裸花紫珠胶囊质量标准研究

郑东昆， 陈伟康， 黄 波，崇 岚， 罗跃华*

（1.南昌大学药学院，江西南昌330006；2.江西省食品药品检验所，江西南昌330046；3.南昌市食品化妆品监督所，江西南昌330038）

［质 量］

裸花紫珠胶囊质量标准研究

郑东昆1，2， 陈伟康2， 黄 波1，2，崇 岚3， 罗跃华1，2*

（1.南昌大学药学院，江西南昌330006；2.江西省食品药品检验所，江西南昌330046；3.南昌市食品化妆品监督所，江西南昌330038）

目的建立裸花紫珠胶囊的质量标准。方法采用薄层色谱法 （TLC）对胶囊中裸花紫珠进行定性鉴别；采用超高效液相色谱法（UHPLC），Waters ACQUITY UPLC©BEH C18柱（2.1 mm×100 mm，1.7μm），同时对制剂中木犀草苷、连翘酯苷B、毛蕊花糖苷及异毛蕊花糖苷进行定量测定。结果薄层鉴别专属性强，斑点清晰，分离度好；木犀草苷、连翘酯苷B、毛蕊花糖苷及异毛蕊花糖苷分别在1.79～89.69μg/m L（r=0.999 9）、8.45～422.45μg/mL（r=0.999 9）、14.48～724.14μg/mL（r=0.999 8）、14.12～706.11μg/mL（r=0.999 9）范围内呈良好的线性关系，平均加样回收率 （n=9）分别为98.1%、101.3%、98.4%、102.0%，RSD分别为1.2%、1.5%、1.3%、1.5%。结论所建立的定性、定量分析方法简便快速，准确度高，能够有效控制裸花紫珠胶囊的质量。

裸花紫珠胶囊；质量标准；TLC；UHPLC；木犀草苷；连翘酯苷B；毛蕊花糖苷；异毛蕊花糖苷

裸花紫珠Callicarpa nudiflora Hook.et Arn.为马鞭草科紫珠属植物，是海南黎族医生常用药材之一［1］，其枝叶具有抗菌止血、消炎解毒、散瘀消肿、驱风祛湿之功效［2］。裸花紫珠胶囊为裸花紫珠干浸膏制成的单味制剂，主要用于细菌感染引起的炎症，急性传染性肝炎，呼吸道和消化道出血等［3-5］。裸花紫珠胶囊现行质量标准［6］鉴别项为化学鉴别，专属性不强，因此建立薄层色谱法对其中裸花紫珠进行定性鉴别；现行标准采用紫外分光光度法测定裸花紫珠胶囊中总黄酮的量，同样缺乏专属性。近年研究表明，裸花紫珠中黄酮类成分木犀草苷具有抗菌、消炎、止血作用［7-8］；而苯乙醇苷类成分毛蕊花糖苷可能是裸花紫珠止血作用的主要活性成分［9］，其同分异构体异毛蕊花糖苷具有抑制体外溶血及抗氧化作用［10-11］，连翘酯苷B具有抗炎、抗菌作用［12-13］。以上4个成分在裸花紫珠胶囊中含有量较高，且药理活性均在裸花紫珠胶囊的临床应用上有所体现。因此，建立同时定量测定裸花紫珠胶囊中以上4个有效成分的方法，可对裸花紫珠胶囊的质量进行控制。通过建立简单、可靠的裸花紫珠薄层鉴别和成分定量测定方法，可改变现行裸花紫珠胶囊质量标准薄层鉴别与成分定量测定项专属性不强的现状。

