TTF-1、SPA表达与Ⅱ期肺腺癌患者术后复发及生存关系的研究

吕昕 王悦红 周建英

TTF-1、SPA表达与Ⅱ期肺腺癌患者术后复发及生存关系的研究

吕昕 王悦红 周建英

目的 探讨甲状腺转录因子-1（TTF-1）、肺表面活性物质A（SPA）的表达与Ⅱ期肺腺癌患者术后复发及生存的相关性。方法 收集经根治手术治疗的104例Ⅱ期原发性肺腺癌患者资料，采用免疫组化法综合染色强度和阳性细胞所占比例进行半定量测定肿瘤组织的TTF-1、SPA表达，分析两者与患者术后复发及生存的相关性。结果 TTF-1阳性表达患者术后2年复发率较阴性表达患者低[61.2%（60/98）vs 83.3%（5/6）]，术后生存期较长[（26.00±1.89）个月vs（22.00±8.76）个月]，但差异均无统计学意义（均P＞0.05）。SPA阳性表达患者术后2年复发率较阴性表达患者明显为低[54.8%（34/62）vs 79.2%（19/24）]，术后生存期明显较长[（30.00±1.41）个月vs（21.00±2.18）个月]，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论 SPA阳性表达预示Ⅱ期原发性肺腺癌患者术后2年复发率低，生存期长。TTF-1表达与Ⅱ期肺腺癌患者术后复发及生存有一定的相关性。

肺腺癌 甲状腺转录因子1 表面活性物质蛋白A 复发

可经手术治疗的Ⅱ期非小细胞肺癌（NSCLC），尤其是肺腺癌，术后仍有较高的复发率。如何发现并确认一些为数不多的分子标志物，以期来评估预后、预测治疗疗效一直是研究的热点。作为肺腺癌的特异性标志蛋白的甲状腺转录因子-1（thyroid transcription factor-1，TTF-1）已受到广泛关注，其参与调控表面活性物质A（surfactant protein-A，SPA）表达。目前TTF-1、SPA与肺腺癌患者手术治疗预后相关性的研究报道不多。为了评价两者与Ⅱ期肺腺癌患者术后复发与生存的关系，我们对本院近年来收治的104例患者进行随访和研究，现将结果报道如下。

1 对象和方法

1.1 对象 2007年9月至2011年8月在本院接受根治手术治疗并符合下述纳入标准的原发性肺腺癌患者共104例：（1）手术组织病理诊断明确为原发性肺腺癌；（2）参照UICC/IASLC第7版非小细胞肺癌指南进行术后TNM分期为Ⅱ期；（3）手术治疗前未进行化疗或放疗等抗肿瘤治疗；（4）有TTF-1和/或SPA的免疫组化检测结果记录。104例患者中，男56例，女48例，年龄35～78(61.23±9.72)岁；末次随访时间为2013年8月或术后60个月或出现死亡终点事件。术后复发判断均经影像学检查证实。

1.2 TTF-1、SPA表达检测 采用免疫组化SP法测定肺腺癌组织标本中TTF-1、SPA的表达。由两位高年资的病理科医师对免疫组化结果进行核实。TTF-1以细胞核染为棕黄色或棕褐色为阳性细胞（图1），SPA以细胞质出现棕黄色颗粒为阳性细胞（图2）。每个切片随机观察5个高倍视野，按阳性细胞百分比以及染色的强弱两部分来判读结果，阳性细胞≤5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，＞50%为3分；染色程度无着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；两项指标的评分相乘，0～1分为阴性（-），2～3分为弱阳性（+），4～6分为中度阳性(++)，7～9分为强阳性（+++）。0～1分判为阴性组，2～9分判为阳性组。104例手术标本均进行了TTF-1检测，86例同时有SPA检测结果。

图1 肺腺癌TTF-1阳性（免疫组化SP法，×100）

图2 肺腺癌SPA阳性（免疫组化SP法，×100）

1.3 统计学处理 采用SPSS 17.0统计软件，计量资料以表示，组间比较采用t检验；率的比较采用χ2检验；采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线，单因素分析采用log-rank检验，多因素分析采用Cox比例风险回归模型进行。

