青果葛根配伍液对醉酒大鼠肝脏损伤的保护作用研究＊

何鸿雁李 华杨 艳汪春梅陈 润

1 泸州医学院公共卫生系，四川省泸州市 646000； 2 泸州医学院药理教研室

青果葛根配伍液对醉酒大鼠肝脏损伤的保护作用研究＊

何鸿雁1李 华2杨 艳1汪春梅1陈 润1

1 泸州医学院公共卫生系，四川省泸州市 646000； 2 泸州医学院药理教研室

目的：利用大鼠醉酒模型观察青果葛根配伍使用对醉酒大鼠肝匀浆中谷草转氨酶（AST）、丙氨酸转氨酶（ALT）和γ－谷氨酰转肽酶（γ－GT）活力的影响，探讨青果葛根配伍使用对醉酒大鼠肝损伤的保护作用。方法：将60只SD大鼠随机分为5组：空白对照组、模型组、青果葛根配伍使用低剂量组、青果葛根配伍使用中剂量组、青果葛根配伍使用高剂量组。采用白酒灌胃造模，连续灌胃4d后称量大鼠重量，处死，取出肝脏后将大鼠肝脏制成肝匀浆并检测AST、ALT和γ－GT活力水平。结果：模型组大鼠肝脏三项生化指标与其他各组相比差异都具有统计学意义（P＜0.05）；空白组及青果葛根配伍使用高、中、低剂量组肝匀浆中AST、ALT和γ－GT水平低于模型组，其差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：醉酒大鼠肝脏组织AST、ALT和γ－GT均有不同程度升高，青果葛根配伍使用对上述指标有调控作用，对肝脏具有保护作用，拥有良好的解酒功效，且其解酒功效随着剂量的增加而增加。

青果葛根配伍使用 解酒 AST ALT γ－GT

在我国，酒是一种非常悠久的传统饮品，是我国最大的消费品之一，受到广大消费者的青睐，适量饮酒可怡情而有益健康，但过度饮酒会给人们带来诸多伤害如引起头痛、眩晕、呕吐、神经模糊等症状，严重的会对肝、胃、脾等内脏器官造成伤害，引起机体生理紊乱。本地特色农产品青果具有清热解毒、利咽生津等功效[1～3]，葛根具有清凉下火、开胃消食、利尿解酒的特效[4～6]，两者自古以来都是解酒良药[7，8]，但尚无将其配伍使用制成解酒产品的先例，故利用大鼠建立醉酒模型研究青果葛根配伍使用的解酒作用，以明确青果葛根配伍使用的解酒效果，为新解酒产品的研制提供相应的理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 造模物：北京红星二锅头白酒（56度），北京红星股份有限公司生产，生产批号20110201。

1.1.2 受试物：青果葛根配伍液（原使用由泸州市科技局青果葛根配伍液课题组提供），分为3种剂量：高剂量为原使用（液体）；中剂量为原使用1∶1兑蒸馏水使用；低剂量为1∶2兑蒸馏水使用。

1.1.3 对照物：蒸馏水（由本实验室自制）

1.1.4 实验动物及分组：同一批健康SD大鼠60只（购自泸州医学院动物科），雌雄各半，体重（200± 60）g。随机分成5组：空白对照组、模型组、青果葛根配伍液低剂量组、青果葛根配伍液中剂量组和青果葛根配伍液高剂量组，每组12只。空白组不给酒和使用，模型组只给酒不给使用，低剂量组给酒并给予低剂量青果葛根配伍液，中剂量组给酒并给予中剂量青果葛根配伍液，高剂量组给酒并给予高剂量青果葛根配伍液。

1.1.5 试剂与仪器：（1）试剂：由南京建成生物工程研究所提供的AST（C010－1）试剂盒、ALT（C009－1）试剂盒、γ－GT（C107）试剂盒；冰醋酸（分析纯，乙酸浓度≥99.5%市售）；生理盐水（由本实验室自制）。（2）仪器：S648型电热恒温水浴箱（上海医疗器械厂）；ZX6006台式高速离心机（法国Jouan公司使用）；722型可见光分光光度计（上海奥析科学仪器有限公司）；WKYIII－1000型微量移液器（上海佳安分析仪器厂）；HM－200分析天平（上海天平仪器厂）。

