大麻药总皂苷滴丸制备工艺及溶出度研究

陈旅翼，解锦勃，兰 洲，林淑华，胡 超，邓旭坤，林亲雄

(1中南民族大学 药学院，武汉430074；2 湖北中医药大学 药学院，武汉430065)

大麻药总皂苷滴丸制备工艺及溶出度研究

陈旅翼1，解锦勃1，兰 洲2，林淑华1，胡 超1，邓旭坤1，林亲雄1

(1中南民族大学 药学院，武汉430074；2 湖北中医药大学 药学院，武汉430065)

为确立大麻药总皂苷滴丸的最佳成型工艺并考察其溶出度，以滴丸的成型率为评价指标，对大麻药滴丸基质与冷却剂的选择、大麻药与基质的配比、滴制的温度、滴距、滴速进行了单因素分析，并在此基础上以正交试验通过丸重差异、溶散时限和外观质量3个指标对上述主要影响因素进行了优选，采用转篮法和HPLC测定了其溶出度和含量.结果表明：大麻药总皂苷滴丸的最佳工艺条件为B3A1C1D2，即药物基质质量比为1∶4，PEG4000-PEG6000基质质量比为2∶1，滴制温度为70℃，滴距为5 cm，此条件下滴丸各项指标最好.说明该工艺简便可行，评价指标可靠合理，滴丸溶出度良好，符合2010年版中国药典对滴丸制剂的要求.

大麻药总皂苷；滴丸；制备工艺；正交试验；溶出度

大麻药(DolichosfalcateKlein)为豆科镰萹豆属植物，药用根茎，别名麻里麻、麻三段、豆叶百步还阳等[1]，分布于我国云南、四川、甘肃等地，尤以云南为多.本品性辛、麻、温，有毒，具有祛风活血、止血止痛等功效.在云南民间主要用于骨折、跌打损伤、风湿疼痛，治疗外伤出血，能抗癌、利尿[2-4].

大麻药总皂苷为其主要活性成分[5,6].皂苷类成分一般口服吸收较差，生物利用度低[7]，对胃肠道刺激性较大[8,9]，不适宜做成普通的散剂或片剂等.而滴丸具有制备设备简单、操作方便、工艺周期短、生产效率高、质量稳定、剂量准确的优点，其服用量小、起效快、生物利用度高[10,11].本文采用固体分散技术将大麻药制成滴丸，缩短了药物的溶散时限，改善了口感，提高了生物利用度，并降低了胃肠道的刺激性.

1 材料与仪器

1.1 材料

PEG4000、PEG6000(天津市博迪化工有限公司)，二甲基硅油、液体石蜡、甘油(天津博迪化工股份有限公司)，菜籽油(多琦, 食用型, 湖北华饴木本油脂有限公司)，大麻总皂苷(自制, 批号20131025, 纯度>60%)，大麻药苷B(自制, 批号20120705,纯度>98%).

1.2 仪器

分析天平(PL403, METTLER TOLEDO, 梅特勒托利多仪器)，智能药物溶出试验仪(RCZ-6B3型, 上海楚柏实验室设备有限公司)，高效液相色谱仪(戴安Ultimate 3000分析型液相色谱仪)，Phecda C18色谱柱(汉邦科技，2.1 mm×150 mm, 3 μm)，高功率数控超声波清洗器(KQ-400KDE型, 昆山市超声仪器有限公司)，螺旋测微器(北京第二量具厂).

2 方法与结果

2.1 滴丸制备单因素分析

2.1.1 基质的选择

大麻药总皂苷水溶性常温下较小，热水中较大.故选用水溶性较好的PEG类基质来研制滴丸，以基质种类和配比设计空白实验方案，以滴丸成型效果作为判定指标，其他条件相同，结果见表1.由表1可知，当PEG6000与PEG4000按质量比为2∶1, 1∶1, 1∶2时滴丸成型效果较好，故选择上述配比作为正交实验中因素A水平.

