正常血清LN水平极低，若血清中LN水平升高，提示间质细胞增生[12]。

本研究结果显示，HBV携带者和正常健康对照组人群血清纤维化指标比较差异无统计学意义，说明HBV携带者体内病毒对肝脏细胞无侵犯，未对其造成损失。而慢性乙型肝炎患者体内病毒对肝脏细胞慢性损失，其体内的HA、LN、PC-Ⅲ稍有升高。HA对肝硬化纤维化诊断的灵敏度为93.4%，特异度为75.2%；PC-Ⅲ对肝硬化纤维化的特异性最高，为88.4%。Lu等[13]研究认为，HA对肝纤维诊断的灵敏度和特异性分别为85%和78%，是检测肝纤维化较理想的血清指标。本研究结果与其基本吻合。Bai等[14]研究认为，HBV-DNA是评估肝纤维化的独立指标，HBV-DNA载量与肝纤维化程度呈正相关。本研究结果显示，慢性乙型肝炎患者体内的HA、LN、PC-Ⅲ水平与HBV-DNA、ALT呈正相关。本研究结果与Bai等[14]结果相似，但是在B组患者HA、LN、PC-Ⅲ和HBV-DNA无明显相关性，呈“分离现象”，血清纤维化指标处于较高水平，而HBV-DNA 和ALT处于相对较低水平。

总之，肝功能及HBV-DNA对已纤维化病变的肝脏无明显相关性，血清肝纤维化指标的对慢性乙型肝炎患者长期监测，有利于临床早期发现肝纤维化，及早干预具有积极的临床意义。

参考文献

[1]王全楚,段芳龄.乙肝治疗二十年的回顾与总结[J].胃肠病学和肝病学杂志,2012,21(10):883-886.

[2]陆伦根,胡俊杰.2012年肝纤维化领域的研究进展[J].中华肝脏病杂志,2013,21(2):84-86.

[3]Ming JH,Yih SH,Tzy YC,etal.Hepatitis C virus E2protein induce reactive oxygen species (ROS)-related fibrogenesis in the HSC-T6 hepatic stellate cell line[J].J Cell Biochem,2011,112(1):233-243.

[4]朱倩,乔国梁,晏建军,等.乙肝肝硬化相关早期肝癌切除术预后[J].中华肝胆外科杂志,2014,20(4):258-264.

[5]廖瑞真,刘倚河,林宗跃,等.慢性肝病肝剪切波速与血清肝纤维化标志物在肝纤维化诊断中的对比研究[J].生物医学工程与临床,2012,16(5):458-461.

[6]冯卉,张新力,李猛,等.声触诊组织量化和瞬时弹性成像技术诊断肝纤维化的初步研究[J].中华超声影像学杂志,2010,19(3):227-230.

[7]Kim MY,Baik SK,Jang YO,etal.Serum hyaluronic acid level:correlation with quantitative measurement of hepatic fibrosis in a cirrhotic rat model[J].Korean J Hepatol,2008,14(2):159-167.

[8]Li CH,Piao DM,Xu WX,etal.Morphological and serum hyaluronic acid,laminin and type Ⅳ collagen changes in dimethylnitrosamine-induced hepatic fibrosis of rats[J].World J Gastroenterol,2005,11(48):7620-7624.

[9]张超贤,郭李柯,郭晓凤,等.电针联合贞芪扶正颗粒对肝纤维化大鼠自由基反应、NF-κB活化、TGF-β1和CTGF mRNA表达的影响[J].中国老年学杂志,2014,34(9):2512-2516.

[10]贺乐奇,申春梅,张群峰,等.慢性乙型肝炎病毒复制与肝纤维化血清学指标相关性分析[J].实用预防医学,2014,21(6):740-742.

[11]Xiu L,Chang N,Yang L,etal.Intracellular sphingosine 1-phosphate contributes to collagen expression of hepatic myofibroblasts in human liver fibrosis independent of its receptors[J].Am J Pathol,2014,23(2):2445-2451.

[12]潘爱萍,林英辉,潘元平,等.肝纤维化血清学标志物与肝脏病理相关性研究[J].南方医科大学学报,2007,27(12):1935-1936,1938.

[13]Lu LG,Zeng MD,Mao YM,etal.Relationship between clinical and pathologic findings in patients with chronic liver diseases[J].Word J Gastroenterol,2013,9(12):2796-2800.

[14]Bai H,Liu H,Chen X,etal.Influence of age and HBeAg status on the correlation between HBV DNA and hepatic inflammation and fibrosis in chronic hepatitis B patients[J].Dig Dis Sci,2013,58(5):1355-1362.

Research on the Relationship between Serum Fibrosis Indexes and Liver Function in Patients with Cirrhosis Hepatitis BLUMing-hai，ZHANGJun-yan，YANGHong-wei.(DepartmentofClinicalLaboratory,ShiyanCityTraditionalChineseMedicineHospital,Shiyan442012,China)

Abstract:ObjectiveTo explore the correlation between the serum fibrosis indexes,including hyaluronic acid(HA),laminin(LN),protein collagen-Ⅲ(PC-Ⅲ) and liver function,and assess the sensitivity and specificity of HA,LN and PC-Ⅲ in diagnosing liver fibrosis.MethodsDuring Mar.2012 and Jun.2014,145 patients with hepatitis B in Shiyan City Traditional Chinese Medicine Hospital were selected,including chronic hepatitis B(group A) 63 cases,hepatitis B cirrhosis(group B) 42 cases,chronic hepatitis B virus (HBV) carriers(group C) 40 cases,and 20 cases of for health checkup during the same period were included as control group(group D).ALT was detected by biochemical method;HA,LN,PC-Ⅲ were detected by radioimmunoassay;HBV- DNA load was detected by FQ-PCR.Analysis of fibrosis indexes and its relationship with ALT,HBV-DNA loads of the four groups was conducted.ResultsThe difference of the level of serum HA,LN,PC-Ⅲ in the four groups was statistically significant(P<0.01).The level of serum HA,LN and PC-Ⅲ were the highest in group B compared with group [(475±103) μg/L,(158±43) μg/L,(224±78) μg/L]，compared with A group[(298±23) μg/L,(124±33) μg/L,(186±44) μg/L],C group[(82±22) μg/L,(73±18) μg/L,(145±13) μg/L]and D group[(78±14) μg/L,(68±13) μg/L,(38±10) μg/L]and the difference was statistically significant(P<0.05).HA,LN,PC-Ⅲ and ALT,HBV DNA were positively correlated in group A(P<0.05);HA,LN,PC-Ⅲ and ALT,HBV DNA had no obvious correlation in group B(P>0.05).ConclusionThe serum level of HA,LN,PC-Ⅲ are significantly increases in patients with liver fibrosis,and combined detection in patients with chronic hepatitis B is helpful to early diagnose liver fibrosis and clinical intervention.

Key words:Hepatitis B; Hepatic fibrosis; Hyaluronic acid; Protein collagen-Ⅲ; Hepatic function

收稿日期：2015-01-19修回日期：2015-05-21编辑：伊姗

doi：10.3969/j.issn.1006-2084.2015.24.045

中图分类号：R446.1

文献标识码：A

文章编号：1006-2084(2015)24-4544-03