1.2 实验方法

1.2.1 造模及给药剂量：采用灌胃法进行造模，先灌青果葛根配伍液，半小时之后给56度北京红星二锅头白酒，均按7.5gkg给予；2次d，上下午各1次，每次间隔4h以上，连续4d。空白组给予等量蒸馏水，模型组以等量蒸馏水代替使用。每次灌胃前2h禁食、禁饮，实验期间其余时间各组大鼠均予饮用水及全价营养颗粒饲料喂养。

1.2.2 标本采集、制备及指标检测：饲养过程中观察大鼠一般情况，于第4日末次灌胃2h后，先称体重，处死，暴露腹腔，摘取肝脏。每只大鼠称取200mg左右的肝组织块按重量体积比加用生理盐水制备成10%肝匀浆，1 000～3 000转min，离心10min，然后取组织匀浆上清再用生理盐水按1∶9稀释成1%的肝匀浆，待测。按照ALT、AST、γ－GT试剂盒说明书检测各组大鼠肝匀浆谷草转氨酶（AST）、丙氨酸转氨酶（ALT）、γ－谷氨酰转肽酶（γ－GT）水平，并记录。

1.3 统计学方法 应用SPSS18.0统计软件分析数据，实验数据以均数±标准差（±s）表示，结果用单因素方差分析，组间比较用SNK法检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组大鼠肝匀浆AST结果比较 由表1可见，模型组肝匀浆中AST均值较空白对照组明显升高，经统计学单因素方差分析：各组大鼠肝匀浆AST含量差异总体上有统计学意义（P＜0.05），进而进行各组两两比较，其中模型组与低剂量组肝匀浆AST含量差别无统计学意义（P＞0.05），其余各组之间两两比较均有差异（P＜0.05）。AST均值从低、中、高剂量组逐渐下降。

2.2 各组大鼠肝匀浆ALT结果比较 由表2可见，模型组肝匀浆中ALT均值较空白组明显升高，经统计学单因素方差分析：各组大鼠肝匀浆ALT含量差异总体上有统计学意义（P＜0.05），进而进行各组两两比较，其中中剂量组与高剂量组肝匀浆ALT含量差别无统计学意义（P＞0.05），其余各组之间两两比较均有差异（P＜0.05）。ALT均值从低、中、高剂量组逐渐下降。

表1 各组大鼠肝匀浆AST结果比较（±s）

表1 各组大鼠肝匀浆AST结果比较（±s）

组别n AST（Ugprot）空白对照组12155.127±42.733模型组12 311.906±59.333低剂量组12 283.689±53.069中剂量组12 233.609±47.348高剂量组12199.165±66.987

表2 各组大鼠肝匀浆ALT结果比较（±s）

表2 各组大鼠肝匀浆ALT结果比较（±s）

组别n ALT（Ugprot）空白对照组12161.082±22.208模型组12 357.664±44.916低剂量组12 267.579±38.620中剂量组12 228.560±44.151高剂量组12202.896±38.433

2.3 各组大鼠肝匀浆γ－GT结果比较 由表3可见，模型组肝匀浆γ－GT均值较空白对照组明显升高，经统计学单因素方差分析：各组大鼠肝匀浆γ－GT含量差异总体上有统计学意义（P＜0.05），进而进行各组两两比较，其中低剂量组与中剂量组肝匀浆γ－GT含量差异无统计学意义（P＞0.05），中剂量组与高剂量组肝匀浆γ－GT含量其差异无统计学意义（P＞0.05），其余各组之间两两比较均有差异（P＜0.05）。γ－GT均值从低、中、高剂量组逐渐下降。

表3 各组大鼠肝匀浆γ－GT结果比较（±s）

表3 各组大鼠肝匀浆γ－GT结果比较（±s）

组别nγ－GT（Ugprot）空白对照组124.841±0.844模型组12 8.771±1.423低剂量组12 7.716±1.104中剂量组12 7.300±1.038高剂量组126.459±1.341

3 讨论

近年来，随着我国国民经济的发展、生活方式和饮食结构的改变，饮酒者和饮酒量明显增加。醉酒是指一次饮酒过量而导致的消化系统、呼吸系统、中枢神经系统、心脑血管系统等的损伤过程[8]。过量饮酒不仅可以诱发或导致许多疾病，如心脑血管疾病、消化系统疾病、精神障碍、乙醇依赖等，同时还可能会降低自我行为的控制能力，引起行为异常，还可能引发许多意外事故甚至犯罪[9]。目前，在我国，酒精性肝损伤已经成为仅次于病毒性肝炎的主要肝损伤原因，酒精性肝病（Alcoholic liver disease，ALD）的发病率也呈逐年增加趋势，严重威胁人民健康[10]。

