盐酸文拉法辛温敏型原位凝胶的研制

宋艳红，崔 颖（武汉科技大学附属天佑医院，武汉 430064）

·药剂·

盐酸文拉法辛温敏型原位凝胶的研制

宋艳红，崔 颖＊（武汉科技大学附属天佑医院，武汉 430064）

目的 确定盐酸文拉法辛温敏型原位凝胶的基质处方。方法 以不同质量浓度泊洛沙姆作为温敏材料，用卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素作黏膜黏附剂，考察凝胶的相变温度和黏附力，优选基质处方。结果 确定180g·L－1泊洛沙姆407和3.0g·L－1聚乙烯吡咯烷酮组合作为盐酸文拉法辛温敏型原位凝胶的处方基质，其胶凝温度为31.7℃，黏附力98.1 g·cm－2。结论 选定的基质处方可用于制备盐酸文拉法辛温敏型原位凝胶。

盐酸文拉法辛；泊洛沙姆；温敏；原位凝胶

盐酸文拉法辛（venlafaxine hydrochloride，简称VH）是5－HT和NA双重再摄取抑制药的代表药物，在临床上被广泛用于治疗各种类型抑郁症，同时被用于临床治疗强迫症、精神分裂症、社交恐惧症、创后应激障碍、经期前心境恶劣障碍等疾病［1］。

鼻腔给药在治疗疾病方面发挥着独特的作用，主要特点是鼻腔吸收迅速、生物利用度较口服给药更高，无肝脏首过效应，避免了药物的胃肠道反应，给药简便，用量少［2］，并且鼻腔给药后药物分子可滞留于嗅部黏膜而吸收进入脑部，绕过血脑屏障，起到治疗作用［3］。原位凝胶（in situ gel）是指以溶液状态给药后，可在给药部位立即发生相变的制剂，独特的溶液－凝胶转变性质，兼有制备简单、使用方便、滞留时间长等优点［4］。本文以温敏性聚合物泊洛沙姆407为载体制备文拉法辛鼻用凝胶，采用原位凝胶技术，使凝胶在鼻腔内原位凝胶化并迅速黏附于黏膜表面，延长药物在黏膜表面的吸收时间，提高药物疗效。

1 仪器与试药

1.1 仪器 LC－10Avp型高效液相色谱仪（日本岛津，SPD－10Avp紫外检测器，岛津Class－vp色谱工作站）；ME215S电子分析天平（德国Sartorius公司）；超声波溶解仪（上海宁商超声仪器有限公司）；自制黏附力测定装置（自制）。

2.2 试药 文拉法辛原料药（华北制药集团海翔医药公司，药用级，批号20080525）；文拉法辛对照品（中国食品药品检定研究院，批号100543－201101，质量分数99.88%）；泊洛沙姆407，188（P407，P188，德国BASF公司）；壳聚糖（浙江金壳生物化学有限公司，药用级，批号20110917）；聚乙交酯丙交酯－聚乙二醇－聚乙交酯丙交酯（PLGA－PEG－PLGA，上海丽昂化学有限公司，药用级，批号20100411）；卡波姆934（廊坊聚通化工有限公司，药用级，批号20090723）；聚乙烯吡咯烷酮（PVP K30，上海协泰化工有限公司，药用级，批号20090317）；羟丙基甲基纤维素（HPMC K4M，山东聊城阿华制药有限公司，药用级，批号20091215）；盐酸文拉法辛片（常州四药制药有限公司，25mg／片，批号20130517）；甲醇（天津市科密欧化学试剂有限公司，色谱纯）；乙腈（Sigma Aldrich Inc，色谱纯）。

