蔓性千斤拔免疫增强活性部位化学成分研究

卓 燊,乔 雪,秦海洸*

(1.广西科技大学 医学院，广西 柳州545005；2.广西中医药大学，广西 南宁530001)



蔓性千斤拔免疫增强活性部位化学成分研究

卓 燊1,乔 雪2,秦海洸1*

(1.广西科技大学 医学院，广西 柳州545005；2.广西中医药大学，广西 南宁530001)

目的：研究蔓性千斤拔免疫增强活性部位的化学成分。方法：采用硅胶柱层析、反相ODS柱色谱、高效液相色谱法等方法对化合物进行分离、纯化，使用核磁共振等光谱手段确定化合物结构。结果：分离得到6个已知化合物，分别为染料木素(1)、5,7,3',4'-四羟基异黄酮(2)、8-(1,1-二甲基烯丙基)染料木黄酮(3)、鹰嘴豆芽素A(4)、蔓性千斤拔素D(5)、胡萝卜苷(6)。结论：蔓性千斤拔的免疫增强活性部位为乙酸乙酯萃取部位，化合物6为首次从该植物中分离得到。

蔓性千斤拔；活性部位；免疫增强；化学成分

千斤拔为豆科千斤拔属多年生草本植物蔓性千斤拔(FlemingiaphilippinensisMerr.et Rolfe )的干燥根，属于瑶族常用药之一。现代药理研究表明，千斤拔具有抗炎、镇痛、保护周围神经损伤等作用，对于其免疫增强作用少有报道[1]。因此，本课题组通过NK细胞活性测定、ConA诱导的淋巴细胞转化率实验和小鼠碳廓清实验法确定了蔓性千斤拔的免疫增强活性部位为乙酸乙酯萃取部位，之后对此部位进行化学成分研究，从中分离鉴定出6个化合物。其中，化合物6为首次从该植物中分离得到。

1 仪器与材料

Bruker ARX-300/600MHz超导核磁共振仪(Bruker公司)；旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；Sephadex LH-20(Pharmacia公司)；ODS 硅胶(Merck公司)；薄层色谱用硅胶GF254、柱色谱硅胶(青岛海洋化工厂)；试剂均为分析纯。千斤拔药材购自云南省玉溪市，经鉴定为蔓性千斤拔。

2 千斤拔的提取与分离

取蔓性千斤拔药材5kg，适当粉碎。用10倍量蒸馏水浸泡过夜，加热回流提取3次，每次0.5h，过滤后合并提取液。将提取液进行减压浓缩至适量，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯萃取，分别减压浓缩成浸膏，晾干，称重，备用。

取乙酸乙酯萃取物130g，使用开放硅胶柱色谱法分离，用二氯甲烷-甲醇进行梯度洗脱，合并相同流分。用开放ODS柱色谱、凝胶柱色谱等反复分离纯化，得到化合物1-6。

3 结构鉴定

化合物1:无色针晶(丙酮)，mp 297～299℃。1H-NMR(600MHz，C3D6O) δ: 8.18(1H,s,H-2),6.39(1H,d,J=2.1Hz,H-6),6.25(1H,d,J=2.1Hz,H-8),7.46(2H,d,J=8.3Hz,H-2',6'),6.92(2H,d,J=8.3Hz,H-3',5');13C-NMR(150MHz,C3D6O) δ:155.2(C-2),124.8(C-3),180.1(C-4),170.5(C-5),104.9(C-6),167.8(C-7),97.5(C-8),160.1(C-9),108.2(C-10),124.2(C-1'),133.5(C-2',6'),116.5(C-3',5'),161.3(C-4')。数据与文献[2]报道基本一致,因此确定为染料木素。

化合物2:黄色针晶(甲醇)，mp 268～ 270 ℃。1H-NMR (600MHz，CDCl3)δ：8.20(1H,s,H-2),6.43(1H,d,J=2.2 H z,H-6),6.24(1H,d,J =2.2 Hz,H-8),7.11(1H,d,J =8.2,H-5'),7.62(1H,d,J =8.2Hz,H-6');13C-NMR(150MHz，DMSO-d6) δ:158.2(C-2),124.1(C-3),184.2(C-4),165.4(C-5),103.1(C-6),167.8(C-7),97.1(C-8),164.3(C-9),108.8(C-10),113.4(C-1'),107.5(C-2'),160.3(C-3'),159.8 (C-4'),110.7(C-5'),135.5(C-6')。数据与文献[3]报道基本一致 ，故鉴定为5,7,3',4'-四羟基异黄酮。

化合物3:黄色块晶(甲醇)。1H-NMR (600MHz，CDCl3) δ：7.85 (1H,s,H-2),6.27 (1H,s,H-6),7.34(2H,d,J=8.5 Hz,H-2',6'),6.89 (2H,d,J=8.5 Hz,H-3',5');13C-NMR(CDCl3,120MHz): 150.2(C-2),122.5(C-3),180.4(C-4),160.1 (C-5),101.2(C-6),161.1(C-7),108.9 (C-8),155.6 (C-9),106.3(C-10),122.1 (C-1'),129.5 (C-2',6'),115.2 (C-3',5'),155.4 (C-4'),40.3 (C-1''),147.9 (C-2''),112.8(C-3''),26.9 (C-4'',2)。与文献[4]报道数据基本一致，故鉴定该化合物为8-(1,1-二甲基烯丙基)染料木黄酮。

