白背叶根提取物的急性毒性及抗炎作用研究

刘海燕 ，黄卓坚 ，夏 星，冯 桥 ，黄 欢 ，邓裕彦，王志萍

（1.广西中医药大学，广西高校中药制剂共性技术研发重点实验室，广西 南宁 530001；2.广西壮族自治区民族医药研究院，广西 南宁 530001）

白背叶根为广西民间常用草药，系壮药材之一，为大戟科野桐属植物白背木Mallotus apelta（Lour.）Muell.Arg.的干燥根，白背叶根含有三萜类［1］、香豆素类［2］、有机酸类［3］等化合物。壮医药理论认为，其性平，微涩、微苦，具有通谷道、除湿毒、清热毒的功效，可用于肝炎、脾肿大、降白呆（带下）、肉扭（淋证）、白冻（泄泻）、兵嘿细勒（疝气）、火眼、中耳炎、子宫下垂、脱肛［4］。中医药理论认为，其性平，味微苦涩，归肝、脾经。具有清热解毒、收涩消瘀、抗肝纤维化、抗乙肝病毒、抗肝损伤作用，对降低转氨酶和缩小肝脾也有一定作用［5-8］，用于慢性肝炎、肝脾肿大、子宫脱垂、脱肛、白带、妊娠水肿［9］。本课题组曾对白背叶根提取物进行体外抑菌研究［10-11］，现进一步对白背叶根提取物的急性毒性及抗炎作用进行研究，为进一步研究开发白背叶根提供理论及实验依据。

1 实验材料

1.1 药品与试剂 白背叶根采于广西南宁市郊老虎岭，经广西中医药大学壮医药学院韦松基教授鉴定为大戟科野桐属植物白背木Mallotus apelta（Lour.）Muell.Arg.的干燥根。称取白背叶根粗粉适量，置于圆底烧瓶中，按料液比1∶8加入50%乙醇，用电热套加热，回流提取2次，每次1 h，过滤，合并滤液，减压浓缩至无醇味，继续浓缩至浓度为2 g/ml药液［10］，喷雾干燥，得提取物干燥粉末，再分别加蒸馏水配成所需相应浓度的白背叶根提取物溶液。醋酸地塞米松片（浙江仙琚制药股份有限公司，批号：1103120）；二甲苯（天津市化学试剂厂，批号：090516）；水合氯醛（天津市光复精细化工研究所，批号：20120728）。

1.2 动物 昆明种小鼠，18～22 g，雄性，由广西医科大学实验动物中心提供，许可证号：SCXK桂2009-0003。

1.3 仪器 L-600台式低速自动平衡离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司）；EL-204电子天平［梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司］；GZX-9420 MBE电热恒温鼓风干燥箱（上海博迅有限公司医疗设备厂）；PV-200足趾容积测量仪（成都泰盟科技有限公司）。

2 方 法

2.1 急性毒性试验［12］经预试验，白背叶根提取物经过干燥成粉末后，测得其最大溶解量为0.233 g（药粉重）/ml，一次给药后无小鼠死亡，无法测出LD50，故进行最大给药量试验。方法：选用昆明种小鼠40只，雌雄各半，随机分为给药组、对照组各20只。给药组每次灌胃容积为40 ml/kg，灌胃药液浓度为0.233 g/ml，24 h内灌胃3次（每次间隔6 h），累计剂量为27.96 g/（kg·d），相当于有效给药量的78倍。对照组给予等量生理盐水。灌胃后4 h内注意观察小鼠无中毒反应，随后每天观察小鼠1次。每3天称重1次，连续观察15 d。第16天将所有供试鼠脱颈椎处死，剖检小鼠的心、肝、脾、肺、肾、胃等脏器有无异常。