2.1.2 冷却剂的选择

以多琦菜籽油、液体石蜡和二甲基硅油为冷却剂，其他条件相同，进行滴丸剂的滴制.以滴丸沉降速度、外观形状为指标，结果见表2，由表2可见，多琦菜籽油为冷却剂时滴丸外观最圆整，故选用多琦菜籽油作为大麻总皂苷滴丸剂制备的冷却剂.

2.1.3 药物与基质比例的筛选

称取一定量的PEG6000和PEG4000于蒸发皿中，其中PEG6000和PEG4000质量比分别为1∶1，1.5∶1.5，1∶2，1∶3 .再向蒸发皿中分别加入大麻药总皂苷药粉2, 1.5, 1, 1 g，使得药物与基质的质量比分别为1∶1，1∶2，1∶3和1∶4，其他条件相同，考察各种配比药液的融合情况、粘稠度和滴制难易程度，结果见表3.由表3可知，当基质与药物质量比小于2∶1时药液很粘稠，难以融合，无法滴制，故确定基质与药物的最小质量为2∶1，同时为了控制滴丸中基质的含量，最大比例控制为4∶1，最终确定基质与药物的比例为2∶1, 3∶1, 4∶1作为B因素的3个水平.

2.1.4 药液温度、滴距、滴速的选择

主药与PEG6000、PEG4000 质量比为1∶2∶1，冷凝液为多琦菜籽油，其他条件均一致，分别以滴制温度(70, 80, 90 ℃)，滴距(3,5,7 cm)，滴速(20, 30, 40滴/min)设计实验，以其成型率为考察指标.结果表明：滴制温度、滴距对滴制效果影响较大，最佳温度为80℃，最佳滴距为5 cm，而滴速对成型工艺研究影响不是很大.综上最终确定滴速为30滴/min，以70, 80, 90 ℃的滴制温度作为C因素的3个水平，以3, 5, 7 cm的滴距作为D因素的3个水平.

2.2 滴丸制备工艺研究

2.2.1 正交因素水平设计

选择对滴丸成型工艺影响较大的4个因素，即PEG6000-PEG4000质量比(A)、主药与基质质量比(B)、滴制温度(C)、滴距(D)，每个因素选择3水平，采用L9(33)正交实验法对滴丸成型工艺参数进行研究.正交实验因素水平表设计见表4.

2.2.2 实验指标计算

选取丸重差异、溶散时限和外观评分3个指标来考察滴丸制备工艺参数.丸重差异：任取滴丸20粒，精密称定每粒滴丸的重量，计算20粒滴丸的重量平均值、标准差和变异系数. 溶散时限：任取滴丸6粒，按2010版《中国药典》一部附录XIIA崩解时限检查方法中滴丸剂进行检查，记录每粒滴丸的溶散时限，计算6粒滴丸溶散时限的平均值、标准差和变异系数.外观评分：以大小均一、色泽一致、圆整、成型率及相互不粘连为满分10分，其中每项各占2分，逐项评分后再总分，计算3人评分的平均值、标准差和变异系数.

2.2.3 正交实验结果分析

正交9个实验所制的滴丸的外观评分、溶散时限和丸重差异的结果见表5.

2.2.4 外观评分结果分析

外观评分的直观分析结果见表6，4个因素的极差大小排序为B>A>C>D.采用极差最小的D因素作为误差项进行方差分析，其他3个因素均不具备显著性(p>0.05, 见表7),其中A1>A3>A2、B3>B2>B1、C1>C3>C2，滴距因素中以D1得分较高，故采用外观评分作为指标优选的最佳工艺为B3A1C1D1，即药物基质质量为1∶4，基质质量为2∶1，滴制温度为70℃，滴距为3cm.

