□ 蒯 霞
肌酐是肌酸和磷酸肌酸代谢的终产物,它主要由肌肉中磷酸肌酸的非酶促反应生成。对正常成人来说,每日产生肌酸酐的量是恒定的,而且肌酸酐的产生量与肌肉量成正比,因此一般男性的数值比女性高一点。经常锻炼肌肉者和非素食者的数值也较高。肌酸酐的产生量一定,而且不会在过滤后被肾小管重吸收。它的排泄量反映血液中的肌酸酐含量和肾小球的过滤速率,也就是肾脏的机能。当肾发生严重病变时,肌酸酐排泄受阻,血液中肌酸酐含量升高。血液中肌酸酐的测定,可以知道肾功能是否有严重障碍,肌酸酐的值越高,肾脏的障碍越大;但是血液肌酸酐只有在肾脏有严重障碍时才会大幅提高,不能作为早期肾脏病的指标。同时肌酐值也是作为其他检测项目的校正值。
肌酐与过量苦味酸在碱性条件下反应生成橙红色苦味酸肌酐。在波长492nm处比色定量。
10ml的采尿管;10ml的具塞比色管;96孔板、酶标仪MULTISKAN MK3;加样枪 5ml、1ml、100ul,枪头;振荡器。
(一)饱和苦味酸。称取苦味酸(A.R)15克,置于大烧杯中,加蒸馏水1,000ml,冷却后有结晶析出,表示已达饱和,倾出上清夜备用。此液标准饱和度的测定—准确取清夜10ml,用0.1%酚酞作指示剂,以0.1N的氢氧化钠(NaOH)滴定需5.2~5.4ml应能中和为准。
(二)2.5N的氢氧化钠溶液。称取氢氧化钠(NaOH)100克,加蒸馏水使溶解,冷却后用蒸馏水稀释至1升。
(三)碱性苦味酸。准确量称取饱和苦味酸5份,加2.5N的氢氧化钠1份,应用时即配即用为宜。
(四)肌酐标准储备液(1mg/ml)。准确量称取纯肌酐500mg,用0.1mol/L盐酸溶解,然后移至500ml的容量瓶中,加0.1mol/L盐酸至刻度。加甲苯数滴防腐,存于冰箱,此溶液稳定,可长期保存。
(五)肌酐标准应用液(0.01mg/ml)。准确量取3ml标准储备液,置于500ml的容量瓶中,加水稀释至刻度(此溶液可保存一周以上)。
(一)样品处理。取0.1ml尿样置于10ml比色管中,加水至3ml。
(二)试剂空白。取3ml水置于10ml比色管中。
(三)绘制标准曲线。取8支比色管,按表1配制。
表1
向各管加入2.0ml碱性苦味酸,混匀,于室温下反应20~30min,加 5ml水,混匀,备用。
将96孔板每孔先加入0.1ml水,再从比色管中取0.1ml溶液加入。放入酶标仪度数。根据吸光度计算。
相比WS/T97-1996尿中肌酐分光光度测定方法,线性范围扩大为0~3g/L,可以同时检测大量样品。
图1 改良后的标准曲线
图2 改良前的标准曲线
改良过后的方法与之前的方法所测的肌酐值在0~1g/L,区间内差不多一样。高于1的用722分光光度计做不出来,已经不成线性。
改良后的方法可以对大量的样品进行同时度数,且检测范围也扩大了,有助于高值的检测。正常人尿液当中的肌酐范围在0.35~2.25g/L。但是有时候检测的尿样中肌酐含量超过3g/L,所以该良好的方法有助于更好地检测尿液中的肌酐。此外,改良过后的方法可以同时检测大批样品,节约时间,解放劳动力。总之改良好的方法既节约了时间和人力也提高了准确度和检测范围。
尿液中肌酐升高或降低都说明机体可能发生病变,例如升高以后会出现夜尿增多、乏力、口渴、身上出现浮肿、血压升高、心力衰竭、肺水肿等症状,这是水代谢失衡的表现。降低可能是因为患者肾脏内发生了纤维化,而纤维化导致肾脏固有细胞损坏,破坏了肾脏固有细胞的组织结构,损伤了肾功能。