2 方法与结果

2.1 处方设计

2.1.1 原位凝胶材料的筛选和相变温度的测定 分别选用不同质量浓度泊洛沙姆407、泊洛沙姆188、壳聚糖、PLGA－PEG－PLGA，并采用搅拌子转动法［5］测定胶凝温度。在西林瓶中装入温敏型凝胶溶液10g和搅拌子，插入精度为0.1℃的精密温度计，温度计的水银球完全浸没在凝胶溶液中，将其放入低温（＜10℃）水域中，转速300r·min－1，保持水温持续缓慢升温，升温速率约1～2℃·min－1。随着温度升高，凝胶溶液黏度也逐渐增大，将磁力搅拌子完全停止转动的温度定为胶凝温度，每个样品平行测定6次，结果取平均值。各原位凝胶材料的相变温度结果见表1。

表1 原位凝胶材料相变温度Tab.1 Temperature of in situ gel material phase change（n＝6）

由表1可知，泊洛沙姆188、壳聚糖、PLGAPEG－PLGA3种原位凝胶材料相变温度范围大，不易控制质量浓度，并且单纯的壳聚糖温度敏感凝胶力学强度较低，在体温下凝胶形成的速度不易控制［6］，故选用泊洛沙姆407进行进一步的研究。2.1.2 原位凝胶质量浓度的优化 合适的鼻腔给药体积在0.15mL左右，为保证文拉法辛的用量（1次25mg，1日2～3次），确定原位凝胶中文拉法辛含量为200g·L－1（相当于盐酸文拉法辛226.0g）的前提下，采用单因素考察泊洛沙姆407质量浓度对载药凝胶相变温度的影响，确定最佳泊洛沙姆407的质量浓度。精密称取泊洛沙姆适量，配制成各种质量浓度的溶液，按2.1.1法测定相变温度，结果见表2。

表2 泊洛沙姆质量浓度筛选Tab.2 Screening of poloxamer concentration（n＝6）

由表2结果可知，不同质量浓度泊洛沙姆407的水溶液和载药文拉法辛的相变温度都与泊洛沙姆407质量浓度呈负相关，当在泊洛沙姆407溶液中加入文拉法辛后凝胶的相变温度有显著性提高。泊洛沙姆的质量浓度过高或过低对原位凝胶的制备及质量影响较大，我们经过实验并结合相关文献［7－8］，选择泊洛沙姆407质量浓度为180g·L－1，相变温度在29～32℃范围内的A8组别作进一步研究。

2.1.3 黏膜黏附剂的选择 原位凝胶不仅需要具有适宜的相变温度，使其能在人体生理温度下发生相转变，且应具有合适的黏附性，经鼻内给药后可在体温时胶凝，且给药后不会从体内黏膜上脱落。在确定泊洛沙姆407和文拉法辛的质量浓度后，选用不同的高分子黏膜黏附剂进行黏附力大小比较，结果见表3。

表3 黏附剂种类和质量浓度筛选Tab.3 Screening of the type and concentration of adhesion agent（n＝6）

由表3结果可知，随着高分子黏膜黏附剂质量浓度的增加，凝胶的黏附力增大，而相变温度却显著降低。以卡波姆934作黏附剂时相变温度过低，而羟丙基甲基纤维素作黏附剂时黏附力太大，均不符合要求。查阅相关资料，鼻腔内温度为32～34℃［9］，综合相变温度和黏附力的指标，选用B5作为适宜处方进行进一步研究。

2.2 制备方法 取盐酸文拉法辛22.6g、PVP0.3g和尼泊金0.1g，溶于适量蒸馏水中，将该溶液冷却至4℃；缓慢加入泊洛沙姆，边加边搅拌，最后蒸馏水加至100g，将混合物置于4℃过夜，得无色透明黏液，即为文拉法辛温敏型原位凝胶，分装于密闭容器中，贮存于阴凉处。

2.3 含量测定 采用HPLC法测定制剂中盐酸文拉法辛的含量［10］。

2.3.1 测定波长的选择 取盐酸文拉法辛对照品适量，分别以蒸馏水、0.1mol·L－1盐酸溶液、pH6.8磷酸盐缓冲溶液为溶剂，稀释成适当质量浓度的溶液，在200～400nm波长范围内进行紫外扫描，结果表明，盐酸文拉法辛在上述溶液中于226nm处有最大吸收，因此确定测定波长为226nm。

