紫外分光光度法测定广西扁桃树皮中总黄酮的含量

芦晓燕，黄陆良

（广西中医药大学，广西 南宁 530001）

扁桃（Mangifera persiciforma C.Y.Wu et T.L.Ming）系漆树科植物，主要分布在云南、贵州和广西等省［1］。目前对扁桃的研究多集中在叶的部位，研究表明其叶中含有芒果苷，具有明显的镇咳、祛痰等作用［2-3］。广西扁桃资源相当丰富，韦松等［4］对扁桃树皮的化学成分进行研究，从石油醚提取物和乙酸乙酯提取物中分得没食子酸乙酯、没食子酸、芒果苷等化合物。笔者从化学成分预试验中得知，扁桃树皮含有黄酮类化合物。由于黄酮类化合物具有较广泛的药理作用，为进一步开发利用扁桃，扩大其药用范围，本文运用紫外分光光度法测定扁桃树皮中总黄酮的含量，为进一步研究该药材的物质基础提供参考。现报道如下。

1 仪器与试药

UV8453型可见-紫外分光光度计（美国Agilent公司）；扁桃树皮采于广西南宁，经广西中医药大学药学院廖月葵高级实验师鉴定为漆树科植物扁桃（Mangifera persiciforma C.Y.Wu et T.L.Ming）的树皮。芦丁对照品（批号：100080-200306；购自中国食品药品检定研究院）；显色剂为5%NaNO2溶液，10%Al（NO3）3溶液，5%NaOH溶液。

2 实验方法与结果

2.1 溶液的制备

2.1.1 芦丁对照品溶液的制备 称取芦丁对照品约19 mg，精密称定，用甲醇溶解，转移入100 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得芦丁对照品溶液，浓度为0.197 mg/ml。

2.1.2 扁桃树皮供试品溶液的制备 取扁桃树皮粗粉约4 g，精密称定，加95%乙醇50 ml，加热回流提取2 h，滤过，滤液减压回收乙醇至稠膏状，稠膏加少量蒸馏水成悬浮液，在分液漏斗中加石油醚萃取除去叶绿素等脂溶性杂质，加乙醇使含醇量为70%，转移至100 ml量瓶中，并用70%乙醇定容至刻度，即得扁桃树皮供试品溶液。

2.2 波长的选择 精密吸取1.0 ml供试液于10 ml量瓶中，依次加入5%NaNO2溶液1 ml，摇匀；10%Al（NO3）3溶液1 ml，摇匀；5%NaOH溶液2 ml，摇匀；最后用70%乙醇定容至刻度，静置10 min，以试剂为空白对照液，用紫外分光光度计在波长400～800 nm范围测定吸光度，结果于506 nm波长处有最大吸收，其他成分在此波长处对测定无干扰，色谱图见图1，故测定时选择506 nm作为测定波长。

图1 波长选择UV图谱

2.3 方法学考察

2.3.1 标准曲线的绘制 分别精密吸取芦丁对照品溶液（0.197 mg/ml）1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml于 5 个 10 ml量瓶中，分别按“2.2波长的选择”项下显色方法操作，以试剂作空白对照，于506 nm波长处测定吸光度。依据测定结果绘制标准曲线，见图2。得出回归方程为：A=1.846C-0.0018，相关系数r=0.9993，结果显示芦丁对照品在0.0197～0.0985 mg/ml浓度范围内与吸光度呈良好线性关系。

图2 芦丁标准曲线图

2.3.2 精密度试验 精密吸取1.0 ml供试品溶液于10 ml量瓶中，按“2.2波长的选择”项下显色方法操作，在506 nm处测定吸光度，连续测定6次，计算扁桃树皮总黄酮含量，RSD=4.57%（n=6），表明该仪器精密度良好。

2.3.3 稳定性试验 精密吸取1.0 ml供试品溶液于10 ml量瓶中，按“2.2波长的选择”项下显色方法操作，分别放置0，10，20，30，60 min 后在 506 nm 处测定吸光度，RSD=3.91%（n=5），结果显示样品在1 h内测定稳定。

2.3.4 重复性试验 精密量取6份供试品溶液，各1.0 ml，按“2.2波长的选择”项下显色方法操作，在506 nm处测定吸光度，依据吸光度计算出扁桃树皮中总黄酮含量，总黄酮含量平均值为 23.46 mg/g，RSD=4.14%（n=6）。

2.3.5 加样回收率试验 取6份扁桃树皮（已知总黄酮含量为23.46 mg/g），每份约4 g，精密称定，按2.1.2方法制备供试品溶液，分别加入芦丁对照品溶液1.0 ml，按“2.2波长的选择”项下显色方法操作，在506 nm处测定吸光度，并计算加样回收率，结果平均加样回收率为98.52%，RSD为6.67%。实验结果见表1。

表1 加样回收率试验结果 （n=6）

2.4 样品测定 取不同批次扁桃树皮粗粉约4 g，共3份，精密称定，按“2.1.2扁桃树皮供试品溶液的制备”项下制备样品溶液，各精密吸取样品溶液1.0 ml，分别置于3个10 ml量瓶中，按“2.2波长的选择”项下显色方法操作，在506 nm处测定吸光度，根据回归方程计算扁桃树皮中总黄酮的含量，结果扁桃树皮中总黄酮的平均含量为23.85 mg/g，见表2。

表2 扁桃树皮中总黄酮的含量测定结果 （n=3）

3 小 结

目前总黄酮类化合物的测定多通过显色剂显色，然后采用紫外分光光度法测定。本实验以芦丁为对照品，在碱性条件下以NaNO2-Al（NO3）3为显色剂，用紫外分光光度法测定扁桃树皮中总黄酮的含量，结果表明该法操作简便快速，稳定可靠，可为进一步研究该植物的物质基础提供理论依据。

［1］中国科学院中国植物志编委会.中国植物志.四十五卷.第一分册［M］.北京：科学出版社，1980：75.

［2］黄海滨，戴航，李学坚，等.RP-HLPC法测定不同产地扁桃叶中芒果苷的含量［J］.广西中医药，2004，27（2）：51-52.

［3］林启云，王建如，周芳，等.扁桃叶的药理实验［J］.广西中医药，1981，5（5）：37-41.

［4］韦松，杨小良，赵卫峰，等.扁桃树皮化学成分研究［J］.中成药，2008，30（9）：1399-1400.