2 结果

2.1 不同TTF-1、SPA表达患者术后复发率的比较 104例患者中TTF-1表达阳性98例（94.2%），86例有SPA检测结果的患者中，SPA表达阳性62例（72.1%）。72例（69.2%）完成术后辅助化疗2～6个周期，方案均为联合铂类两药化疗（Pemetrexed、Gemcitabine、Docetaxel等）。104例患者中，65例（62.5%）术后2年内复发，其中TTF-1阳性组复发率为61.2%（60/98），TTF-1阴性组复发率为83.3%（5/6），两组复发率的差异无统计学意义（连续校正χ2=0.424，P＞0.05）。86例有SPA检测结果的患者中53例（61.6%）术后2年内复发，其中SPA阳性组复发率为54.8%（34/62），SPA阴性组复发率为79.2%（19/24），两组复发率的差异有统计学意义（χ2= 4.330，P＜0.05）。

2.2 不同TTF-1、SPA表达的术后复发患者术后生存期比较 65例术后复发患者中男36例，女29例，年龄35～76（62.80±8.80）岁；术后生存时间为4～54个月。其中55例患者随访至死亡终点，有完整生存资料。TTF-1阳性组生存时间为（26.00±1.89）个月，TTF-1阴性组为（22.00±8.76）个月，两组的差异无统计学意义（χ2= 1.516，P＞0.05）。SPA阳性组生存时间为（30.00±1.41）个月，SPA阴性组为（21.00±2.18）个月，两组的差异有统计学意义（χ2=12.087，P＜0.05）。

2.3 不同TTF-1、SPA表达的术后复发患者生存分析 不同TTF-1表达的术后复发患者的生存曲线见图3，不同SPA表达的术后复发患者的生存曲线见图4。

图3 不同TTF-1表达的术后复发患者的生存曲线

图4 不同SPA表达的术后复发患者的生存曲线

由图3可见，TTF-1阴性组生存曲线较TTF-1阳性组下移，但两组比较差异无统计学意义（χ2=1.516，P＞0.05）；由图4可见，SPA阴性组生存曲线明显降低，两组比较差异有统计学意义（χ2=12.087，P＜0.05）。在调整了年龄、性别、肿瘤大小和N分期等病理特征后，Cox比例风险回归模型分析显示，SPA阴性表达是预后不良的预测因素。

3 讨论

TTF-1也称为NKX2.1，主要存在于肺泡Ⅱ型上皮细胞以及Clara细胞中，参与调控SPA、SPB的表达，在甲状腺、肺、前脑的发育过程中发挥重要作用。目前，在临床上已将其作为肺腺癌组织特异性标志蛋白，用于鉴别肺腺癌与鳞癌，以及原发性与转移性肺癌[1-2]，大部分（70%～100%）原发性肺腺癌中TTF-1表达阳性，本组患者TTF-1阳性表达率为94.2%。

已有研究发现TTF-1与NSCLC预后相关，但无明确定性[3-4]，但大部分研究倾向于TTF-1阳性表达是NSCLC患者有利的预后因素[4-5]。有4项研究发现，早期NSCLC患者TTF-1染色与肺腺癌较长生存期相关[6-9]。Barlési等[10]分析了106例Ⅰ～Ⅳ期肺腺癌患者的资料后发现，TTF-1强阳性与总生存期密切相关。本研究中，TTF-1阳性表达患者复发率低于TTF-1阴性表达患者（61.2%vs83.3%），生存期长也长于后者[（26.00±1.89）个月vs（22.00±8.76）个月]，虽然差异无统计学意义（可能本研究样本数较少之故），但似有一定的趋势。关于TTF-1表达与肺癌生存期关系的机制尚不清楚，基础研究显示，TTF-1的转录靶向因子肌球蛋白结合蛋白能抑制Rock1基因并且负向调节肌动球蛋白的结构，减少单个细胞的游动，增加集体细胞的迁移，最终减少细胞的侵袭力和转移[11]。也有研究显示，TTF-1能抑制Ki-67的表达，并且诱导细胞调亡[12]。