2.3.2 色谱条件 色谱柱：大连依利特C18柱（250 mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈－甲醇－0.02mol·L－1磷酸二氢钠溶液（25∶15∶60，用10mL·L－1磷酸调pH值3.0）；流速：1mL·min－1；检测波长：226nm；柱温：30℃；进样量：20μL。

2.3.3 对照品溶液的制备 精密称取盐酸文拉法辛对照品适量，加流动相溶解并稀释至质量浓度约2 mg·mL－1的储备液，摇匀即得。

2.3.4 供试品溶液的制备 精密称取盐酸文拉法辛原位凝胶0.2g，置于50mL量瓶中，用流动相超声30min充分溶解，摇匀，滤膜过滤，滤液储存备用。

2.3.5 阴性对照溶液的制备与干扰实验 取处方量的各辅料，制备不含盐酸文拉法辛的空白凝胶，照2.3.4项下方法制成阴性对照品溶液，依法进样，辅料在文拉法辛相应保留时间的位置并没有出峰，说明辅料不会干扰盐酸文拉法辛的含量测定。结果见图1。

2.3.6 线性关系考察 精密量取2.3.3项下对照品溶液适量，以流动相稀释至质量浓度为0.2，0.4，0.8，1.6，3.2，6.4，12.8和25.6μg·mL－1的系列标准溶液，各进样20μL，记录峰面积，以质量浓度（C）对峰面积（A）进行线性回归，标准曲线：A＝1 754.31C＋202.47（r＝0.999 0，n＝7）。结果表明，盐酸文拉法辛进样量在0.4～25.6μg·mL－1范围内线性关系良好。

2.3.7 重复性实验 分别精密称取同一批样品（批号20131115－1）5份，照供试品溶液的制备项下方法制成供试品溶液，进样20μL测定，求得相对标准偏差为RSD为1.24%（n＝5），表明重复性良好。

2.3.8 回收率实验 采用加样回收法。称取已知含量的同一批样品（批号20131115－1）9份，分成3组，分别精密加入80%，100%和120%的对照品溶液，按样品含量测定项下的方法测定，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量，测得盐酸文拉法辛平均回收率为98.76%和RSD为1.71%（n＝9）。

2.3.9 样品的含量测定 精密称取盐酸文拉法辛原位凝胶0.2g，置于50mL量瓶中，用流动相超声30 min充分溶解，摇匀后滤膜过滤，精密量取续滤液5 mL，置于100mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，平行测定5次；另取2.3.3项下溶液稀释后同法进行测定，按外标法以峰面积计算，含量均在标示量的97.25%～101.76%（n＝5）之间，符合规定。结果见图1。

图1 HPLC图A.对照品；B.供试品；C.阴性样品；1.盐酸文拉法辛Fig.1 HPLC chromatogramsA.reference substance；B.samples；C.negative samples；1.venlafaxine hydrochloride

2.4 原位凝胶与片剂体外释放度比较 采取振荡透析释放法［11］比较文拉法辛原位凝胶和片剂的释放度。释放介质为pH6.8磷酸盐缓冲液，温度定为34 ±0.5℃，振荡频率为60次·min－1。称取制得的盐酸文拉法辛原位凝胶溶液0.2g，加入透析袋内，将透析袋开口用绳子扎紧，置于37℃烘箱中5min，使溶液形成凝胶，再置于盛有100mL释放介质的具塞锥形瓶中，置于恒温振荡器中，并于0，1，2，4，8，12和24h分别移取释放液2mL，取出后迅速补加等量的新鲜介质。同法取文拉法辛片剂（每次1片）进行对比操作。取出的释放液经0.22μm微孔滤膜滤过后，照含量测定方法项下测定药物含量，计算各时间点的累积释放百分率（n＝6），结果见图2。方差分析结果见表4。

图2 盐酸文拉法辛原位凝胶和片剂的体外累积释放度Fig.2 Cumulative release in vitro of thermoreversible in situ gel and tablets of venlafaxine hydrochloride