化合物4:黄色针晶(甲醇)。1H-NMR (600MHz，DMSO-d6) δ:3.62 (3H,s,4'-OCH3),6.17 (1H,d,J=1.5Hz,H-6),6.28 (1H,d,J=1.5Hz,H-8);13C-NMR (120MHz,DMSO-d6): 152.8 (C-2),120.5 (C-3),178.9 (C-4),161.2 (C-5),97.8 (C-6),163.4 (C-7),93.1 (C-8),156.2 (C-9),103.2 (C-10),121.7 (C-1'),128.8 (C-2'),112.1 (C-3'),158.2 (C-4'),113.1 (C-5'),129.6 (C-6'),55.5 (-OCH3)。与文献[5]报道的数据基本一致，故鉴定为鹰嘴豆芽素A。

化合物5:白色粉末(甲醇)。1H-NMR (600MHz，CDCl3) δ： 2.97(2H,m,H-3),6.51(2H,s,H-3',5'),1.79(3H,s,4''-CH3),1.83(3H,s,5''-CH3);13C-NMR (CDCl3,120MHz):78.8 (C-2),43.5 (C-3),197.8 (C-4),161.2 (C-5),108.4 (C-6),158.5 (C-7),108.1 (C-8),163.2 (C-9),103.4 (C-10),117.3 (C-1'),156.6 (C-2'),104.9 (C-3'),158.3 (C-4'),109.2 (C-5'),128.6 (C-6'),22.8 (C-1''),123.1 (C-2''),134.9 (C-3''),19.4 (C-4''),27.3 (C-5''),22.6 (C-1'''),123.4 (C-2'''),136.3 (C-3'''),19.2 (C-4'''),26.5 (C-5''')。数据与文献[6]报道基本一致，故鉴定为蔓性千斤拔素D。

化合物6:白色粉末(甲醇)。1H-NMR (600MHz，CD3OD) δ：5.48(1H,d,J =5.3,H-6),4.51(H,d,J =7.2Hz,H-1'),3.32(2H,q,J =5.8,H-2',3'),3.45( 1H,q,J= 4.2Hz,H -4'),3.24(1H,m,H-5' ) ;13C-NMR (120MHz,CD3OD): 36.7(C-2),31.5(C-3),41.5(C-4),139.1(C-5),121.3(C-6),31.2(C-7),31.2(C-8),49.9(C-9),35.7(C-10),20.1(C-11),37.9(C-12),42.0(C-13),56.8(C-14),22.6(C-15),27.7(C-16),55.1(C-17),10.2(C-18),17.9(C-19),35.4(C-20),18.3(C-21),33.2(C-22),25.4(C-23),44.9 (C-24),28.6(C-25),18.8(C-26),18.5(C-27),21.9(C-28),11.7(C-29),100.4(C-1'),73.2(C-2'),75.5(C-3'),68.9(C-4'),76.3(C-5'),61.6(C-6') 。与文献[7]数据基本一致，故鉴定为胡萝卜苷。

[1] 张丽霞,彭建明,马洁.千斤拔研究进展[J].中药材,2007,30(7):887-890.

[2] 冯洁,向诚,梁鸿.丰城鸡血藤异黄酮类成分的研究[J].中国中药杂志,2007,32(4):321.

[3] 张雪,宋启示.锈毛千斤拔根的化学成分研究[J].中草药,2009,40(6):865-868.

[4] EUN-MIAHNA,NORIO NAKAMURAA,TERUAKIAKAOB.Prenylated flavonoids from moghaniaphilippinensis[J].Phytochemistry,2003(64):1389-1394.

[5] 谌欣.红车轴草异黄酮的分离及生物活性的研究[D].武汉:武汉工业学院，2008.

[6] 李华,李凤岚,马小军.千斤拔异戊烯基黄酮研究[C].中国药学会学术年会暨第八届中国药师周论文集,2008.

[7] 李文武,丁立生,李伯刚.苎麻根化学成分的初步研究[J].中国中药杂志,1996,21 (7):321.

(责任编辑：宋勇刚)

2015-06-12

广西壮族自治区卫生厅自筹经费科研课题(Z2012602)； 广西壮族自治区教育厅一般资助项目(2013YB289)；广西植物功能物质研究与利用重点实验室主任基金项目(FPRU2014-8)；广西科技大学科学基金项目合同(校科医1307201)

卓燊(1975-)，女，广西科技大学主管中药师，研究方向为中药药效成分。

秦海洸(1970-)，男，广西科技大学教授，研究方向为中医药治疗皮肤病、性病。

R284.1

A

1673-2197(2015)21-0026-01

10.11954/ytctyy.201521011