SPA是肺呼吸上皮细胞分泌的一种糖蛋白，属于胶凝素家族的重要成员，参与维持肺表面活性物质功能及调节免疫功能等，也是临床诊断腺癌的特异性标志物，与肿瘤分化程度相关[2]。Jiang等[13]的研究表明，Ⅰ期NSCLC患者SPA低表达提示术后复发时间短，预后差。Tsutsumida等[14]的研究显示，SPA低表达的微乳头腺癌预后差。本研究结果显示，SPA阳性表达患者复发率明显低于SPA阴性表达患者（54.8%vs79.2%），差异有统计学意义。术后复发患者的生存分析同样显示SPA阳性表达患者较SPA阴性表达患者生存期长[（30.00± 1.41）个月vs（21.00±2.18）个月]。因此，SPA可作为Ⅱ期术后肺腺癌患者预后良好的指标。但关于SPA表达与生存期相关的具体机制有待进一步研究。

有文献报道肺癌患者的局部复发多发生在术后2年内，本研究结果显示：Ⅱ期肺腺癌术后2年内复发率在60%左右。这可能与纳入本研究的患者中30.8%未行术后辅助化疗有关。Ⅱ期肺腺癌患者较高的术后复发率应引起临床医师的高度关注。TTF-1、SPA表达阴性患者倾向于更高的术后2年复发率和较短的术后复发生存时间，应密切随访处理，以便为患者争取到更多的生存时间。由于本研究样本量较小，上述结论还需要进一步扩大样本数进行前瞻性研究来验证。

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Correlation between expression of TTF-1 and SPA and the recurrence and prognosis in postoperative stageⅡlung adenocarcinomas

LV Xin,WANG Yuehong,ZHOU Jianying.
Department of Respiratory,the First Affiliated Hospital,Zhejiang University School of Medicine，Hangzhou 310003,China

Objective To investigate the correlation between exp ression of thyroid transcrip tion factor-1 and surfactant p rotein-A in tumor tissues and the recurrence and p rognosis in postoperative stageⅡlung adenocarcinomas.Methods A totalof 104 stageⅡlung adenocarcinoma patients after rad ical operation were analyzed.Exp ression TTF-1 and SPA in Tumor tissues were analyzed by immunohistochem istry,inc luding staining intensity and percentage of positive cells.Afterwards we evaluateed the correlation between both of them and the recurrence rate of postoperation and the survival time.Results Patients w ith positive TTF-1 exp ression had lower 2-year recurrence rate than the negative ones[61.2%（60/98)vs 83.3%(5/6）]and had longer survivalbenefits(26.00±1.89mo vs 22.00±8.76mo),butboth of the difference were notstatistically significant(P＞0.05). Patients w ith positive SPA exp ression significantly had lower 2-year recurrence rate than the negative ones[54.8%(34/62)vs 79.2%(19/24)]and had much longer survivalbenefits(30.00±1.41mo vs 21.00±2.18mo).Both of the difference were statistically significant(P＜0.05).Conclusion For the postoperative stageⅡlung adenocarcinomas,the patients w ith positive SPA exp ression had the lower 2-year recurrence rate and longer suvival time.Also there was a certain correlation between exp ression of TTF-1 and the recurrence and survivalin postoperative stageⅡlung adenocarcinomas.

Lung adenocarcinoma Thyroid transc rip tion factor-1 Surfactantp rotein-A Recurrence

2013-08-15）

（本文编辑：沈叔洪）

浙江省卫生厅科研基金（2013KYB187）；浙江省中医药管理局科研基金（2013ZQ 014）

310003杭州，浙江大学医学院附属第一医院呼吸内科（吕昕系在职硕士研究生，现在浙江中医药大学附属第一医院工作）

周建英E-mail：zjyhz@zju.edu.cn