表4 方差分析结果Tab.4 Results of variance analysis

盐酸文拉法辛原位凝胶快速均衡释放，在8h后达到稳定状态，然后缓慢持续释放并达到累积释放度87.6%，药物释放比较完全。片剂释药较慢且呈不规则状态，累积释放度较原位凝胶小，但两者无显著性差异（P＞0.1）。2.5 胶凝温度和黏附力的测定 称取放置4℃过夜的样品5g，按2.1.1项下方法测定样品的胶凝温度，结果见表5。目前体外检测生物黏附制剂黏附性能大多还是采用施加压力的方法［12］，将放置4℃过夜的样品5g，置于36.5℃恒温水浴中加热30min待其胶凝后，采用自制的黏附力测定装置［13］测定原位凝胶的黏附力，结果见表5。结果表明，5批样品的胶凝温度及黏附力在规定范围内，均符合要求。

表5 样品的胶凝温度及黏附力测定结果Tab.5 Measurement results of gelation temperature and adhesion force of samples （n＝5）

2.6 无菌和微生物限度的检查 照《中国药典》无菌检查法和微生物限度检查法［14］检查，结果均符合规定。

3 讨论

温敏型凝胶是利用外界条件和用药部位的温度差异，使聚合物发生相转变的系统，在室温或较低温度条件下为液态，当环境温度升高至相变温度时形成具有一定机械强度的凝胶，黏附于用药部位，达到缓释药物的目的。本制剂即是采用此原理以泊洛沙姆为载体制成温敏型原位凝胶，以溶液形式通过鼻腔给药后形成具有一定黏附力的凝胶，使盐酸文拉法辛达到缓释给药的目的［15］。

泊洛沙姆407溶液具有反向胶凝的特性，当温度升高时可由溶液状态转变为凝胶状态，其机制是泊洛沙姆分子在水溶液中形成以疏水性PPO为内核、以亲水性PEO为外壳的球状胶束，当温度升高至胶凝温度时，胶束间相互缠结和堆积，从而形成半固体状的凝胶。当泊洛沙姆407质量浓度升高时溶液中的胶束数量和所占体积就越大，升高温度时，胶束就越早发生堆砌和缠结，因此实验中随着泊洛沙姆407质量浓度的增加，溶液的胶凝温度就越低。

聚乙烯吡咯烷酮是性能优异、用途广泛的水溶性高分子材料，它作为生物黏附剂能与生物组织之间发生黏合，可使凝胶较好地黏附于黏膜表面，延长药物与黏膜的接触时间及药效的特续时间，并且对黏膜的刺激性小，有利于制剂的长期使用。

本文通过考察不同质量浓度的泊洛沙姆对相变温度的影响，选用不同的高分子黏膜黏附剂进行黏附力大小比较，并从主药的含量测定、体外释放度、原位凝胶的相变温度、黏附力测定、无菌和微生物限度的检查几个方面，对盐酸文拉法辛温敏型原位凝胶进行了质量评价，筛选出了最佳配方。

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Preparation of thermoreversible in situ gel of venlafaxine hydrochloride

SONG Yanhong，CUI Ying＊（Affiliated Tianyou Hospital of Wuhan University of Science and Technology，Wuhan 430064，China）

Objective To prepare venlafaxine hydrochloride thermoreversible insitugel.Methods Thermosensitive polymer was prepared by using poloxamer in different concentration.Mucosa adhere was prepared using carbopol，PVP，and HPMC.The gelation temperature and the adhesion force of gel were tested to optimize the prescription base.Results 180g·L－1poloxamer and 3.0g·L－1PVP were found to be satisfactory compositions of the gel base.Its gelation temperature was 31.7℃，and the adhesion force was 98.1g·cm－2.Conclusion The selected base can be used for the preparation of thermoreversible in situ gel of venlafaxine hydrochloride.

venlafaxine hydrochloride；poloxamer；thermoreversible；in situ gel

10.3969／j.issn.1004－2407.2015.02.019

R944

A

1004－2407（2015）02－0165－04

2014－11－26）

宋艳红，女，主管技师

＊通信作者：崔颖，女，副主任药师