2.2.5 溶散时限结果分析

溶散时限的直观分析结果见表 8，4个因素的极差大小排序为A>D>B>C.采用极差最小的C因素作为误差项进行方差分析，B因素具有显著性差异(p<0.05,见表9)，且B30.05)，其中A1

2.2.6 丸重差异结果分析

由丸重差异的直观分析结果(表10)可见，4个因素的极差大小排序为A>C>B>D.采用极差最小的D因素作为误差项进行方差分析，其他3个因素均不具有显著性差异(p>0.05, 见表 11)，其中B3

2.2.7 滴丸制备工艺参数确定

以外观评分、溶散时限、丸重差异为指标优选的最佳工艺分别为B3A1C1D1，B3A1C3D2，B3A1C2D3.药物制剂过程须着重考虑药效和成本两个因素.考虑药效，溶散时限对其影响较大，故滴距项选择D2；节约成本，降低能耗考虑，滴制温度选择D1.故大麻药总皂苷滴丸制备的最佳工艺确定为B3A1C1D2，即药物基质质量比为1∶4，基质质量为2∶1，滴制温度为70 ℃，滴制距离为5 cm.

2.2.8 滴丸制备工艺小试验证

按B3A1C1D2滴丸制备工艺参数制备了3批小试滴丸(批号1312181, 1312182, 1312183)，通过外观评分、丸重差异和溶散时限指标测试后证明该滴丸制备工艺稳定可行.

2.3 滴丸溶出度考察

本品制备工艺研究表明，滴丸水溶性较好，丸重规格较小，考虑含量测定中进样浓度等因素，以每次服用量8粒为单位，选择250 mL磷酸盐缓冲溶液(pH=7.4)为溶出介质，每次取样1 mL，进行相关处理后测定溶出度，因大麻药总皂苷主要药效成分为大麻药苷B，其纯度为70%，故选择测定大麻药苷B含量来考察大麻药总皂苷滴丸的溶出度.

2.3.1 对照品储备液制备

精密称定100 mg大麻药苷B，置于100 mL容量瓶中，加少量甲醇超声溶解，再加甲醇定容，制备成浓度为1000 μg/mL的对照品储备液.

2.3.2 供试品配制

精密称取12 mg磨碎的滴丸，溶于10 mL容量瓶中，配制成供试品溶液.

2.3.3 色谱条件

Phecda C18色谱柱(2.1 mm× 150 mm, 3 μm)，柱温25℃，流动相：A为0.1%乙酸乙腈溶液，B为0.1%乙酸溶液，梯度洗脱条件：0 ～16 min，A-B (30∶70→62∶38)；16～18 min，A-B (62∶38→30∶70)；18～20 min，A-B (30∶70)为流动相；检测波长为215 nm；流速0.3 mL·min-1.

2.3.4 标准曲线绘制

将对照品储备液，分别精密量取0.3, 0.5, 1, 1.2, 1.5, 2 mL定容至5 mL容量瓶中.吸取上述不同浓度的对照品溶液10 μL，进HPLC得到对应的峰面积，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制曲线.曲线方程为y=723.18x+2.3912，线性范围60 ～ 400 μg/mL，相关系数r=0.9999，方程可用.

2.3.5 精密度试验

将浓度为200 μg/mL的对照品溶液，连续进样6次， RSD为0.37 %，表明精密度良好.

2.3.6 重复性试验

取供试品溶液连续进样6次， RSD为0.33 %，表明重复性良好.

2.3.7 稳定性试验

取供试品溶液，过0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液上液相，进样量10 μL，分别在0, 1, 4, 8, 12, 24 h进样测定含量，供试品在24 h内含量RSD为0.68 %，表明稳定性良好.

2.3.8 加样回收试验

精密称取9份3 mg已磨碎滴丸，分别加入1.8, 2.2, 2.6 mL对照品各3份，溶于2.5 mL容量瓶中，平行操作9次，上液相检测，每份溶液测定3次，结果显示，3组平均回收率分别为103.2%,101.5%,101.3%，RSD为1.02%，符合试验要求.