1 仪器与试药

Agilent1290系列高效液相色谱仪（G4220A二元泵，G1316C柱温箱，G4226A全自动进样器；G4212A二极管阵列检测器）；色谱柱为Waters ACQUITY UPLC©BEH C18柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）；自制硅胶薄层板 （0.5%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板）；Sartorius BSA124S-CW电子天平；Sartorius BT 25S电子天平。对照药材裸花紫珠（批号 121582-201001），对照品木犀草苷 （批号11720-201106）、连翘酯苷 B（批号 111811-201102）、毛蕊花糖苷对照品 （批号1530-200202）均购于中国食品药品检定研究院。异毛蕊花糖苷对照品由江西省食品药品检验检测研究院从裸花紫珠中分离制备得到，由MS、1H-NMR和13C-NMR鉴定结构，通过面积归一化法计算纯度为98.3%。裸花紫珠胶囊分别由江西杏林白马药业有限公司（批号分别为20130403、20130409、20130712）和海南九芝堂药业有限公司 （批号分别为130012、130022、140012）提供，水为Millipore制备的超纯水，乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 薄层鉴别 取本品内容物1 g，加水150 m L，煎煮，保持微沸1 h，放冷，离心，取上清液加氯化钠5 g，振摇使溶解，溶液加乙酸乙酯40 mL振摇提取，分取乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。按照制剂处方工艺制备缺少裸花紫珠的阴性样品，取其内容物1 g，按供试品溶液制备方法同法制成阴性对照溶液；另取裸花紫珠对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法 （《中国药典》2010年版一部附录ⅥB）试验，吸取上述两种溶液各10～20μL，分别点于同一用0.5%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-浓氨水 （17：2：1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以3%三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热5 min，置紫外光灯 （365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光主斑点；阴性对照溶液无干扰，见图1。

图1 裸花紫珠胶囊的TLCFig.1 TLC chromatogram of Luohua Zizhu Capsules

2.2 成分测定

2.2.1 色谱条件与系统适用性试验 Waters ACQUITY UPLC©BEH C18柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）；流动相为乙腈 （A）-0.1%甲酸 （B），梯度洗脱（0～1.0 min，10.0%A；1.0～12.0 min，10.0%～16.5%A；12.0～15.0 min，16.5%～50%A；15.0～18.0 min，50%A）；体积流量0.5 mL/min；检测波长350 nm；柱温40℃；进样量1 μL。该条件下木犀草苷、连翘酯苷B、毛蕊花糖苷及异毛蕊花糖苷与相邻峰分离度均大于1.5，裸花紫珠胶囊阴性样品无干扰。色谱图见图2。

2.2.2 混合对照品溶液的制备 分别称取木犀草苷、连翘酯苷B、毛蕊花糖苷及异毛蕊花糖苷对照品适量，精密称定，置同一100 mL量瓶中，加70%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1 m L含木犀草苷、连翘酯苷B、毛蕊花糖苷及异毛蕊花糖苷分别为0.18、0.84、1.45、1.41 mg的混合对照品贮备液。精密量取上述贮备液10 mL置50 mL量瓶中，加70%甲醇稀释至刻度，摇匀，作为混合对照品溶液。

图2 UHPLC色谱图Fig.2 UHPLC chromatogram s

2.2.3 供试品溶液的制备 将本品内容物研细后，取约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50 mL，称定质量，超声处理 （功率500 W，频率40 kHz）40 min，放冷，再称定质量，用70%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.4 阴性对照溶液的制备 取缺裸花紫珠的阴性样品0.5 g，同法制成裸花紫珠阴性对照溶液。

2.2.5 线性关系考察 精密吸取 “2.2.2”项下混合对照品贮备液0.5、1、2.5、5、10、25 mL，分别置50 mL量瓶中，用70%甲醇定容至刻度，摇匀，即得6个系列质量浓度的混合对照品溶液，在上述色谱条件下进样测定。以对照品溶液的质量浓度为横坐标 （X），峰面积为纵坐标 （Y），采用Microsoft©Office Excel 2007拟合标准曲线，得回归方程及相关系数。结果见表1。

2.2.6 精密度试验 精密吸取混合对照品溶液1μL，按以上色谱条件重复测定6次，并记录峰面积，结果木犀草苷、连翘酯苷B、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷的峰面积的RSD分别为1.5%、1.3%、0.9%、0.8%，表明仪器精密度良好。

表1 4个成分标准曲线测定结果Tab.1 Determ ination results of standard curve of four constituents