2.2 白背叶根提取物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响［13］采用随机方法将雄性小鼠昆明种60只分为空白对照组，阳性对照组，白背叶根低、中、高剂量组，每组12只，灌胃给药。空白对照组灌胃等量生理盐水；阳性对照组用地塞米松灌胃给药，剂量为0.008 g/kg；白背叶根低、中、高剂量组给药剂量分别为0.179 g/kg、0.358 g/kg、0.717 g/kg。各组连续给药 7 d，末次给药后45 min在小鼠右耳背腹两侧均匀涂抹二甲苯各10 μl，15 min后颈椎脱臼处死，用6 mm打孔器打下左右两耳同一部位的组织块，分别称重，肿胀度（mg）=右耳耳片重（mg）-左耳耳片重（mg）。

2.3 白背叶根提取物对棉球致小鼠肉芽肿胀的影响［13］采用随机方法将昆明种雄性小鼠50只分为空白对照组，阳性对照组，白背叶根低、中、高剂量组，每组10只。每组小鼠用水合氯醛麻醉，在腋下切开小口，用眼科镊将已称重为10 mg的灭菌棉球植于皮下，随即缝合皮肤，手术次日开始给药，连续7 d。空白对照组用等量生理盐水灌胃；阳性对照组用地塞米松灌胃给药，剂量为0.008 g/kg；白背叶根低、中、高剂量组给药剂量分别为0.179 g/kg、0.358 g/kg、0.717 g/kg。于第8天处死小鼠，打开原切口，将棉球连同周围结缔组织一起取出，剔除脂肪组织，放入烘箱中60℃烘干6 h，称重，减去棉球原重量即得肉芽肿胀的重量。

2.4 白背叶根提取物对蛋清致小鼠足趾肿胀的影响［13］采用随机方法将昆明种雄性小鼠50只分为空白对照组，阳性对照组，白背叶根低、中、高剂量组，每组10只。空白对照组给予等量生理盐水；阳性对照组用地塞米松给药，剂量为0.006 g/kg；白背叶根低、中、高剂量组给药剂量分别为0.179 g/kg、0.358 g/kg、0.717 g/kg。每日灌胃给药1次，在第5天用足容积测量仪测定每只小鼠右足趾正常足趾容积后给药，给药0.5 h后，在每只小鼠右足趾部皮下注射10%蛋清溶液50 μl。用足趾容量测定仪分别测定致炎后1、2、3、4 h的足趾容积，计算肿胀度。肿胀度=［（致炎后右足趾容积-正常右足趾容积）/正常右足趾容积］×100%。

2.5 统计学处理 采用SPSS 13.0统计分析软件，计量资料以均数±标准差（±s）表示，两组间均数差异采用t检验，P＜0．05为有统计学意义。

3 实验结果

3.1 急性毒性试验结果 小鼠给药后行动略显迟缓，1 h后恢复正常。在15 d的观察期内，给药组小鼠进食、饮水、大小便均正常，体重与对照组体重比较无显著性差异（P＞0.05），结果见表1。整个试验过程无小鼠中毒及死亡现象出现。第16 d将所有供试鼠脱颈椎处死，剖检小鼠，给药组小鼠与对照组小鼠比较，内脏无异常。白背叶根醇提物最大耐受量为27.96 g/（kg·d），相当于有效给药量的78倍。

3.2 白背叶根提取物对二甲苯致小鼠耳郭肿胀的影响 见表2。

在表2中，与空白对照组比较，白背叶根提取物高、中剂量均能显著减轻二甲苯致小鼠耳廓肿胀度（P＜0.01）；地塞米松亦能显著减轻二甲苯致小鼠耳廓肿胀度（P＜0.01）。

3.3 白背叶根提取物对棉球诱导小鼠肉芽肿胀的影响 见表3。

表1 白背叶根提取物给药前后体重变化 （±s，n=10）

表1 白背叶根提取物给药前后体重变化 （±s，n=10）

组别时间给药组 对照组雌雄雌雄给药前 20.81±1.19 18.17±1.00 20.58±1.10 18.04±1.28第 3 天 23.30±1.95 21.23±1.83 23.68±1.90 21.81±1.66第 6 天 25.37±2.39 22.66±2.11 26.32±2.54 23.87±2.00第 9 天 26.48±2.29 23.46±2.07 27.41±2.54 24.86±2.24第 12 天 26.41±2.54 23.75±1.78 26.55±2.60 25.09±1.65第 15 天 27.92±2.42 25.44±1.85 29.30±3.31 26.53±1.94