2.3.9 含量测定

将3次重复工艺制备得到的滴丸磨碎，分别精密称取约12 mg，置于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解和定容，过0.45 μm微孔滤膜，取续滤液上液相检测大麻药苷B的峰面积，每份溶液平行测定3次，算得平均值14.09%，RSD为0.45%，即滴丸中的大麻药苷B含量为14.09%.

2.3.10 溶出度测定

按照中国药典2010年版一部附录溶出度测定项下的方法测定溶出度，平行检测3批(1312181, 1312182, 1312183).以磷酸盐缓冲溶液(pH=7.4)作为溶出介质，维持温度(37±0.5)℃，转速(100±1) r/min，分别在5, 10,15,30,45,60 min取样，同时立即补充等量新鲜介质，试样过0.45 μm微孔滤膜，续滤液上液相检测大麻药苷B峰面积，再按标准曲线计算药物的累积释放量，结果见表12，表明滴丸体外溶出明显加快，60 min内滴丸累积释放量达到95%，说明该法制备的滴丸符合药典的相关规定.

3 结论

(1) 大麻药总皂苷滴丸的最佳工艺条件为：药物基质质量为1∶4，基质质量为2∶1，滴制温度为70℃，此条件下，滴丸各项指标最好.该工艺简便可行，评价指标可靠合理，滴丸成型性好，符合2010年版中国药典对滴丸制剂的要求.

(2) 最佳工艺条件下所制备的滴丸平均重量为45 mg，其中大麻药苷B含量达到14.09%，即每丸中含有6.3 mg大麻药苷B.已建立的色谱方法能满足对大麻药总皂苷滴丸中大麻药苷B的含量测定要求.

(3) 溶出度实验表明：在磷酸缓冲盐(pH=7.4)的条件下，有较好的溶出速率，说明大麻药总皂苷滴丸在正常肠道内的溶出良好.

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Study on the Preparation Process and Dissolution Rate of Dropping
Pills of Total Saponin inDolichosfalcateKlein

Chen Lüyi1, Xie Jingbo1, Lan Zhou2, Lin Shuhua1, Hu Chao1, Deng Xukun1, Lin Qinxiong1

(1 College of Pharmacy, South-Central University for Nationalities, Wuhan 430074, China；2 College of Pharmacy, Hubei University of Chinese Medicine, Wuhan 4300765, China)

To investigate the optimum preparation process and the dissolution rate of the dropping pills of total saponin inDolichosfalcateKlein, the briquetting rate of the dropping pills was used to evaluate the various processing factors, such as the choice of substrate and refrigerant, the proportion of substrate to drug, the processing temperature, the dropping distance and dropping speed. The preparation process was optimized according to the pill weight variation, the dissolution time limit, and the pill′s appearance via an orthogonal test. The dissolubility and the content of dropping pills was also determined by rotating basket and HPLC method. The results indicated that the optimum preparation process wasB3A1C1D2, viz., a proportion of substrate to drug of 1∶4, a proportion of PEG4000 to PEG6000 of 2∶1, a processing temperature of 70°C, and a dropping distance of 5 cm. The technique was simple and reproducible, and the evaluation indexes were reliable and reasonable. The dropping pill thus prepared fully met the requirements for dropping pill as described in the 2010 edition of China Pharmacopoeia with good dissolution.

total saponin inDolichosfalcateKlein; dropping pills; preparation process; orthogonal test; dissolution rate

2014-05-30

陈旅翼(1983-)，男，讲师，博士，研究方向：有毒民族药物，E-mail：clyhappy05@163.com

国家自然科学基金资助项目(81303284，81403157)；武汉市青年科技晨光计划资助项目(2015070404010183)；湖北省自科基金创新群体资助项目(2013CFA013)

R283

A

1672-4321(2015)04-0053-05