2.2.7 稳定性试验 取同一份供试品溶液 （批号20130409），在室温放置0、2、4、8、12、24 h后分别进样，记录色谱峰面积，结果木犀草苷、连翘酯苷B、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷的RSD值分别为1.4%、1.9%、1.0%、1.2%。表明供试品溶液在24 h内测定结果基本稳定。

2.2.8 重复性试验 取同一批号 （批号20130409）样品，精密称取6份，按 “2.2.3”项下制备方法制备供试品溶液并测定。结果木犀草苷、连翘酯苷B、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷的平均含有量分别为 1.30、14.23、19.38、18.75 mg/g。RSD分别为1.2%、0.5%、0.7%、0.8%。结果表明该法重复性良好。

2.2.9 加样回收试验 取已知含有量裸花紫珠胶囊 （批号20130409）的样品粉末约0.25 g，精密称定，共9份，分别精密加入相当于样品中各成分含有量的80%、100%、120%的混合对照品溶液（木犀草苷13.00μg/mL，连翘酯苷B 142.28 μg/mL，毛蕊花糖苷193.76μg/mL，异毛蕊花糖苷187.44μg/mL）20、25、30 mL，每个水平各3份，然后分别精密加入70%甲醇30、25、20 m L。按 “2.2.3”项下方法制备供试液，在上述色谱条件下进样测定，记录峰面积，计算回收率。结果表明：该法测定结果的准确度较高。结果见表2。

2.2.10 样品测定 取裸花紫珠胶囊6批，按“2.2.3”项下制备方法，每批制备供试品溶液3份，并在以上色谱条件下进样测定，记录峰面积值，计算样品中木犀草苷、连翘酯苷B、毛蕊花糖苷及异毛蕊花糖苷的量，测定结果见表3。

3 讨论

裸花紫珠胶囊的薄层色谱鉴别中考察了不同展开剂、不同薄层板、不同温度、不同湿度等展开条件，最终确定的方法具有较好的重复性和专属性，可快速有效地对裸花紫珠胶囊质量进行控制。

表2 加样回收率试验结果（n=9）Tab.2 Results of recovery tests（n=9）

表3 样品测定结果（n=3）Tab.3 Determ ination of sam p les（n=3）

UHPLC对成分较复杂的中药具有良好的分离效果并能大大缩短样品的分析时间。本实验采用UHPLC法测定样品中木犀草苷、连翘酯苷B、毛蕊花糖苷及异毛蕊花糖苷，实验结果表明该法操作简单、准确、重复性好，具有分离效果好，分析时间短的优点。

通过DAD检测器对供试品色谱400～200 nm进行光谱扫描，结果显示木犀草苷、连翘酯苷B、毛蕊花糖苷及异毛蕊花糖苷最大吸收波长分别为350 nm、330 nm、330 nm、330 nm。由于裸花紫珠胶囊中木犀草苷含有量较低，为了顾及木犀草苷的检测准确度，故选择以350 nm为检测波长，此波长下4个成分均可得到满意的灵敏度。同时考察了不同提取方法 （超声、回流），不同提取时间（20 min、30 min、40 min、50 min），不同提取溶剂 （甲醇、70%甲醇、乙醇，70%乙醇）以及不同溶剂用量（25 m L、50 mL、100 mL）对提取效率的影响，结果发现采用50mL 70%甲醇超声处理40 min条件下裸花紫珠胶囊中4个有效成分的提取效果最佳。

本实验所建立的裸花紫珠胶囊质量标准薄层鉴别专属性强，斑点清晰，分离度好；成分定量测定分析时间短，准确度高，重复性好。较现行裸花紫珠胶囊标准有较大提高，可用于裸花紫珠胶囊的质量控制。

［1］刘明生.黎药学概论［M］.北京：人民卫生出版社，2008：165-197.

［2］蔡金平，董 琳，关薇薇，等.裸花紫珠的研究进展［J］.现代药物与临床，2012，27（1）：60-64.