表2 白背叶根提取物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响（±s，n=12）

表2 白背叶根提取物对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响（±s，n=12）

注：与空白对照组比较，①P ＜0.05，②P ＜0.01；下同

肿胀抑制率（%）空白对照组 — 7.95±4.10 —地塞米松组 0.008 2.20±1.60② 72.20白背叶根高剂量组 0.717 3.40±2.12② 57.23白背叶根中剂量组 0.358 3.79±2.42② 39.87白背叶根低剂量组 0.179 5.60±4.10 29.43组 别 剂量（g/kg）肿胀度（mg）

表3 白背叶根提取物对小鼠棉球肉芽肿胀的影响（±s，n=10）

表3 白背叶根提取物对小鼠棉球肉芽肿胀的影响（±s，n=10）

肿胀抑制率（%）空白对照组 — 9.23±2.29 —地塞米松组 0.008 5.81±3.96① 37.05白背叶根高剂量组 0.717 6.62±2.11① 28.28白背叶根中剂量组 0.358 7.17±4.56 22.32白背叶根低剂量组 0.179 9.15±2.69 0.87组 别 剂量（g/kg）棉球肉芽肿胀（mg）

在表3中，白背叶根提取物高剂量能显著减少棉球诱导小鼠肉芽肿胀重量（P＜0．05）；地塞米松亦能显著减少棉球诱导小鼠肉芽肿胀重量（P ＜0．05）。

3.4 白背叶根提取物对蛋清致小鼠足趾肿胀的影响 见表4。

在表4中，白背叶根提取物高、中剂量均能显著降低蛋清致小鼠肿胀足的 1，2，3 h的肿胀率（P＜0.05或P＜0.01）；地塞米松亦能显著降低蛋清引发的小鼠足1，2，3，4 h的肿胀率（P＜0.01）。白背叶根提取物在1 h时开始起效，2 h时作用达到顶峰之后，3 h时药效有一定程度的减弱，4 h时药效消退。

4 结 论

炎症是机体对细菌、病毒、微生物等侵入物或损伤、过敏反应等事件产生的保护性反应，但不被控制的、持续的炎症反应会对组织产生损害，有的甚至可能导致功能丧失和死亡。因此，及时中止炎症过程对维持生命是至关重要的。近年来，中药抗炎作用已经受到广泛关注，白背叶根为广西民间常用草药，属于地道的广西壮药材，本试验采用的二甲苯诱导小鼠耳廓肿胀试验、棉球致肉芽肿胀试验、蛋清致小鼠足趾肿胀试验为常规的急、慢性炎症模型。试验结果表明，白背叶根提取物能减轻二甲苯致小鼠耳廓肿胀反应，抑制棉球致小鼠肉芽组织的增生及蛋清致小鼠足肿胀的程度，显示出明显的抗炎作用，这为今后开发白背叶根提供了科学依据。

表4 白背叶根提取物对蛋清致小鼠足趾肿胀的影响 （±s，n=10）

表4 白背叶根提取物对蛋清致小鼠足趾肿胀的影响 （±s，n=10）

肿胀度（%）1 h 2 h 3 h 4 h空白对照组 — 0.16±0.03 48.72±22.25 63.79±24.67 53.01±20.96 34.53±18.97地塞米松组 0.006 0.16±0.02 11.82±6.84② 34.78±12.36② 27.61±12.86② 8.85±3.73②白背叶根高剂量组 0.717 0.18±0.02 23.00±11.54② 41.42±17.29② 34.55±18.77② 20.15±10.47白背叶根中剂量组 0.358 0.16±0.02 21.42±8.34② 42.45±14.44① 34.96±13.64① 21.08±15.32白背叶根低剂量组 0.179 0.17±0.03 32.14±11.49 48.07±15.28 37.78±10.66 25.35±13.20组 别 剂量（g/kg）给药前足趾体积（ml）

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