酒对人体的影响可用诸多指标反映，本实验采用大鼠肝匀浆中AST、ALT和γ－GT为检验指标，反映青果葛根配伍使用的解酒效果。AST主要存在于肝细胞浆和线粒体中，ALT主要存在于肝细胞原浆的可溶部分。醉酒时机体内可产生大量的活性氧，活性氧可将细胞卵磷脂中多价不饱和脂肪酸过氧化而生成自由基，致细胞膜脆弱化，透过性亢进；活性氧又有对脂质高亲和性的特点，既损害细胞膜，又损害线粒体膜，细胞内转氨酶被大量释放，故转氨酶是肝细胞损害的敏感标志，也是乙醇所致肝损伤最敏感的指标，是肝细胞损伤的“金标准”[11，12]。葛根可以显著降低酒精性肝损伤模型中大鼠血清的AST、ALT水平[11，13，14]。本实验中模型组肝匀浆中AST、ALT含量均较其他组高，低剂量组肝匀浆中AST、ALT含量高于中、高剂量组，表明青果葛根配伍使用能减轻酒精对肝细胞的损伤，减少AST、ALT的释放，从而降低AST、ALT水平，对肝细胞有保护作用，且其效果随着青果葛根配伍使用剂量的增加而加强。γ－GT在肝内主要存在于肝细胞浆和肝内胆管上皮[15]，是γ－谷氨酰循环的关键酶，分解谷胱甘肽（γ－谷氨酰半胱氨酰甘氨酸，GSH）及其S－结合物，并促进细胞内GSH的重新合成，酒精中毒者γ－GT明显升高[16]。实验中模型组肝匀浆中γ－GT含量较其他组高，且低剂量组γ－GT高于高剂量组，表明青果葛根配伍使用能有效降低醉酒模型肝脏内γ－谷氨酰转肽酶的水平，对肝脏具有保护功效，且其效果随着青果葛根配伍使用剂量的增加而增强。

通过上述实验研究可见在地方特色农产品青果提取液中加入葛根，两者配伍使用可通过对AST、ALT和γ－GT的显著调节作用减轻酒精对肝细胞损害，改善肝功能，对肝脏有保护作用；且其解酒功效在一定范围内随着剂量的增加而增加，故拥有良好的解酒功效。

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The Protective Effects of Fructus Canarii and Puerariae Combination Treatment on Alcohol－induced Rat Liver Injury

HE Hongyan＃，LI Hua，YANG Yan，et al.＃Department of Public Health of Luzhou Medical College，Luzhou City，Sichuan Province 646000

Objective：To investigate the protective effects of fructus canarii and puerariae combination treatment on alcohol－induced rat liver injury through testing the activities of AST，ALT andγ－GT in liver homogenates of drunk rat.Methods：Sixty Sprague－Dawley（SD）rat were divided into five groups，including blank group，model group，low－dose fructus canarii and puerariae treatment group，middle－dose fructus canarii and puerariae treatment group and high－dose fructus canarii and puerariae treatment group.After 4days of liquor gavage，rats were sacrificed.The levels of AST，ALT andγ－GT of rat liver were measured.Results：Compared with other groups，the difference of the levels of AST，ALT andγ－GT of model group is significant（P＜0.05）.The levels of AST，ALT andγ－GT of blank group and fructus canarii and puerariae treatment group are lower than that of model group，and the difference is significant（P＜0.05）.Conclusion：The levels of AST，ALT andγ－GT are increased in the liver of drunk rat.Fructus canarii and puerariae combination treatment can reduce the levels of AST，ALT andγ－GT in drunk rat，and significantly inhibit liquor－induced rat liver injury.Moreover，fructus canarii and puerariae combination treatment exerts the anti－alcohol effects in an dose－dependent manner.

Fructus canarii and puerariae combination treatment，Anti－alcohol effects，AST，ALT，γ－GT

R－332

A

1001－7585（2015）12－1541－03

2015－01－27

（编辑落落）

四川省卫生厅项目（100217）；泸州市科技局项目[泸市科函（2008）23]。通讯作者：陈润