［3］钟利进.裸花紫珠胶囊治疗Ⅰ期内痔患者的临床疗效观察［J］.临床医学工程，2012，19（3）：426-427.

［4］黄业东.裸花紫珠胶囊在外伤污染伤口清创缝合后的应用［J］.中医中药，2012，10（18）：624-625.

［5］苏凤珍.裸花紫珠胶囊联合妇炎康胶囊治疗阴道出血30例疗效观察［J］.实用中西医结合临床，2014，14（3）：85.

［6］国家食品药品监督管理局标准 （试行）YBZ08872006［S］.2006.

［7］梁纪军，徐 凯，李留法，等.裸花紫珠总黄酮的抗炎、止血作用研究［J］.现代中西医结合杂志，2009，18（26）：3161-3162.

［8］管仁伟，曲永胜，顾正位，等.木犀草苷的药理作用研究［J］.中国野生植物资源，2014，33（1）：1-3.

［9］张 洁，李宝泉，冯 峰，等.裸花紫珠的化学成分及其止血活性研究［J］.中国中药杂志，2010，35（24）：3297-3300.

［10］Chen CH，Lin Y S.Antioxidant and antihypertensive activities of acteoside and its analogs［J］.Bot Stud，2012，53（4）：421-429.

［11］宋光西，马玲云，魏 锋，等.苯乙醇苷的分布及药理活性研究进展［J］.亚太传统医药，2011，7（4）：169-171.

［12］Georgiev M，Pastore S，Lulli D，et al.Verbascum xanthophoeniceum derived phenylethanoid glycosides are potent inhibitors of inflammatory chemokines in dormant and interferon-gammastimulated human keratinocytes［J］.JEthnopharmacol，2012， 144（3）：754-760.

［13］钟海琴，张 顺，蔡 挺，等.连翘酯苷B对肺炎克雷伯菌外排泵活性的影响［J］.中国新药与临床杂志，2013，32（4）：303-306.

Quality standard for Luohua Zizhu Capsules

ZHENG Dong-kun1，2， CHENWei-kang2， HUANG Bo1，2， CHONG Lan3， LUO Yue-hua1，2*
（1.School of Pharmacy，Nanchang University，Nanchang 330006，China；2.Jiangxi Provincial Institute for Food and Drug Control，Nanchang 330029，China；3.Food&Cosmetics Supervisory Organization of Nanchang City，Nanchang 330038，China）

AIMTo establish the quality standard for Luohua Zizhu Capsules.METHODSCallicarpa nudiflora Hook in capsuleswas identified by TLC.The contents of luteoloside，forsythoside B，acteoside and isoacteoside in capsules were determined by UHPLC.RESULTSTLC spots were clear and well-separated.Luteoloside，forsythoside B，acteoside and isoacteoside showed good linearity in the ranges of1.79-89.69μg/mL（r= 0.999 9），8.45-422.45μg/mL（r=0.999 9），14.48-724.14μg/mL（r=0.999 8），14.12-706.11 μg/mL（r=0.999 9），respectively.The average recoveries of luteoloside，forsythoside B，acteoside and isoacteoside were 98.1%，101.3%，98.4%and 102.0%，respectively.The RSDs were 1.2%（n=9），1.5%（n= 9），1.3%（n=9）and 1.5%（n=9），respectively.CONCLUSIONThe established qualitative and quantitativemethods are simple and accurate，which can be used for the quality control of Luohua Zizhu Capsules.

Luohua Zizhu Capsules；quality standard；TLC，UHPLC；luteoloside；forsythoside B；acteoside；isoacteoside

R927.2

A

1001-1528（2015）04-0774-05

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.04.017

2014-09-29

国家自然科学基金资助项目 （81373955）；中国食品药品检定研究院中青年发展研究基金课题 （2013WA9）

郑东昆 （1987―），女，硕士生，从事药物分析研究。Tel：18146622300，E-mail：329747454@qq.com

*通信作者：罗跃华，男，主任中药师，从事药物分析研究。Tel：（0791）88158689，E-mail：emailluo@sohu.com